广州市23019名儿童血铅水平调查

目的 了解广州市儿童的血铅水平。方法 用原子吸收光谱法检测体检儿童血铅值。结果 23019名体检儿童的血铅平均水平为52μg/L，铅中毒率5．43％，男童铅中毒率5．44％，女童铅中毒率4．22％。3岁以下儿童血铅水平与3岁以上年龄组有差异，3岁以上年龄组之间无差异；血铅值随年龄增长而升高，8岁以上儿童血铅值有所下降。结论 广州市地区儿童铅中毒率较低，男女血铅值有差异，7～8岁儿童的血铅值最高。

2005-2006年广州地区儿童甲型流行性感冒病毒感染情况

目的了解2005-2006年广州地区儿童甲型流行性感冒(流感)发病情况。方法取2005年1月1日-2006年12月31日广州地区临床疑诊病毒性上呼吸道感染患儿的咽分泌物,接种到狗肾细胞(MDCK),33℃温箱培养后取上清液进行血凝试验及流感病毒分型鉴定,检测到流感病毒A型抗原阳性572例,应用SPSS14.0软件,采用χ2检验对572例抗原阳性患儿不同年龄、性别及季节发病率及并发症发生情况进行统计学分析。结果检测到甲型流感患儿572例中,1d^7岁占总病例数的87.59%,且并发症发生率随年龄增长而下降。男68.88%,女31.12%,男女并发症发生率分别为50.25%和51.12%,二者比较差异无统计学意义(χ2=0.037P=0.847)。3-8月份病例占79.72%,11-12月份占11.19%,10月份有13例。春(3-5月份)、夏(6-8月份)、秋(9-11月份)、冬(12-2月份)四季并发症发生率分别为53.60%、54.85%、33.90%、37.29%。春季和夏季(χ2=0.072P=0.789)、秋季和冬季(χ2=0.277P=0.599)比较差异均无统计学意义;春季和秋季(χ2=7.411P=0.006)、春季和冬季(χ2=4.181P=0.041)、夏季和秋季(χ2=8.057P=0.005)、夏季和冬季(χ2=4.724P=0.030)比较差异均有统计学意义。结论2005-2006年广州地区儿童甲型流感发病1d^7岁是高峰年龄段,且随年龄增长并发症发生率下降。男性患儿病例数多于女性,但并发症发病率无性别差异。3-8月份是发病高峰季节,其次是11-12月份,10月份也有散发病例,春夏季节流感并发症发生率较秋冬季节高。

HPLC法测定尿免疫化学非反应性白蛋白及其在早期诊断儿童糖尿病肾病中的意义

目的:研究尿免疫化学非反应性白蛋白的检测对早期诊断儿童糖尿病肾病的意义,探讨HPLC法测定尿白蛋白的应用价值。方法:收集58份糖尿病患儿的随机尿标本,分别用高效液相色谱法(HPLC)和免疫比浊法对其进行微量白蛋白检测。结果:标准品和尿液标本的白蛋白出峰时间均为14.3min,58例糖尿病患儿尿液中,由HPLC法和免疫比浊法测定的尿白蛋白分别为9.6-195.1mg/L和0-158.6mg/L,在每份标本中HPLC法的测定结果均高于免疫比浊法(P<0.05)。HPLC法检出的微量白蛋白尿41例(70.7%),免疫比浊法检出22例(37.9%)。结论:HPLC法能检出全部的尿白蛋白,比免疫化学法检测出更多的尿微量白蛋白,可更早期诊断糖尿病患儿是否伴有持续性白蛋白尿。

