雷公藤内酯醇对类风湿关节炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的 观察雷公藤内酯醇治疗类风湿关节炎(RA)大鼠的疗效,并通过Toll-样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法 将24只健康SD大鼠,随机分为空白对照组、RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组,每组6只。采用热杀死结核分枝杆菌诱导RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠制作RA模型;造模成功后,阳性药双氯芬酸组给予10mg/kg双氯芬酸灌胃,雷公藤内酯醇组大鼠给予6mg/kg雷公藤内酯醇灌胃,空白对照组和RA模型组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。采用ELISA法测定大鼠血清中炎性细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6]表达水平;评价关节炎指数及足体积。免疫组织化学法检测关节滑膜组织TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达,q-PCR法检测滑膜组织TLR4mRNA的表达。结果 与空白对照组比较,RA模型组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著升高(P<0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著下降(P<0.05),且雷公藤内酯醇组TNF-α、IL-4、IL-6表达水平呈极显著下降(P<0.01)。与RA模型组比较,雷公藤内酯醇组在第8、12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P<0.05),阳性药双氯芬酸组在第12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P<0.05)。与空白对照组比较,RA模型组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著上调(P<0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组滑膜组织中TLR4、NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下降(P<0.05),雷公藤内酯醇组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下调(P<0.05)。结论 雷公藤内酯醇可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的信号因子表达,从而降低炎性因子的产生,减少炎性反应,起到治疗RA的作用。

重症监护病房患者深部真菌感染情况分析

目的调查分析该院重症监护病房(ICU)患者医院获得性深部真菌感染的菌种、感染部位及药敏结果,并分析深部真菌感染的危险因素。方法回顾调查2014年1月至2018年12月798例ICU住院患者送检的各类标本的真菌培养情况。结果共检出真菌509株,以尿路感染为主,占86.25%,其后依次为血液(6.09%)、下呼吸道(5.30%)等;真菌感染病原体以白色念珠菌(75.25%)为主,其后依次为光滑念珠菌(10.22%)、热带念珠菌(9.82%)、克柔念珠菌(1.77%)、近平滑念珠菌(1.57%)和丝状真菌(1.38%),药敏试验结果显示,这些真菌对氟康唑、伊曲康唑、5-氟胞嘧啶及两性霉素B均保持良好的敏感性。可能引起深部真菌感染的危险因素有使用激素及抗菌药物、各种侵入性操作的应用、老年人等。结论减少不必要的侵入性操作,合理使用抗菌药物和激素,早发现、早治疗是防治ICU住院患者深部真菌感染的关键所在。

DNA微阵列技术检测不同HCY水平患者MTHFR基因多态性

目的检测不同水平同型半胱氨酸（HCY）患者5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因第677核苷酸的突变频率,探讨MTHFR基因多态性与不同HCY水平的相关性。方法以HCY大于15μmol/L的受检者（435例）作为实验组,将实验组按照HCY水平分成4组：15μmol/L30μmol/L为第4组,同时以HCY≤15μmol/L的人群（229例）为对照组。用DNA微阵列技术检测实验组和对照组MTHFR基因第677核苷酸的突变,统计分析各组MTHFR基因型及等位基因频率分布。结果 MTHFR基因677位核苷酸由C变异为T与HCY水平显著相关（χ~2=180.16,P〈0.0001）,且随着HCY水平升高T等位基因频率呈增大趋势,经线性趋势检验有统计意义（χ~2=156.67,P〈0.0001）;同时,单独一组与对照组比较,MTHFR基因型和等位基因频率分布没有显著差异（χ^2=0.031,P〉0.05）。结论 MTHFR 677位等位基因由C突变为T是导致HCY水平明显升高的重要原因,而且是导致HCY〉30μmol/L的主要原因;

