广州地区汉族人群Y染色体多个STR位点的研究

为建立一套高度多态且实用性强的Ｙ－ＳＴＲｓ标记系统，本文用ＰＣＲ结合银染显色技术研究了１１１例广州汉族男性ＤＹＳ１９、ＤＹＳ３８９Ⅰ／Ⅱ、ＤＹＳ３９０等位基因及单倍型分布状况。结果显示：广州地区汉族男性ＤＹＳ１９位点有Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ａ５五种等位基因，出现频率分别为１８．９％、３６．０％、３６．０％、７．２％、１．８％；ＤＹＳ３８９Ⅰ位点有Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４四种等位基因，出现频率分别为６．３％、５２．２％、１７．１％、２４．３％；ＤＹＳ３８９Ⅱ位点有Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５五种等位基因，出现频率分别为１１．７％、３８．７％、２２．５％、１７．１％、９．９％，ＤＹＳ３９０位点有Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５五种等位基因，出现频率分别为２．７％、９．９％、４６．８％、２７．９％、１２．６％；χ２检验表明上述各等位基因分布存在明显的地域差异。此外，还观察到７２种由上述座位共同构成的单倍型，单倍型多样性达０．９８０。

广州汉族人群DYS19、DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS390多态性及其单体型

用PCR结合PAGE技术观察111例广州汉族男性DYS19、DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS390等位基因及单体型分布状况。结果显示 :广州地区汉族男性DYS19基因座观察到5种等位基因 ,DYS389Ⅰ观察到4种等位基因 ,DYS389Ⅱ观察到5种等位基因 ,DYS390观察到5种等位基因 ;χ2 检验表明上述各等位基因频率分布与其他地区人群存在明显的差异。此外 ,还观察到72种由上述基因座共同构成的单体型 ,单体型多样性达0 953。

连接蛋白43与心性猝死的相关性研究进展

部分心性猝死者死后尸检时心脏没有发现明显病理学异常征象,过去均将其归属原因不明的猝死范畴。近年来研究显示,心肌连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达对于心性猝死的诊断具有十分重要的意义。本文就Cx43结构、功能以及在心血管疾病发生发展中的作用与法医学意义作一综述。

23-plex Y-SNPs复合扩增体系在法医学应用的研究

【目的】应用SNaPshot技术建立23-plexY-SNPs的复合扩增体系,研究其在法医学中的应用价值。【方法】从Y染色体单体群命名树上选择23个Y-SNP位点:P164、P203、P148、P145、M89、P151、M216、P128、P157、P149、P131、P199、P123、P191、P201、M111、M9、P132、P200、P197、M119、P136和M134,进行复合PCR扩增,PCR产物纯化后利用荧光标记单碱基延伸技术(SNaPshot试剂盒)结合毛细管电泳技术对单核苷酸多态性进行检测,应用该体系调查了290名广东地区无亲缘关系的男性个体。【结果】所建立的23个Y-SNPs检测体系,各位点均具有遗传多态性,基因多样性范围为0.0137～0.4912。在290名男性中检测到143个单体型,单体型多样性为0.9907。【结论】该23个Y-SNPs检测体系能快速而准确的对样本进行SNP分型,在法医学、人类学和相关学科的研究中具有较高的应用价值。

病毒性心肌炎差异表达蛋白MYL4的筛选鉴定及表达研究

目的:调查心肌肌球蛋白轻链4(myosin light polypeptide 4,MYL4)在病毒性心肌炎损伤中的作用。方法 :随机将Balb/c小鼠分为实验组(n=30)和对照组(n=10),实验组用于建立柯萨奇病毒B3病毒性心肌炎小鼠模型,分别在病毒感染后第3、7、14天留取心脏及血清标本。利用差异蛋白质组学的方法鉴定了部分的病毒性心肌炎差异表达蛋白,并对其中一个分子MYL4在病毒性心肌炎发病中的作用进行研究。结果:质谱鉴定6个差异表达分子分别为:MYL4、热休克蛋白B1、异柠檬酸脱氢酶a亚单位、电压依赖的阴离子通道蛋白、蛋白酶体a亚单位1型和巨噬细胞封端蛋白。Western blot及ELISA验证发现MYL4在病毒性心肌炎小鼠心脏组织及血清中表达明显升高(P<0.01),且ELISA结果显示MYL4的表达与疾病严重程度呈正相关(r=0.97,P<0.00)。结论:MYL4在病毒性心肌炎组织及血清中表达升高,参与了病毒性心肌炎的发生发展。

