不同品牌串联质谱仪新生儿遗传代谢病筛查结果比对

目的探讨不同串联质谱检测系统新生儿遗传代谢病筛查结果的可比性和临床接受性。方法采用QSight 210MD串联质谱仪(简称QSight 210MD)和UPLC I-Class Xevo TQD串联质谱仪(简称Xevo TQD)分别检测40例新生儿干血斑样本中的氨基酸、游离肉碱和酰基肉碱水平。参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP9-A2文件,对QSight 210MD与Xevo TQD的批内和批间精密度、相关性及临床可接受性进行评价。结果 QSight 210MD和Xevo TQD各比对项目的批内和批间精密度均<7%,符合临床要求。QSight 210MD与Xevo TQD之间除戊二酰肉碱(C5DC)、己酰肉碱(C6)、辛酰肉碱(C8)项目的r<0.975外,其他项目的r值均>0.975。所有项目的相对系统误差(SE%)均<1/2全国室间质量评价允许总误差(TEa),临床均可接受。结论 QSight 210MD与Xevo TQD之间除C5DC、C6、C8项目外,其他新生儿遗传代谢病筛查项目检测结果的相关性均良好,满足临床要求。对不具有可比性的项目,有必要针对不同检测系统建立不同的参考区间。

新生儿遗传性酪氨酸血症Ⅰ型的护理

遗传性酪氨酸血症I型是由于肝、肾组织中缺乏延胡索酰乙酰乙酸水解酶（FAH）导致酪氨酸代谢障碍所致的疾病。酪氨酸血症I型可分为新生儿型或急性型、慢性型。急性型早期症状主要是易激惹、呕吐、腹泻、发热、低血糖及肝大、黄疸、出血倾向等肝衰竭症状，病情迅速恶化。慢性型主要为进行性肝硬化及肾小管功能受损。国内相关病例报道少，护理方面可借鉴的经验有限，我科2010年8月27日收治1例酪氨酸血症I型的新生儿，现将治疗护理经验介绍如下。

新生儿体重、性别与脐血造血细胞含量的关系

目的:探讨新生儿体重、性别与脐血造血细胞含量的关系,最优化脐血采集前供体的选择标准。方法:回顾性分析2941例脐血的新生儿性别和体重与总有核细胞数(TNC)、CD34+细胞数和总集落数(CFUs)的关系,明确新生儿性别和体重对脐血造血细胞含量的影响。结果:新生儿体重与TNC、采集体积有相关关系(均P<0.01),与总CD34+细胞数、CFUs相关性均差异无统计学意义(均P>0.05)。采集体积、TNC、总CD34+细胞数、CFUs数在不同体重组中差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。不同新生儿性别组采集体积、TNC、总CD34+细胞数、CFUs数均差异有统计学意义(均P<0.05),男性组的采集体积、总CD34+细胞数、CFUs均比女性组高,TNC低于女性组。结论:新生儿体重指标增加到标准化的脐血采集前供体选择标准中将有利于获得更好的采集质量,提高库存脐血的有效性。男性新生儿中脐血造血祖细胞含量较高,新生儿性别可能影响脐血移植的造血潜能。