广州地区婴幼儿感染Noro病毒基因型的初步研究

目的 探讨广州地区婴幼儿腹泻中感染Noro病毒的基因型。方法 用Clustal W比对GⅡ组Noro病毒后，设计处于ORF1与ORF2连接点两旁两对简并引物，进行巢式RT—PCR扩增出目标片段，克隆于T载体上，测定序列，对ORF1与ORF2连接点两旁序列和衣壳蛋白N／S区用Clustal W进行同源性分析，用phylip 3．65软件、邻接法构建进化树。结果 标本NVgz100、NVgz10成功扩增出ORF1与ORF2连接点两旁1208bp片段（相对于Hawaii virus，U07611位置为4476—5683），包含ORF1的3’端RdRp的大部分基因和ORF2基因的5’端的S区。对标本NVgz100、NVgz10与另一实验NVgz01（DQ369797）的1208bp进行同源性分析发现，3份标本与GⅠ组同源性为58％～61％，与GⅡ组同源性为74％～92％；将这3份标本与GⅠ、GⅡ组构建进化树，可发现NVgz100、NVgz10和NVgz01与GⅡ组Bristol等病毒密切相关，将NVgz100、NVgz10和NVgz01的衣壳蛋白N／S区与GⅡ组各基酬型进行同源性比较，发现3份标本与GⅡ4基因型Camberwell、Bristolt Grimsby同源性较高（92％～96％），与其他基因型同源性为70％～73％，以N／S区构建进化树可发现3份标本与Camberwell、Bristol、Grimsby、Lordsdale处于同一簇中。结论 本实验结果表明Noro病毒株以GⅡ组为主，病毒流行的基因型为与Camberwell、Bristol、Grimsby和Lordsdale等密切相关的GⅡ-4基因型。

广州地区小儿乙肝无症状携带者及其父母的HBV DNA基因型研究

目的 扩增HBVDNAS基因 ,建立HBVDNA的分型方法 ,研究家庭中小儿乙肝无症状携带者与其父母的基因型。方法 利用PCR -RFLP基因分型方法 ,扩增HBVDNAS基因 ,以限制性内切酶AvaⅡ ,MboⅠ酶切分型 ;结果 1 2个家庭共 2 7例乙肝无症状携带者血清 ,其中两个家庭儿童与父母的基因型相同 ,均为B型 ;9个家庭儿童与母亲的基因型相同 (7个B型 ,2个C型 ) ,父亲HBVDNA阴性 ;1个家庭儿童与母亲为B型 ,父亲为C型 ,结论 本文利用的分型方法经济实用 ,分型率高 ,广州地区的基因型以B型 ,HBVDNA的传播具有家庭聚集性特点及母婴传播的特点。

广州地区小儿无症状乙肝病毒携带者的基因型研究

目的 扩增HBVDNAS基因 ,建立HBVDNA的分型方法 ,研究广州地区小儿无症状乙肝病毒携带者(AsC)的基因型 .方法 利用PCR -RFLP基因分型方法 ,扩增HBVDNAS基因 ,以限制性内切酶AvaII、MboI酶切分型 .结果 6 0份AsC血清样本 ,B型 37份 (6 2 .7% ) ,C型 2 0份 (33.3% ) ,B、C混合型 2份 (3.3% ) ,未分型 1份 (1.7% ) ,经序列分析证明为C型 ,C型共 35 % .结论 PCR -RELP分型方法经济实用 ,分型率达 98.3% ,广州地区小儿乙肝病毒的基因型以B型和C型为主 。

271例儿童染色体异常核型分析及其与疾病关系

对临床诊断有精神运动发育迟缓、脑瘫、先天畸形、特殊面容、智力低下、身材矮小、外生殖器异常等1125例患儿进行了外周血淋巴细胞染色体G显带检查,检出染色体异常核型271例。检出率为24·1%。其中常染色体数目异常197例,常染色体结构异常42例,性染色体数目异常17例,性染色体结构异常15例。检出异常核型尤以21三体为主。提示染色体异常与儿童智力低下及发育异常有密切关系,21三体综合征(Down′ssyndrome)仍是最常见染色体病,有效控制及预防染色体病的发生对提高人口素质十分必要。

2004年广州地区流行的3型腺病毒六邻体基因序列分析

[目的]分析2004年夏广州市某幼儿园流行的3型腺病毒(adenovirus type 3,Ad3)的六邻体基因序列,为 Ad3的基础及临床研究提供依据。[方法]采集急性咽结膜炎患儿急性期的眼、咽拭子,提取腺病毒DNA,分两段进行 PCR,扩增腺病毒六邻体基因,将扩增的片断进行T-载体克隆及序列分析。[结果]成功地测出了Ad3六邻体基因序列,并在Genebank登记注册,注册号AY878716,与Genebank中Ad3六邻体基因序列进行同源性比较,同源性为99％。 [结论]腺病毒(Ad3)六邻体基因序列,并与(Genebank中Ad3六邻体基因序列变异是否与其毒力的改变和致病性、传染性相关,尚需作进一步的研究探索。