106例中国人vWA位点的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色技术，检测了人类血管性假血友病因子（ｖＷＦ）基因内含子４０中的ｖＷＡ位点等位基因及其无亲缘关系的随机个体频率。调查了１０６例中国人无关个体，发现该位点有８个等位基因，其大小为１３８－１６６ｂｐ，１８种基因型，符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律。１０个２代家系和１个４代家系调查结果表明ｖＷＡ位点的遗传符合孟德尔定律。此位点的杂合度为０．７８７，多态信息含量（ＰＩＣ）为０．７７２，具有高度遗传多态性。实验结果表明，该位点能较好地解决法医学上因生物检材量少和ＤＮＡ降解等难以进行鉴定的疑难问题，在法医学应用上具有重要价值。

荧光标记STR分型技术检验腐败组织基因型

探讨腐败组织荧光标记STR分型检测技术的应用价值。应用含12个STR基因座及一个性别基因座的2个荧光标记的复合扩增系统,对40例1～6周的腐败肌肉提取的DNA进行扩增,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,PE377测序仪分析基因型。所检测样本在12个STR基因座均扩增出特异性谱带,并可判定其基因型。荧光标记STR检测技术对腐败组织分型可靠,在实际检案中具有较高的应用价值。

广州地区汉族人群8个Y-STR基因座单倍型的多态性

目的:调查广州地区汉族人群8个Y-STR基因座单倍型的多态性。方法:用PCR及AB I 377测序仪检测111例广州地区汉族男性DYS19、DYS389Ⅰ/Ⅱ、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393及DYS385等位基因及单倍型分布状况。结果:111例广州地区汉族男性中观察到110种单倍型,只有1种单倍型为2个个体所共有,单倍型多样性为0.991。结论:8个Y-STR基因座的单倍型具有高度的多态性,是男性个体识别的良好标记。

窖蛋白与不明原因心源性猝死的相关性研究进展

不明原因心源性猝死(unexpected sudden cardiac death,USCD)因其不伴有心脏结构的异常,尸体解剖呈阴性改变,一直是法医病理学鉴定的热点难题。USCD可能与部分致死性心律失常有关,该类心律失常多由心脏离子通道蛋白或其相关蛋白发生异常所致。窖蛋白可以通过其脚手架区域与多种心肌离子通道蛋白结合,在维持心肌动作电位的去极化和复极化中起到关键作用。当窖蛋白由于基因突变或蛋白表达异常等因素导致其结构和功能受到影响时,受其调控的心肌离子通道的功能也受到损害,继而引起多种离子通道病的发生,出现心律失常甚至心源性猝死。研究窖蛋白对离子通道功能的影响对于探索恶性心律失常及心源性猝死的发生机制具有重要意义。

根据女性胸骨形态变化推算年龄的研究

本文采用多元线性回归分析方法研究中国汉族女性胸骨形态变化与年龄的关系,建立了根据女性胸骨形态变化推算年龄的多元回归方程3项,为法医学和人类学提供了一种从女性胸骨推算年龄的方法.

肠道病毒71型在脑干脑炎婴幼儿脑干中的分布及感染机制

目的观察人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)以及细胞间黏附分子1(intercellular adhesionmolecules-1,ICAM-1)在脑干脑炎死亡的婴幼儿脑干中的表达及分布特点,探讨EV71进入中枢神经系统的机制以及ICAM-1的参与作用。方法收集22例尸检确认为脑干脑炎婴幼儿的脑干组织为实验组,并以10例先天性心脏病死亡婴幼儿的脑干组织作为对照组。选择实验组中镜下小血管呈典型的"袖套样"改变的切片进行EV71-VP1免疫组织化学染色,然后对EV71-VP1阳性的切片进行ICAM-1免疫组织化学染色。染色结果经图像分析和统计学处理,比较实验组和对照组的染色结果。结果 (1)实验组EV71-VP1免疫组织化学阳性染色呈深棕黄色,主要位于脑干星形胶质细胞内,对照组染色呈阴性。(2)ICAM-1阳性呈深棕黄色,在脑干血管周围炎症细胞、胶质小结内的炎症细胞及胶质细胞表达升高,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论EV71可作为脑干脑炎致死婴幼儿法医病理诊断的筛选依据。EV71可能通过血源性侵染脑干,ICAM-1可能在脑干炎症改变过程中起重要作用。

