双自杀基因系统对乳腺癌细胞体外特异性杀伤作用

目的:探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体外靶向杀伤作用。方法:用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染率,并以RT-PCR、Westernblot方法检测受感染细胞CD/TK的表达,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响;电镜观察细胞的病变;用流式细胞术观察细胞内DNA含量的变化;分光光度法检测细胞内Caspase-3活性。结果:腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR和Westernblot检测发现转染Ad-VEGFP-CD/TK的MCF-7细胞有目的基因和蛋白的表达,而乳腺上皮细胞无表达。MTT法检测显示表达VEGF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感。在感染复数为100时,电镜下可见用药组MCF-7细胞有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;且随着前药浓度的升高转基因细胞内Caspase-3活性逐渐升高。结论:VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,细胞内Caspase-3活性升高可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。