儿童呼吸道腺病毒3型爆发流行的病原学研究

目的探讨广州市某幼儿园爆发流行的急性咽结膜热的病毒病原学.方法采集急性咽结膜炎患儿急性期的眼、咽拭子进行PCR及序列分析.结果32份咽拭子中20份PCR阳性,阳性率62.5%,用分型引物检测及序列分析,均证实为单一腺病毒3型感染.结论本次急性咽结膜炎是由腺病毒3型引起.

儿童病毒性脑炎患儿Colti病毒感染研究

目的:了解儿童病毒性脑炎患儿C olti病毒感染的情况。方法:酶联免疫吸附试验(E LISA)法检测2000年1月至2003年12月在广州市儿童医院住院,临床诊断为病毒性脑炎的198例患儿血清标本263份(双份血清65例,单份血清133例)的IgG抗体。用反向被动血凝抑制试验检测乙脑病毒抗体。结果:65例患儿的双份血清C olti病毒抗体滴度呈4倍或以上增高的7例,阳性率为10.8%(7/65),其中8倍或16倍升高者5例(7.7%,5/65),可以确诊为C olti病毒感染。133例患儿的单份血清阳性为10例,阳性率为7.5%(10/133)。两种方法检测的结果,有4种血清抗体反应类型,第1种是仅查到C olti病毒抗体,占2.53%(5/198);第2种是仅查到乙脑病毒抗体,占2.53%(5/198);第3种是既查到C olti病毒抗体,又查到乙脑病毒抗体,占6.06%(12/198);第4种是既未查到C olti病毒抗体,又未查到乙脑病毒抗体,占88.88%(176/198)。结论:以上检测为我市首次检测到C olti病毒抗体,说明我市不仅存在C olti病毒引起的感染,而且也存在C olti病毒引起的脑炎患者。

IGF-1和IGFBP-3在生长激素缺乏的矮小儿童诊断中的意义和价值

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)在诊断儿童生长激素缺乏中的价值。方法采用化学发光法检测50例正常儿童,52例生长激素缺乏(GHD)患儿及45例特发性矮小(ISS)患儿的血清IGF-1和IGFBP-3的水平并进行两两比较。结果GHD组、ISS组和正常儿童组间比较均有显著性差异(P<0.05)。CGHD患儿IGF-1的敏感性为95.5%,特异性73.1%,试验的正确性83.5%;IGBP-3的敏感性为97.7%,特异性82.6%,试验的正确性89.7%。IGF-1和IGFBP-3同时检测的敏感性为95.5%,特异性84.6%,试验的正确性89.7%。结论GHD患儿的IGF-1和IGFBP-3均低于正常,两者同时检测比单独检测可能更具有诊断的正确性,可以作为诊断GHD的指标之一。

儿童乙肝血清标志物模式与病毒含量的关系

目的探讨儿童乙肝DNA与抗原抗体模式及ALT,AST的关系。方法检测血清DNA,抗原抗体,ALT,AST。结果共检出11种的血清标志物模式,HBsAg和HBeAg阳性的HBVDNA阳性率为94.6%,平均含量为106.88±1.14/ml,明显高于其他模式。HBVDNA水平与ALT,AST高低无相关性。结论儿童乙肝患者HBsAg和HBeAg均为阳性模式HBV载量显著高于HBeAg阴性模式。HBeAg阴性模式少数人HBV载量较高。乙肝病毒量的多少并不影响肝功能受损的程度。