甲基苯丙胺所致的大鼠神经毒性损伤及nNOS抑制剂的保护作用

目的探讨神经元型一氧化氮合酶(nNOS)在甲基苯丙胺(METH)所致大鼠中枢神经系统氧化应激损伤中的作用机制。方法建立METH中毒动物模型,并给予nNOS抑制剂7硝基吲唑(7-NI)预处理,观察各组间动物行为学的变化,并检测nNOS表达、多巴胺(DA)含量、硝基化蛋白表达及凋亡等指标。结果 METH组大鼠纹状体中nNOS蛋白表达水平明显升高,而METH+7-NI组nNOS表达水平较METH组明显降低。METH组DA明显降低(P<0.01),而METH+7-NI组、7-NI组与对照组比较,DA无差异(P>0.05)。METH组硝基化蛋白含量明显升高(P<0.01),而METH+7-NI组硝基化蛋白表达较METH组明显降低(P<0.05)。METH组与对照组相比,凋亡细胞数明显升高(P<0.01),而7-NI对凋亡的增高表现出明显的保护作用(与METH组相比P<0.01)。METH组和METH+7-NI组的动物刻板行为评分均明显高于7-NI和对照组(P<0.01),METH、METH+7-NI组间差异无显著性(P>0.05)。结论METH可导致大鼠大脑纹状体nNOS蛋白表达水平增高、DA含量的降低、硝基化蛋白水平升高及细胞凋亡增多等多种神经毒性表现,7-NI能部分减轻其神经毒性作用。METH明显增加大鼠的不自主刻板运动,而应用7-NI预处理后,对刻板行为的改善并不明显。

大鼠骨髓间质干细胞对同种骨髓移植后造血重建和免疫重建的作用

目的:探讨大鼠骨髓间质干细胞(MSC)对同种异体骨髓移植造血重建和免疫重建的影响。方法:建立大鼠同种异体骨髓移植模型,通过生存率分析、外周血象检测、免疫细胞计数和受体免疫功能检测,综合评价MSC对骨髓移植(bone marrowtransplantation,BMT)后造血重建和免疫重建的作用。结果:(1)MSC可促进BMT后造血重建:移植后30d,共移植组外周血白细胞、淋巴细胞和血小板数均高于单纯骨髓移植组;共移植组骨髓细胞数也高于对照组。(2)MSC可促进BMT后免疫重建:移植后30d,共移植组胸腺细胞数、脾细胞总数均高于骨髓单纯移植组;共移植组对ConA、LPS刺激的淋巴细胞增殖反应以及对第三体来源的同种混合淋巴细胞反应均强于单纯BMT组。结论:大鼠MSC与骨髓共移植对同种异体骨髓移植造血重建和免疫重建有一定促进作用。

中国汉族人群不明原因猝死与NOS1AP基因多态性的相关性

目的研究日常活动中不明原因猝死(sudden unexpected death,SUD)者NOS1AP基因的单核苷酸多态性。方法收集60例一般日常活动中SUD病例心血样本作为SUD组,另外随机抽取80例无关个体的外周血样本作为对照组,提取基因组DNA,用特异性引物对NOS1AP部分SNP位点(rs10494366、rs10918859、rs12143842、rs12742393、rs3751284、rs348624)进行PCR扩增和直接测序,计算等位基因频率和基因型频率,并分析各SNP位点在SUD组与对照组之间的差异性。结果 NOS1AP第6外显子区域的rs3751284位点的等位基因频率和基因型频率在两组人群中的差异均有统计学意义(P<0.05)。rs3751284位点的最小等位基因的频率在SUD组为0.325,在对照组为0.475。结论 rs3751284位点可能是SUD的易感基因位点。