探讨免疫球蛋白超级家族成员9促进肺腺癌细胞增殖的作用及机制

肺癌是全球发病率与死亡率均位于第一位的恶性肿瘤。肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)大约占整个肺癌的40%。但是,目前对肺腺癌发生发展的机制尚未阐明。TCGA在线数据库GEPIA证实,免疫球蛋白超级家族成员9(immunoglobulin superfamily member 9,IGSF9)在肺腺癌中的平均表达量是6.56,其在正常癌旁组织中的平均表达量是0.55,提示IGSF9在肺腺癌中的表达量是正常癌旁组织的11.93倍。人类蛋白组学数据库也提示,IGSF9在肺腺癌中高表达。通过qRT-PCR检测IGSF9在肺腺癌细胞中的表达量,发现其在A549和H1299细胞中的表达量分别是其在BEAS-2B细胞中的4.17倍和6.6倍。细胞功能实验发现,过表达IGSF9,其LUAD细胞的增殖能力显著增加。平板克隆形成实验发现,在A549细胞中,对照组平板克隆大约有240个,过表达IGSF9后,该组细胞的平板克隆数大约是385个,实验组的克隆数目是对照组的1.60倍(P<0.01)。敲低IGSF9,则LUAD细胞增殖能力明显降低。平板克隆形成实验发现,在H1299细胞中,对照组平板克隆大约有320个,敲低IGSF9后,该组细胞的平板克隆数大约是164个,实验组的克隆数目仅为对照组的51.25%(P<0.01)。生物信息学预测结合后期研究证实,IGSF9可显著抑制叉头蛋白K2(forkhead box protein K2,FOXK2)的表达。MTS实验发现,过表达FOXK2可显著逆转IGSF9对LUAD细胞增殖的促进作用,而敲低FOXK2则可明显补偿敲低IGSF9对LUAD细胞的增殖抑制作用。这些结果提示,IGSF9通过下调FOXK2从而促进LUAD细胞的增殖。

酒精依赖者血脂及同型半胱氨酸水平与颈动脉粥样硬化的相关性分析

目的探讨血脂及血清同型半胱氨酸(Hcy)水平的改变与酒精依赖者颈动脉粥样硬化发生程度的相关性。方法采用病例对照研究,50例酒精依赖患者作为病例组,40例健康人作为对照组。两组均行颈动脉彩色多普勒超声检查,测量双侧颈动脉分叉部前后1 cm范围内的内-中膜厚度(IMT),计算斑块积分及硬化积分;同时测定患者的血清Hcy及血TC、TG、HDL、LDL水平,分析血象改变与颈动脉硬化的关系。结果 1病例组的血Hcy明显较对照组高(P<0.01),TC、TG、HDL、LDL在两组间差异无统计学意义。2病例组的颈动脉内中膜厚度(IMT)、斑块积分、硬化积分与对照组有统计学差异(P<0.05);两组间动脉硬化的发生率及斑块形成的发生率有统计学差异(P<0.05)。3动脉硬化与患者的年龄、血Hcy、饮酒呈正相关且有统计学意义(P<0.05)。结论长期大量饮酒可致血Hcy增高,血Hcy增高可导致颈动脉内-中膜增厚及粥样斑块形成。

HPLC-MS/MS法测定人血浆中艾司西酞普兰的浓度

目的采用草酸艾司西酞普兰-d6为内标,建立HPLC-MS/MS法测定人血浆中艾司西酞普兰的浓度,并应用于草酸艾司西酞普兰片的临床药动学研究。方法血浆样品0.2 m L经饱和Na HCO3溶液碱化后用醋酸乙酯-二氯甲烷（体积比4∶1）萃取,以草酸艾司西酞普兰-d6为内标,采用HPLC-MS/MS法测定,分析柱为Agilent Eclipse plus C18（4.6 mm×100 mm,5μm）,以甲醇-水（体积比80.75∶19.25,含5mmol/L甲酸铵和质量分数0.1%甲酸）为流动相,流速为0.5 m L/min,柱温为35℃;采用电喷雾正离子（ESI＋）、选择反应监测（MRM）模式,用于定量分析的离子反应分别为艾司西酞普兰m/z 325.1→262.0,内标艾司西酞普兰-d6 m/z 331.3→262.2。结果艾司西酞普兰在0.1~25μg/L（r2=0.998 9）内线性良好,定量限为0.1μg/L,平均回收率在67.73%~69.86%范围内,批内、批间精密度分别小于3.81%与6.47%。结论所建立的艾司西酞普兰血药浓度的测定方法简便、快速、准确、灵敏,可应用于人体生物等效性及临床药动学研究。