儿童手足口病142例临床分析

目的 :观察手足口病的临床特点。方法 :对 1 4 2例手足口病患儿进行临床观察 ,84例患儿分别取咽拭子、水疱液、大便做病毒分离 (其中 6 9例仅取咽拭子、3例仅取水疱液、3例仅取大便、3例同时取咽拭子及水疱液、6例同时取咽拭子及大便 )。全部病例给予利巴韦林口服治疗。结果 :本组病例以1岁～ 4岁为主 (71 8% )。手足均有皮损 1 4 1例 (99 3% ) ,口腔粘膜受累 1 1 2例 (78 9% ) ,臀、膝前、肘伸侧受累分别为 1 1 8例 (83 2 % )、1 0 4例 (73% )和 1 0 0例 (70 4 % )。 78例取咽拭子、9例取大便、6例取水疱液做病毒分离的患儿中 ,肠道病毒阳性分别为 2 7例 (34 6 % )、5例 (5 5 6 % )和 4例 (6 6 7% )。 3例同时取咽拭子与水疱液做病毒分离 ,2例肠道病毒均为阳性 ,6例同时取咽拭子及大便做病毒分离 ,3例肠道病毒均为阳性。其中 2例肠道病毒阳性标本进行逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR) ,证实为肠道病毒71型。本组病例经 4天～ 6天痊愈。结论 :除手、足、口是手足口病常见受累部位外 ,臀、膝前、肘伸侧也是常见发疹部位。

广州地区儿童诺如病毒性腹泻的分子流行病学研究

目的应用TaqMan实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-timeRT—PCR）法检测诺如病毒（norovirus，NV）的发病情况，为儿童NV腹泻的临床治疗或病毒爆发流行的预防、控制及疫苗的研制提供流行病学资料。方法随机收集2006年12月至2007年12月广州地区急性腹泻病患儿水样便或蛋花汤样便，应用针对病毒ORF1与ORF2连接区域设计的引物及TaqMan探针进行实时荧光RT—PCR检测标本。并将NV阳性标本进行克隆并测序，结合检测结果以确定此周期内NV的流行情况及优势毒株。结果本研究从1260份标本中检测出NV阳性257份（20．40％），其中GⅠ型87份（6．90％），GⅡ型214份（16．98％），GⅠ和GⅡ混合感染44份。测序分析后发现GI毒株检出率依次为GⅠ-3、GⅠ-2及GⅠ-4；GⅡ毒株检出率依次为GⅡ-4、GⅡ-3及GⅡ-7。NV主要感染年龄为2岁以内婴幼儿，发病高峰期在11至12月。结论NV已经成为广州地区婴幼儿腹泻的重要病原体之一，GⅡ-4型是2007年主要流行病毒株。

2001年广州市婴幼儿杯状病毒腹泻病的基因研究

目的 了解广州地区婴幼儿腹泻病杯状病毒感染的特点及病毒的基因型。方法 收集 2 0 0 1年 11～ 12月因非细菌性腹泻病而来我院门诊或住院的患儿粪便共 2 2例。使用RT PCR方法对大便标本进行杯状病毒检测。杯状病毒RT PCR阳性的标本分别克隆到PMD18 T载体中后 ,转化进入大肠杆菌DH5a感受态细胞 ,通过蓝、白斑挑选克隆 ,用限制性内切酶EcoRI和BamHI筛选克隆 ,用PCR鉴定阳性克隆。序列测定由宝生物工程 (大连 )公司完成。结果 2 2例标本中杯状病毒RT PCR阳性 2例 ,杯状病毒阳性率 9% (2 / 2 2 )。测序位置为RNA多聚酶片段。序列分析结果为诺沃克样病毒基因 2型 ,与北京CR84 0共享序列非常接近。结论 杯状病毒是广州地区婴幼儿腹泻病的病原之一。基因分析为诺沃克样病毒基因 2型。

牛结核病荧光定量PCR快速检测方法的建立及初步应用

目的建立牛结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法根据分枝杆菌的插入序列IS1081设计引物和探针,优化反应条件,建立标准曲线,进行特异性、敏感性、重复性实验,并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果该方法的敏感性达到了10个拷贝,且特异性高,重复性好。对30份PPD试验和巢式PCR检测都为阳性的临床样本进行荧光定量PCR检测的结果全部为阳性;而对PPD检测阳性,巢式PCR检测为阴性的15份临床样本进行检测时,2份为阳性;在对2份PPD检测阴性而巢式PCR检测阳性的临床样本的检测结果也为阳性。结论成功建立了牛结核病荧光定量PCR快速检测方法,对临床样品的快速检测和牛结核病的早期诊断具有重要意义。