海洛因成瘾大鼠相关脑区多巴胺及其代谢产物的变化

目的初步探索多巴胺(DA)递质释放与海洛因成瘾和神经毒性的相关性。方法建立海洛因成瘾大鼠模型,应用高效液相色谱层析技术检测前额叶皮质、海马、伏隔核和纹状体的DA及其代谢产物3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)的含量。结果海洛因成瘾大鼠前额叶皮质和伏隔核的DA及其DOPAC含量相对于对照组增高(P<0.01,P<0.05),纹状体反而明显降低(P<0.01);海马仅检测到DA且与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);成瘾大鼠的前额叶皮质的DOPAC/DA值比对照组显著增加(P<0.01),而伏隔核和纹状体明显降低(P<0.01)。结论DA的变化进一步证明了包括伏隔核和额叶皮质在内的奖赏系统在海洛因成瘾中的重要作用,DA减少预示纹状体功能受到损害。

病毒性心肌炎猝死心肌MMP-9和TGF-β1表达与心肌纤维化的关系

目的研究病毒性心肌炎心肌MMP-9、TGF-β1表达与心肌纤维化的关系,探讨其在病毒性心肌炎猝死鉴定中的作用。方法筛选30例病毒性心肌炎作为实验组(18例为明确性心肌炎组,12例为界限性心肌炎组),另选10例非病毒性心肌炎作为对照组。Masson染色观察病毒性心肌炎心肌胶原增生的情况;免疫组化法检测MMP-9、TGF-β1的蛋白表达和组织定位,并用图像分析系统及统计学方法进行定量分析。结果病毒性心肌炎组心肌胶原纤维较对照组明显增多;MMP-9、TGF-β1的表达水平明显增高,MMP-9、TGF-β1的表达与心肌胶原纤维增生呈正相关。结论MMP-9、TGF-β1可能在病毒性心肌炎心肌纤维化过程中起重要作用,可以作为病毒性心肌炎猝死的辅助诊断的指标。

肩袖损伤合并腋神经损伤的解剖学特征

目的:探讨肩袖损伤合并腋神经损伤的原因及其临床意义。方法:实验于2005-10/2006-01在南方医科大学解剖学研究所完成。选取南方医科大学解剖学研究所防腐固定的成人尸体16具,男11具,女5具,共32侧。常规解剖显露三角肌、肩袖、四边孔和腋神经,观测腋神经及其分支的体表投影、直径、起始、走行、分布和肩袖的解剖关系。结果:腋神经出四边孔处的体表投影点位于肩峰平面下方3.8～7.2cm,平均(5.0±1.5)cm、三角肌后缘前方2.7～5.6cm,平均(4.0±1.4)cm处。小圆肌支入肌前长约0.8～2.6cm,平均(1.6±0.8)cm,支配小圆肌;后支入肌前长约1.0～4.2cm,平均(2.5±1.5)cm,后支横径为1.3～2.1cm,平均(1.7±0.3)cm,支配三角肌后部和肱三头肌长头附近的皮肤。前支入肌前长约2.0～4.2cm,平均(3.1±0.8)cm,横径为1.7～2.9cm,平均(2.1±0.7)mm,支配三角肌前份和三角肌区下部的皮肤。结论:腋神经内在的解剖因素是肩袖损伤合并腋神经损伤的基础,肩部外伤是肩袖合并腋神经损伤的直接原因,临床应注意避免漏诊。

力竭性运动对病毒性心肌炎小鼠心脏功能及结构的影响

目的探讨力竭性运动对病毒性心肌炎（VMC）小鼠心脏功能和结构的影响。方法采用CVB3病毒感染Balb／c小鼠复制小鼠模型，剧烈过量运动前后定时检测小鼠心电图，观察小鼠12h内的死亡率和14d的总死亡率，计算PR间期变化、心率变化率，普通光镜及电镜观察心肌结构的改变。结果力竭性运动可导致病毒性心肌炎小鼠在运动后12h内和14d的死亡率明显上升，运动前后心率变化、PR间期等指标在病毒性心肌炎组与正常对照组之间差异有统计学意义（P〈0．05）；虽然光镜下没有明显差异，但电镜观察发现，力竭性运动导致了病毒性心肌炎小鼠心肌超微结构异常改变。结论力竭性运动可导致病毒性心肌炎小鼠心脏结构异常和功能衰减，是导致心脏性猝死的独立危险因素。