希特林蛋白缺乏症新生儿早期血氨基酸谱特征及新生儿筛查评估

目的观察早期发病的希特林蛋白缺乏症即Citrin缺陷致新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿在新生儿早期血氨基酸及酰基肉碱谱特点及新生儿筛查敏感性,探讨NICCD新生儿筛查潜在生化指标。方法采用串联质谱技术对2015年1月1日—2019年6月30日在广州市出生的158651例新生儿进行NICCD筛查,回顾分析在广州市妇女儿童医疗中心经SLC25A13基因确诊的55例NICCD患儿的新生儿筛查干血斑氨基酸及酰基肉碱谱,以瓜氨酸≥30μmol/L为NICCD筛查阳性。采用t检验比较真阳性组及假阴性组血斑采集时间,采用F检验比较分析真阳性(瓜氨酸≥30μmol/L)、假阴性(瓜氨酸21-<30μmol/L、瓜氨酸<21μmol/L)及正常对照组之间氨基酸及酰基肉碱水平。结果在158651例新生儿筛查中,初筛阳性39例,确诊NICCD3例,发现假阴性4例,筛查阳性预测值7.7%,灵敏度约43.0%。回顾分析55例NICCD患儿的新生儿筛查干血斑氨基酸及酰基肉碱谱,NICCD真阳性组18例(18/55,32.7%),假阴性组37例(37/55,67.3%)。真阳性组采血时间为(4.28±1.60)d,与假阴性组(2.98±0.74)d比较差异有统计学意义(t=4.06,P<0.01)。在瓜氨酸≥30μmol/L(n=18)组中,血酪氨酸[(176.0±98.4)μmol/L]、甲硫氨酸[(37.0±26.9)μmol/L]、苯丙氨酸[(133.0±80.9)μmol/L]水平均明显高于其他3组,差异有统计学意义(F值分别为117.0、58.5、135.0,P<0.01)。血精氨酸[(10.0±9.2)、(11.0±9.3)、(9.0±17.8)μmol/L]、缬氨酸[(119.0±29.8)、(107.6±14.1)、(102±68)μmol/L]及亮氨酸[(167.0±37.1)、(161.0±37.7)、(163.5±180.6)μmol/L]水平在瓜氨酸≥30μmol/L(n=18)、瓜氨酸21-<30μmol/L(n=7)、瓜氨酸<21μmol/L(n=30)间差异均无统计学意义(P>0.05),但较正常对照组[(4±3)、(78±21)、(114.0±31.5)μmol/L,n=1000]差异均有统计学意义(F值分别为30.1、23.0、29.8,P<0.01)。丙氨酸在4组间[(150±50)、(156.0±30.2)、(168±105)、(152±52)μmol/L]差异无统计学意义(F=0.86,P>0.05),但丙氨酸/瓜氨酸降低在4组间(1.52±1.44、6.82±1.56、12.06±7.71、19.42±6.27)差异均具有统计学意义(F=69.0,P<0.05)。各组间血酰基肉碱谱差异均无统计学意义(P>0.05)。以瓜氨酸≥30μmol/L伴丙氨酸/瓜氨酸<7.5为筛查阳性切值,初筛阳性由39例减少至22例,未增加假阴性病例。以瓜氨酸≥21μmol/L伴丙氨酸/瓜氨酸<7.5为筛查阳性切值,初筛阳性数则增加至117例,确诊病例增加1例。结论NICCD患儿在新生儿早期即出现不同程度的瓜氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸等增高,丙氨酸/瓜氨酸降低的代谢谱特征,增加丙氨酸/瓜氨酸指标可提高NICCD筛查阳性预测值。NICCD新生儿筛查敏感性较低可能与采血时间过早其代谢谱特征尚未明显呈现有关。

209860例不同胎龄及出生体重新生儿先天性甲状腺功能减退症的筛查结果

目的探讨不同胎龄及出生体重新生儿先天性甲状腺功能减退症（congenital hypothyroidism，CH）的发生情况。方法2011年10月13日至2012年9月28日间，在广州市165家医疗机构出生的活产新生儿209860例，采用荧光酶免疫方法测定新生儿于血片促甲状腺激素（thyroid-stimulating hormone，TSH）值，TSH≥9mU／L者为筛查阳性，若复查TSH仍≥9mU／L，则检测血清游离甲状腺素和TSH以明确诊断。卡方检验分析不同胎龄及不同出生体重新生儿CH的发生情况。结果确诊CH病例124例，CH发病率为1／1692（124／209860）。早产儿CH发病牢为1／828（14／11589），高于足月儿（1／1808，109／197124），差异有统计学意义（X^2=-7．975，P〈0．0125）。低出生体重儿组CH发病率为1／723（14／10 129），巨大儿组CH发病率为1／734（9／6609），均高于正常出生体重儿[1／1912（101／193122）]，差异均有统计学意义（X^2分别为12．564和8．168，P均〈0．0125）。双、多胎组CH发病率为1／484（4／1935），明显高于单胎组[1／1732（120／207925）]（X^2=7．208，P〈0．05）。结论胎龄小、出生体重低、多胎新生儿CH的发病率高。