原发性肾病综合征患儿外周血单个核细胞核因子-κB活性变化及黄芪的干预作用

目的探讨核因子-κB(NF-κB)在儿童原发性肾病综合征(PNS)发病机制中的意义及黄芪对PNS患儿外周血单个核细胞(PBMC)NF-κB活性的影响。方法选取25例PNS患儿(PNS组)和20例健康儿童(健康对照组)作为研究对象。抽取所有研究对象5mL静脉血并提取PBMC,分别加入NF-κB刺激剂IL-1β、NF-κB抑制剂对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)及黄芪注射液。经培养后离心,留细胞沉渣提取核蛋白,采用ELISA检测其NF-κB活性。结果PNS组PBMC的NF-κB活性较健康对照组明显增高(P<0.05)。在常规培养状态下黄芪明显降低PNS组NF-κB活性(P<0.05),但不影响健康对照组NF-κB活性(P>0.05)。经IL-1β刺激后,PNS组和健康对照组NF-κB活性均增高,黄芪可降低IL-1作用后的NF-κB活性(P<0.05);经TPCK抑制后,PNS组和健康对照组NF-κB活性均降低,黄芪提高TPCK作用后的NF-κB活性(P<0.05);黄芪对PNS组PBMCNF-κB活性的影响较健康对照组明显(P<0.05)。结论PNS患儿PBMC的NF-κB活性上调,黄芪降低PNS患儿PBMC的NF-κB活性,NF-κB可能是黄芪治疗PNS的作用环节之一,黄芪对PBMC的NF-κB信号途径具有双向调节作用。

核因子-κB对原发性肾病综合征患儿IL-8调控及黄芪的干预作用

目的观察NF-κB对原发性肾病综合征患儿IL-8调控及黄芪干预作用。方法在原发性肾病综合征患儿和正常儿童外周血单个核细胞中,分别加NF-κB的刺激剂、抑制剂及黄芪,测IL-8浓度和NF-κB活性。结果肾病患儿NF-κB活性及IL-8含量增高,2者呈正相关;IL-1β刺激后,黄芪降低肾病患儿NF-κB活性及IL-8含量、降低正常儿童NF-κB活性而不影响IL-8含量;用对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮(TPCK)抑制后,黄芪可提高肾病患儿NF-κB活性及IL-8含量、提高正常儿童NF-κB活性;而不影响IL-8含量。结论原发性肾病综合征患儿NF-κB活性上调及IL-8水平增高,黄芪通过抑制NF-κB过度活化从而下调IL-8过高表达继而发挥效应;黄芪对NF-κB活性有双向调节作用。

实时荧光聚合酶链反应方法在2006年广州地区儿童流行性感冒病毒监测中的应用

目的应用实时荧光聚合酶链反应（PCR）方法检测流感病毒，并对2006年广州地区儿童感染流感病毒进行流行病学分析。方法以流感病毒的NP基因序列为参考，综合分析GenBank上的NP基因序列，使用引物和探针设计软件Primer Express设计A／B型流感病毒及A亚型流感病毒各1对特异性引物和1条TaqMan荧光探针，用于分别检测A／B型流感病毒及A亚型流感病毒，建立实时荧光PCR方法，进行灵敏度和特异性检测。采用实时荧光PCR方法，对来自2006年门诊或住院呼吸道感染患儿的12301份咽拭子或鼻腔抽洗液样本进行检测，并与病毒分离方法进行对照。结果实时荧光PCR方法共检出1687份阳性样本，总阳性率为13．71％，其中A型773份（45．8％），全部为H1N1型；B型914份（54．2％）。1—4月份检出流感病毒阳性525例，其中B型流感病毒455例（86．7％），A型（H1N1）流感病毒70例（13．3％）；5—8月份检出流感病毒阳性1118例，其中B型流感病毒419例（37．5％），A型（H1N1）流感病毒699例（62．5％）。病毒培养分离阳性为1380份，均为实时荧光PCR方法阳性，占实时荧光PCR方法阳性者的81．80％。结论实时荧光PCR方法应用于流感病毒的检测具有简便快捷、特异、敏感的特点，2006年广州地区儿童流行性感冒病毒的流行1—4月份以B型流感病毒为主，5—8月份以H1N1亚型流感病毒为主。