荧光纳米颗粒标记技术快速检测产enterotoxin B金黄色葡萄球菌的实验研究

目的通过制备SA肠毒素B(enterotoxin B)荧光纳米颗粒单克隆抗体,探讨产enterotoxin B的SA快速检测方法。方法将已构建好的重组质粒载体PET-28a-enterotoxin B转化入E.coli BL21(DE3),进行株中诱导表达,获得表达蛋白,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。再免疫Bal b/c小鼠,制备单克隆抗体荧光纳米颗粒偶联物。最后将多克隆抗体包被,制成免疫层析检测试纸条,并设质控线。将不同浓度的标准菌株混入样品中,收集提取液,在反应杯中与荧光纳米颗粒-单抗偶联物和试纸条共同反应5 min,紫外光下肉眼观察结果。结果实验克隆分子量为798 bp的enterotoxin B基因片段,构建的重组质粒载体能高效表达,获得分子量为34.5 k D的目的蛋白质。单克隆抗体荧光颗粒偶联物与阳性菌株特异性反应,阴性对照菌株无反应。结论研制的荧光纳米颗粒-enterotoxin B单克隆抗体偶联物特异性强、稳定性好且灵敏度高,实现短时间内对产enterotoxin B的SA快速检测。