新生儿枫糖尿症的护理

介绍1例新生儿枫糖尿症的护理。给予特殊饮食,减少不良刺激,加强皮肤护理,密切观察病情变化,及时处理并发症。经过7d的治疗护理,患儿好转出院。

新生儿遗传代谢病人工智能疾病风险评估模型的建立及验证

目的应用人工智能技术建立新生儿遗传代谢病疾病风险评估模型并验证其用于辅助新生儿串联筛查结果的判断。方法回顾性研究。收集2010年2月至2019年5月来自全国31家医院新生儿遗传代谢病筛查(串联质谱法)5907547例数据和34家医院临床确诊的3028例数据进行回顾性分析,建立新生儿遗传代谢病人工智能疾病预测模型;以2018年1至9月浙江大学医学院附属儿童医院360814例新生儿筛查数据进行遗传代谢病人工智能疾病预测模型的单盲试验验证,通过比较临床确诊病例的检出率、串联初筛阳性率和阳性预测值在人工判读和遗传代谢病人工智能预测模型中的结果,验证人工智能疾病风险预测模型的有效性。结果经数据筛选,共有3665697例新生儿串联初筛数据符合数据库建模的标准,选取所有临床确诊患儿数据3019例共构建了16种人工智能预测模型可涵盖32种遗传代谢病;在单盲试验验证入组的360814例新生儿中,临床确诊病例共45例,人工判读和遗传代谢病人工智能预测模型结果一致,所有临床确诊病例均为阳性或高风险。串联初筛阳性人工判读为2684例,遗传代谢病人工智能疾病风险预测模型判读为串联初筛高风险1694例,串联初筛阳性率分别为0.74%(2684/360814)、0.46%(1694/360814);与人工判读相比,遗传代谢病人工智能疾病风险预测模型判读阳性人数总体减少了36.89%(990/2684);人工判读和遗传代谢病人工智能疾病风险预测模型的阳性预测值分别为1.68%(45/2684)、2.66%(45/1694)。结论所建立的新生儿遗传代谢病人工智能疾病风险预测模型具有准确、快速、假阳性率低的优点,具有重要临床应用价值。

白念珠菌感染对小鼠皮肤Caspase-14表达及屏障功能的影响

目的:检测小鼠皮肤白念珠菌感染时半胱氨酸蛋白酶-14(Caspase-14)的表达,探讨其对皮肤屏障的影响。方法:检测小鼠对照组正常皮肤(C)、受损皮肤(A1)、外用乳酸的受损皮肤(A2)、外用Caspase抑制剂Z-VAD-FMK的受损皮肤(A3)和接种白念珠菌的受损皮肤(A4)在实验前后pH值及经表皮水分流失量(TEWL)的变化。同时分别采用real-time PCR及western blotting检测各组小鼠皮肤的Caspase-14的表达,并比较其差异。结果:C、A1、A2、A3、A4各组处理后即刻及处理后12h的pH值为5.46±0.10、6.82±0.09、5.38±0.12、6.79±0.17、6.65±0.13和5.50±0.11、6.18±0.14、5.76±0.19、6.42±0.26、5.73±0.21,处理后12hTEWL值为27.2±7.3、39.2±8.2、51.0±9.1、47.4±8.5、58.5±9.6。C、A1、A2、A3、A4各组Caspase-14的转录水平分别为1.00±0.07、6.51±0.48、2.92±0.18、7.63±0.27、3.66±0.31,蛋白表达水平分别为1.00±0.12、5.17±0.38、3.24±0.27、6.31±0.33、3.02±0.24,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:受损皮肤Caspase-14的表达较正常皮肤明显增高,Caspase-14对受损皮肤屏障功能恢复具有重要作用;而白念珠菌感染可能通过降低皮肤表面pH值,下调受损皮肤Caspase-14的表达,从而影响皮肤屏障功能的恢复。