精神分裂症患者CYP2D6基因多态性与利培酮代谢的相关性研究

目的探讨精神分裂症患者CYP2D6等位基因多态性对利培酮(RISP)代谢的影响。方法实时荧光PCR分别检测120例连续服用RISP的精神分裂症患者CYP2D6*10、*4、*41以及*2的等位基因多态性。质谱分析法检测所有患者血液中RISP及其代谢产物9羟基-RISP(9-OH-RISP)的浓度。同时抽取部分样本对东方人群最常见的CYP2D6*10进行DNA测序。根据所检测的120例受检对象的基因型,将其分为3组,第1组为无携带影响CYP2D6酶活性等位基因的基因型,第2组为携带一个降低CYP2D6酶活性等位基因的基因型,第3组为携带两个降低CYP2D6酶活性等位基因的基因型。分别统计3组受检对象基因型分布、各等位基因的频率,和各组的RISP、9-OH-RISP、RISP+9-OH-RISP和9-OH-RISP/RISP。结果第1组有23例,包含WT/WT基因型13例,*2/*2基因型7例,WT/*2基因型3例;第2组有51例,包含WT/*10基因型38例,*2/*10基因型8例,*2/*41基因型1例,WT/*41基因型4例;第3组有46例,包含*10/*10基因型44例,*10/*41基因型2例;未检测到*4等位基因。所有基因型中WT等位基因频率为29.6%,*2等位基因频率为10.8%,*10等位基因频率为56.7%,*41等位基因频率为2.9%。3组受检者的9-OH-RISP/RISP比值:第1组为15.24±5.77,第2组为11.06±4.56,第3组为2.39±1.06,第3组受检者的9-OH-RISP/RISP比值分别与1组和2组比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论*10等位基因频率在受检对象中频率最高,其与WT等位基因和*2等位基因频率之和在人群中超过95%;携带1个降低CYP2D6酶活性等位基因的个体对利培酮代谢速率的影响较小,而携带2个降低CYP2D6酶活性等位基因的个体,可对利培酮代谢速率产生较显著的影响。

DNA 微阵列技术检测 ApoE 基因型及与ApoE 水平的相关性分析

目的：探讨 DNA 微阵列技术在载脂蛋白 E（ApoE）基因型检测中的应用以及阿尔兹海默病（AD）患者与健康人群 ApoE 等位基因频率与血浆 ApoE 水平的相关性。方法病例对照研究。收集2014年7月至2015年9月广州市惠爱医院住院的280例 AD 患者及230名非 AD 健康老年人的清晨空腹静脉血，采用 DNA 微阵列技术检测 ApoE 基因型，以 DNA 测序验证 DNA 微阵列技术检测 ApoE 基因型结果的可靠性，同时检测所有受检者的 ApoE 水平。分析 ApoE 等位基因频率的分布及 ApoE 各等位基因频率与 ApoE 的相关性。 AD 组与对照组的 ApoE 血清水平比较采用t 检验，不同ApoE 基因型的 ApoE 血清浓度比较采用方差分析。结果DNA 微阵列技术基因分型结果与 DNA 测序结果完全一致。 AD 组 ApoE 基因型分布：ε2ε3为2．9％（8／280），ε2ε4为1．8％（5／280），ε3ε3为46．8％（131／280），ε3ε4为45．4％（127／280），ε4ε4为3．1％（9／280）。对照组 ApoE 基因型分布：ε2ε2为0．9％（2／230），ε2ε3为 12．6％（29／230），ε2ε4为1．3％（3／230），ε3ε3为 70．0％（161／230），ε3ε4为15．2％（35／230）。 AD 组 ApoE 水平为（33．29±10．87）mg／L，对照组为（41．28±10．95）mg／L。所有受检者中，ε2、ε3、ε4携带者 ApoE 分别为（50．86±6．21）mg／L、（38．78±12．07）mg／L、（30．47±7．68）mg／L。 AD 组中ε2携带者的 ApoE 水平为（50．31±9．08） mg／L，ε3携带者的 ApoE 水平为（38．30±7．60）mg／L，ε4携带者的 ApoE 水平为（29．89±7．95）mg／L；对照组中ε2携带者的 ApoE 水平为（51．00±5．53）mg／L，ε3携带者的 ApoE 水平为（41．01±10．09）mg／L，ε4携带者的 ApoE 水平为（32．86±5．93）mg／L。人群中 ApoE 等位基因所对应的 ApoE 水平为ε2＞ε3＞ε4，F ＝89．6，P ＜0．05，差异有统计学意义。但相同 ApoE 基因型的 AD 患者与健康人群间 ApoE 水平差异无统计学意义，ε2、ε3和ε4基因携带者 AD 组与对照组 ApoE 水平相比的t 值分别为0．981、2．878和1．732，P ＞0．05。结论DNA 微阵列技术用于检测 ApoE 基因型与测序结果一致性高，具有快速、准确的特点，AD 患者ApoE 总体水平低于健康人群的主要原因是 AD 患者中 ApoE ε4等位基因频率显著高于健康人群所致。