离心培养法检测上呼吸道感染患者流感病毒的应用与评价

目的评价离心培养法分离检测流感病毒的敏感性、特异性,探讨其临床应用价值。方法收集2010年1月至2011年2月895份上呼吸道感染患者鼻咽拭子,以传统细胞培养法和离心培养法进行流感病毒培养,并作免疫荧光试验(IF)鉴定。结果广州地区上呼吸道感染患者的流感病毒感染呈两个高峰期,分别为3～5月的春季高峰(以乙型流感病毒为主)和7～9月夏季高峰(甲型流感病毒为主);传统细胞培养分离流感病毒288例,分离率为32%;离心培养分离病毒260例,分离率、敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为29%、89%、99%、98%、95%。结论离心培养法结合IF具有高的敏感性和特异性并能快速报告结果,而且操作简单、节省人力,可实现流感病毒快速分离,适于临床实验室使用。

稳定表达呼吸道合胞病毒非结构蛋白NS1细胞的构建及其生物特性研究

获得稳定表达RSV病毒NS1基因的HEp-2-NS1细胞株并对其生物学特性进行初步研究。采用RT-PCR方法从RSV病毒中获得NS1全长基因,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,重组载体与包装质粒PIK通过磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293FT细胞,产生的逆转录病毒颗粒感染HEp-2细胞,经嘌呤霉素筛选后得到稳定表达细胞株,用QPCR、细胞病变染色法、RT-PCR和间接免疫荧光法检测细胞中NS1 mRNA和蛋白表达情况。结果表明重组逆转录病毒载体pBABE-NS1经双酶切及测序鉴定正确;筛选获得5株阳性单克隆细胞株,QPCR结果显示HEp-2-NS1细胞有NS1基因扩增,其中d株的相对表达量是正常细胞对照组的8 483倍;在外源干扰素作用下,HEp-2-NS1细胞仍对VSV病毒保持敏感,细胞感染病毒48h后染色结果显示全部死亡;对第3代及第30代细胞的RT-PCR和间接免疫荧光法检测结果显示,导入的NS1基因在HEp-2细胞中不仅能转录成相应的mRNA而且能成功稳定地表达。成功构建了稳定表达RSV病毒非结构蛋白NS1的HEp-2-NS1改造细胞株,为建立适用于临床分离的转基因细胞提供良好的基础。

呼吸病区下呼吸道分离念珠菌的耐药性监测

近年来，随着免疫抑制剂、抗肿瘤药物、广谱抗生素等的广泛应用，艾滋病的流行及器官移植和肺脏介入治疗的大量开展，真菌感染率呈上升趋势。而在临床深部真菌感染中，念珠菌的感染率一直居高不下，是医院感染的绝对优势菌。为了有效控制真菌感染的发生，我们对2003年1月至2007年12月广州医学院第一附属医院呼吸疾病研究所呼吸病区住院患者下呼吸道分离的499株念珠菌进行分析，现将结果报道如下。

非免疫缺陷者肺隐球菌病110例临床分析

目的探讨非免疫缺陷患者肺隐球菌病的临床特征、影像学表现、诊断和治疗，提高对本病的认识。方法对1995年1月至2012年6月本所确诊的110例非免疫缺陷肺隐球菌病患者进行回顾性研究，分析其临床特点。结果肺部隐球菌病以中青年（62例．56．4％）男性（82例，72．7％）多见。临床表现主要为咳嗽（67例，60．9％）、咳痰（43例。39．1％）、发热（21例．19．1％）、胸痛（21例，19．1％）、气促（21例，19．1％）、消瘦（11例，10．0％），亦可无症状（28例．25．5％）。胸部影像学表现为孤立性肿块影（26例，23．6％）、多发结节影（20例，18．204）、斑片实变影（33例，30．0％）、结节影与斑片影共存（31例，28．2％）。病变分布晕下肺多于中上肺（60．0％vs18．2％）、右肺多于左肺（39．1％vs32．7％）的特点．31例（28．2％）双肺均有病变。45例行血清隐球菌抗原乳胶凝集试验，阳性29例（64．4％），弱阳性2例（4．4％），阴性14例（31．1％）。全部病例均经病理确诊。手术切除病灶或足疗程抗真菌治疗可取得理想的疗效。结论肺隐球菌病多发生于无基础肺疾患的男性中青年．临床症状无特异性，影像学改变多样性，易被漏诊、误诊。疑似病例应行血清乳胶凝集试验、经纤维支气管镜或经皮肺穿刺活检确诊，手术切除及足疗程的抗真菌治疗可取得较好疗效。

肺泡微石症3例并文献复习

目的加强对肺泡微石症的认识，提高其诊断率。方法通过中国生物医学文献光盘数据库（CBM-Disk）检索1994年1月至2010年5月有关报道肺泡微石症的文献，剔除重复累计报道病例，结合本院收治的3例，回顾性分析中国人肺泡微石症的临床资料。结果共报道了120例肺泡微石症，男70例（58．3％），女50例（41．7％）。有临床症状者65例，主要表现为咳嗽51例（42．5％）、气促49例（40．8％）、咯痰26例（21．7％）、胸痛18例（15．0％）、胸闷17例（14．2％）、心悸4例（3．3％）、咯血3例（2．5％）。无症状者55例。啼功能检查22例，7例正常，12例呈限制性通气功能障碍，弥散功能下降。120例均行胸部X线检查，显示双肺粟粒影106例，其中92例中下肺粟粒影增加，病灶聚集融合41例，肺门正常104例，心膈模糊55例，线状钙化48例，肺尖气肿1例。结论我国肺泡微石症较为少见，临床症状无特异性，易漏诊、误诊。对可疑患者应及早行胸部高分辨率CT及纤维支气管镜肺活检以确诊。