11～13^(+6)孕周唐氏综合征与正常妊娠孕妇血清胎盘生长因子水平对比分析

目的探讨孕妇血清胎盘生长因子(PLGF)在孕早期唐氏综合征筛查的潜在价值。方法选择2011年1月至2013年11月于11~13^(+6)孕周在该院接受孕早期唐氏筛查的600例孕妇作为研究对象,孕育唐氏综合征胎儿孕妇42例纳入病例组,健康孕妇558例纳入对照组。所有孕妇接受孕妇血清妊娠相关蛋白A(PAPP-A)、血清游离β-人绒毛膜促性腺激素(freeβ-hCG)、PLGF检测及B超测定胎儿头臀径(CRL)。结果病例组孕妇PAPP-A和PLGF水平的中位数比对照组低,freeβ-hCG水平的中位数比对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。健康孕妇血清PLGF、PAPP-A水平与孕周呈正相关,血清freeβ-hCG水平与孕周呈负相关。血清PLGF水平与PAPP-A水平呈正相关,与freeβ-hCG水平无相关性。结论 PLGF也可作为孕早期唐氏综合征筛查一项潜在生化标志物,用以筛查该疾病的高风险妊娠。

孕妇血清胎盘生长因子在孕早期唐氏综合征产前筛查的应用

目的评价孕妇血清胎盘生长因子在孕早期唐氏综合征产前筛查的应用价值。方法选择2011年1月至2013年11月于孕11~13＋6周在广州市妇女儿童医疗中心接受孕早期唐氏筛查孕妇252例作为研究对象。所有孕妇接受孕妇血清妊娠相关蛋白A（PAPPA）、游离人绒毛膜促性腺激素β亚单位（freeβ-h CG）、胎盘生长因子（PLGF）检测。结果唐氏综合征胎儿孕妇血清中PAPPA和PLGF的中位数倍数值分别比对照组低59.5%和35.1%,freeβ-h CG的中位数倍数值比对照组高99.2%,差异均有统计学意义（P〈0.05）。以1/270作为高风险截断值,血清三联筛查（游离h CGβ＋PAPP-A＋Pl GF）和二联筛查（游离h CGβ＋PAPP-A）的检出率（DR）分别为85.7%和81.0%。血清三联筛查检出率高于二联筛查。结论孕妇PLGF在孕早期唐氏综合征产前筛查中具有潜在的应用价值,包括Pl GF的血清三联标志物筛查有利于提高血清学筛查的检出率。

肠内营养粉剂（AA-PKU1）对0～1岁苯丙酮尿症患儿治疗的有效性和安全性

目的 评价肠内营养粉剂（AA-PKU1）对0～1岁苯丙酮尿症（PKU）患儿治疗的有效性和安全性.方法 采用前瞻、开放、自身前后对照、多中心临床研究方法,对2009年4月至2011年2月收治的39例0～4个月PKU患儿进行评估,评估基线、治疗8周及32周后患儿血苯丙氨酸（PHE）水平、发育商测定（Gesell法）、身高、体质量、头围、营养学指标以及血、尿常规、肝肾功能的变化情况和不良事件发生情况.结果 治疗8周后脱落病例3例,36例进入符合方案集进行有效性统计分析,39例进入安全性统计分析;治疗32周后脱落病例5例,34例进入符合方案集进行有效性统计分析,39例进入安全性统计分析.治疗8周和32周时患儿血PHE平均水平分别为196.0 μmol/L、191.1 μmol/L,与基线水平（649.5μmol/L）比较,患儿血PHE水平显著下降,差异有统计学意义（P ＜0.000 1）,血PHE水平控制在360 μmol/L以内的控制率分别为88.89％、88.24％;治疗8周和32周时发育商水平与基线比较,差异无统计学意义;治疗8周和32周时的身高、体质量、头围与基线比较,差异均有统计学意义（P均＜0.000 1）;治疗32周时的血浆总蛋白、清蛋白、前清蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平与基线比较,差异无统计学意义.安全性方面,不良反应发生例次14次,发生例数10例,均为轻中度胃肠道反应如腹泻、呕吐,可自行缓解或对症处理后缓解和消失.结论 AA-PKU1能有效控制0～1岁患儿的血PHE水平在360 μmol/L以内,通过有效控制患儿血PHE水平,可避免患儿发育商水平进一步下降;AA-PKU1能满足0～1岁患儿正常生长发育的需要并能满足患儿的营养需求及改善患儿的营养状况;临床应用安全、耐受性好.

