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小鼠DUSP13'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定
被引量:
4
1
作者
温晓梨
孙宏卫
+3 位作者
欧小利
王妮
梅柱中
姜勇
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期265-268,共4页
目的建立小鼠双特异性磷酸酶1(DUSP1)3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因表达系统,并对其进行功能鉴定。方法提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过PCR扩增获得小鼠DUSP1 3'-UTR全长序列,酶切后克隆至pGL3-cont...
目的建立小鼠双特异性磷酸酶1(DUSP1)3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因表达系统,并对其进行功能鉴定。方法提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过PCR扩增获得小鼠DUSP1 3'-UTR全长序列,酶切后克隆至pGL3-control载体荧光素酶编码基因的下游,获得重组载体LuDP,经PCR、限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定正确后与内参照质粒pRL-TK共转染NIH3T3细胞,48h后检测双荧光素酶报告基因的表达。将含有小鼠DUSP1 3'-UTR的荧光素酶表达模块与来源于pRL-TK质粒的RL表达模块克隆至pLenti6-TR质粒中,获得双荧光素酶报告基因表达载体LuDP/RL,将其与RNA结合蛋白HuR表达载体(pcDNA3.1-HuR-FLAG)、mmu-miR-101a分别共转染NIH3T3细胞,检测双荧光素酶的活性,分析HuR、mmu-miR-101对荧光素酶基因表达活性的影响。结果成功构建了双荧光素酶报告基因表达载体。小鼠DUSP1 mRNA 3'-UTR可显著下调与其相连的荧光素酶的表达活性(0.14±0.01倍,P<0.01);共转染HuR可上调荧光素酶的表达活性(1.40±0.20倍,P<0.05),共转染mmu-miR-101a则可下调荧光素酶表达活性(0.57±0.18倍,P<0.05)。结论成功构建了DUSP1 3'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统,该系统可用于转录后调控元件对小鼠DUSP1基因表达的调控机制研究。
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关键词
荧光素酶类
基因
报告
转录
遗传
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职称材料
题名
小鼠DUSP13'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定
被引量:
4
1
作者
温晓梨
孙宏卫
欧小利
王妮
梅柱中
姜勇
机构
广州南方医科大学病理生理教研室、广东省蛋白质组学重点实验室
出处
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期265-268,共4页
基金
国家自然科学基金(81070955,81030055)~~
文摘
目的建立小鼠双特异性磷酸酶1(DUSP1)3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因表达系统,并对其进行功能鉴定。方法提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA,以其为模板通过PCR扩增获得小鼠DUSP1 3'-UTR全长序列,酶切后克隆至pGL3-control载体荧光素酶编码基因的下游,获得重组载体LuDP,经PCR、限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定正确后与内参照质粒pRL-TK共转染NIH3T3细胞,48h后检测双荧光素酶报告基因的表达。将含有小鼠DUSP1 3'-UTR的荧光素酶表达模块与来源于pRL-TK质粒的RL表达模块克隆至pLenti6-TR质粒中,获得双荧光素酶报告基因表达载体LuDP/RL,将其与RNA结合蛋白HuR表达载体(pcDNA3.1-HuR-FLAG)、mmu-miR-101a分别共转染NIH3T3细胞,检测双荧光素酶的活性,分析HuR、mmu-miR-101对荧光素酶基因表达活性的影响。结果成功构建了双荧光素酶报告基因表达载体。小鼠DUSP1 mRNA 3'-UTR可显著下调与其相连的荧光素酶的表达活性(0.14±0.01倍,P<0.01);共转染HuR可上调荧光素酶的表达活性(1.40±0.20倍,P<0.05),共转染mmu-miR-101a则可下调荧光素酶表达活性(0.57±0.18倍,P<0.05)。结论成功构建了DUSP1 3'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统,该系统可用于转录后调控元件对小鼠DUSP1基因表达的调控机制研究。
关键词
荧光素酶类
基因
报告
转录
遗传
Keywords
luciferases
genes, reporter
transcription, genetic
分类号
R349.83 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠DUSP13'-UTR双荧光素酶报告基因表达系统的建立及功能鉴定
温晓梨
孙宏卫
欧小利
王妮
梅柱中
姜勇
《解放军医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
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参考文献
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