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登革病毒包膜蛋白Ⅲ区IgG抗体捕获酶联免疫吸附试验的建立及应用 被引量:1
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作者 胡冬梅 蔡建飘 +6 位作者 王大虎 狄飚 丘立文 王压娣 陈月 丁细霞 车小燕 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期363-366,共4页
【摘要】目的建立一种高度敏感和特异的登革病毒(denguevirus,DENV)包膜蛋白Ⅲ区(envelopeproteindomain1]I,EDm)IgG抗体的检测方法,并探索这种方法在登革热诊断和血清流行病学调查中的应用价值。方法以毕赤酵母表达系统制备的... 【摘要】目的建立一种高度敏感和特异的登革病毒(denguevirus,DENV)包膜蛋白Ⅲ区(envelopeproteindomain1]I,EDm)IgG抗体的检测方法,并探索这种方法在登革热诊断和血清流行病学调查中的应用价值。方法以毕赤酵母表达系统制备的重组全长DENVEDm作为抗原,建立DENVEDmIgG抗体捕获ELISA。用这种方法检测来自同一组35例DENV一1初次感染患者在2006年发病期和2010年随访期的血清标本,并将其检测的敏感性与商品化的PanbioDENVIgG抗体捕获ELISA试剂盒进行对比。结果DENVEDHIIgGELISA试剂盒对发病期和随访期血清标本检测的灵敏度分别是87%(20/23)和94%(33/35),而Panbio DENV IgGELISA试剂盒对这两个时期血清标本检测的灵敏度分别是71%(25/35)和0。DENV EDⅢ IgG ELISA试剂盒对两个时期血清检测灵敏度差异无统计学意义(X^2=0.946,P=0.331)。对于发病期血清标本,DENVEDⅢIgG ELISA试剂盒与Panbio DENV IgG ELISA试剂盒检测的灵敏度比较,差异无统计学意义(X^2=1.924,P=0.165);而对随访期血清标本,DENV EDⅢ IgG ELISA试剂盒检测灵敏度高于Panbio DENV IgG ELISA试剂盒,差异有统计学意义(X^2=62.432,P=0.000)。结论DENVEDⅢIgG抗体捕获ELISA试剂盒对登革热患者发病期血清及随访期血清中IgG抗体的检测均具有高度的敏感性,有可能成为DF诊断和血清流行病学调查的有效工具。 展开更多
关键词 登革热病毒 免疫球蛋白G 酶联免疫吸附测定 血清学试验 病毒包膜蛋 白质类
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1型登革病毒包膜蛋白功能区在293T细胞中的表达与鉴定
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作者 郭勇晖 易海粟 +4 位作者 陈静 丁细霞 狄飚 车小燕 温坤 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期459-463,共5页
目的在293T细胞中获得可溶性表达的1型登革病毒(DENV1)包膜(E)蛋白。方法PCR扩增DENV1-E蛋白功能区(1~394aa)基因并克隆到Psectag2B-Fc真核表达载体中构建表达质粒,脂质体法转染293T细胞,经2mg/ml Zeocin筛选,免疫荧光法鉴... 目的在293T细胞中获得可溶性表达的1型登革病毒(DENV1)包膜(E)蛋白。方法PCR扩增DENV1-E蛋白功能区(1~394aa)基因并克隆到Psectag2B-Fc真核表达载体中构建表达质粒,脂质体法转染293T细胞,经2mg/ml Zeocin筛选,免疫荧光法鉴定所获细胞克隆:Protein-G亲和层析纯化DENV1-E-Fc重组融合蛋白,间接免疫荧光和蛋白免疫印迹法鉴定蛋白的完整性和抗原性。结果获得稳定可溶性表达重组融合蛋白的细胞克隆,蛋白产量约为25μg/1×107个细胞,纯化得到的DENV1-E-Fc蛋白相对分子质量约90×103,该蛋白可与识别天然构象E蛋白的单克隆抗体结合,并与免疫动物血清有良好的反应性。结论在真核细胞中成功获得可溶性表达的DENV1-E-Fc重组融合蛋白,E蛋白功能区保持完整且具备天然的构象表位和良好的抗原性,为包膜蛋白的保护性抗原表位和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 1型登革病毒 包膜蛋白 真核表达
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