肠内营养粉剂AA-PKU2治疗1-8岁苯丙酮尿症患儿的有效性和安全性研究

目的评价肠内营养粉剂AA．PKU2对1—8岁苯丙酮尿症（PKU）患儿治疗的有效性和安全性。方法2009年7月至2011年5月采用前瞻、开放、自身前后对照、多中心临床研究方法，共入组1岁至7岁4个月PKU患儿121例，评估肠内营养粉剂AA．PKU2治疗前、治疗8周及32周后患儿血苯丙氨酸（PHE）浓度、智能发育（1～4岁Gesell法，〉4岁WPPSI或WISR．R法）、身高、体重、头围、血常规、尿常规、肝肾功能、血脂和蛋白水平等血清营养学指标的变化以及不良事件发生情况。结果AA—PKU2治疗8周和32周后患儿血PHE浓度平均水平分别为353±253、361±280gmol／L，与治疗前（487±327gmol／L）相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；治疗8周和32周后血PHE浓度≤360p．mol／L的控制率分别为65．5％、66．7％。在Gesell法评估的患儿中，AA．PKU2治疗8周和32周后总发育商与治疗前比较差异无统计学意义，但显示了智能改善的趋势；在WPPSI或WISR．R法评估的患儿中，AA—PKU2治疗8周和32周后总智商比治疗前明显增加（P〈0．01）。AA．PKU2治疗8周和32周后患儿的身高、体重、头围与治疗前比较均显著增加（P〈0．01），与同年龄段正常儿童的指标相当。治疗8周和32周后患儿血浆总蛋白、白蛋白、前白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白平均水平与治疗前的平均水平基本相当，均在正常范围内。与AA—PKU2治疗相关的不良事件发生率为2．5％（3例），均为轻度腹泻，未特殊处理而好转。结论肠内营养粉剂AA．PKU2能有效控制l～8岁患儿的血PHE浓度在360gmol／L以内；通过有效控制患儿血PHE浓度，可改善患儿的智力发育，满足患儿正常生长发育的需，且临床应用安全、耐受性好。

艾杜糖-2-硫酸酯酶活性测定在黏多糖贮积病Ⅱ型产前诊断中的应用

目的评估黏多糖贮积病Ⅱ型(MPSⅡ)高危孕妇胎儿绒毛和孕妇外周血血浆艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)活性以及基因分析在MPSⅡ产前诊断中的应用。方法回顾性分析2013年2月至2020年12月在广州市妇女儿童医疗中心进行产前诊断的23例MPSⅡ高危孕妇的酶学检测及基因分析结果,采用人工底物荧光法检测胎儿绒毛(30例)和血浆(28例)IDS酶活性,以非高危妊娠孕妇的28例绒毛和34例血浆检测值为对照,绒毛同时送检基因检测和胎儿性别鉴定。组间比较采用独立样本t检验。结果非MPSⅡ高危孕妇胎儿绒毛和血浆IDS活性正常参考值为绒毛(71.2±23.4)nmol/(mg·4 h),血浆(611.1±114.5)nmol/(mL·4 h);30例高危胎儿绒毛中8例男性受累胎儿绒毛IDS酶活性为(1.7±0.3)nmol/(mg·4 h),显著低于11例男性非受累胎儿[(83.2±6.3)nmol/(mg·4 h)]和9例女性非携带者胎儿[(80.0±7.5)nmol/(mg·4 h)](t=10.8、8.8,均P<0.01)。28份MPSⅡ高危孕妇外周血血浆IDS酶活性中8例受累男性胎儿孕母外周血IDS酶活性(225.4±20.5)nmol/(mL·4 h),显著低于男性胎儿非受累孕母IDS酶活性[(451.0±15.1)nmol/(mL·4 h)]和女性非携带者胎儿孕母IDS酶活性[(467.7±45.3)nmol/(mL·4 h)]。30例MPSⅡ高危胎儿绒毛中找到已知致病性突变8例,突变位点分别为c.1048A>C、c.212G>A、c.514C>T、c.257C>T、c.425C>T、c.998C>T,其中6例IDS酶活性显著降低,均为男性受累胎儿,另2例IDS酶活性正常,为女性携带者胎儿。结论孕妇外周血血浆与绒毛IDS酶活性及基因结果有很好的相符性,对孕早期产前诊断MPSⅡ有重要参考价值;当先证者未找到基因突变或新突变的致病性尚不清楚时可单独检测绒毛酶活性进行产前诊断MPSⅡ。

高分辨率熔解曲线分析技术检测苯丙酮尿症患者的苯丙氨酸羟化酶基因突变

目的 应用高分辨率熔解曲线（HRM）分析技术检测苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变.方法 利用PCR扩增13例苯丙酮尿症（PKU）患者的苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因第6、7、11及12外显子,然后对PCR产物进行HRM分析,通过DNA测序对HRM结果进行验证.结果 在13例PKU患者的26个PAH等位基因中共检测出5种不同突变基因,总检出率为38.5％.常见的突变类型是R243Q和A434D.检测出两种多态性位点为Q232Q和V245V.HRM分析结果与测序结果完全一致.结论 HRM技术具有简单、快速、易操作、准确等优点,可用于PKU患者PAH基因突变筛查.

高分辨熔解曲线检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的临床价值

目的研究用HRM分析技术检测经典型PKU患者PAH基因突变的临床应用价值。方法采用HRM分析技术对17例经典型PKU患者PAH基因的13个外显子及外显子-内含子交界区域进行检测，并采用DNA测序验证HRM检测结果。同时评价HRM诊断PKU的敏感度和特异度。另外，对其中2个家系的风险胎儿进行产前诊断。结果采用HRM分析技术从17例经典型PKU患者中检出有2个致病突变的患者16例，检出有3个致病突变患者1例。同时检出194V（C．280A〉G）、IVs4nt-1G〉A（12．442—1G〉A）、R158Q（0．473G〉A）、Q160x（e．478C〉T）、W187X（c．561G〉A）、E6nt-96A〉G（C．611A〉G）、G239D（C．716G〉A）、R241C（0．721C〉T）、R243Q（C．728G〉A）、G247R（c．739G〉C）、G247V（0．740G〉T）、R261X（C．781C〉T）、R261Q（c．782G〉A）、H264R（C．791A〉G）、F302fsX39（C．904delT）、E305K（c．913G〉A）、G312V（C．935G〉T）、Y356X（c．1068C〉A）、V399V（C．1197A〉T）、R408Q（c．1223G〉A）、T418P（C．1252A〉C）、A434D（c．1301C〉A）22种致病突变；Q232Q（O．696G〉A）、V245V（C．735G〉A）、L385L（c．1155C〉G）3种沉默突变；1种单核苷酸多态点rs2280615（c．402A〉C）。其中194V（c．280A〉G）、Q160X（C．478C〉T）、H264R（C．791A〉G）、G312V（C．935G〉T）和E305K（C．913G〉A）为PAH基因新发现的突变。2例风险胎儿经产前诊断，1例未发现致病突变，1例诊断为携带者。HRM突变筛查经典型PKU的敏感度和特异度均为100％，其检测结果与DNA测序结果完全一致。结论HRM分析技术是一种简单、准确、快速、高通量、低成本的遗传学分析方法，可用于经典型PKU的PAH基因突变筛查，并可用于已知父母突变的经典型PKU家系快速产前诊断。