Flotillin-2在高氧诱导肺上皮细胞凋亡中的作用

目的了解Flotillin-2(Flot-2)在高氧诱导肺上皮细胞凋亡中的调控分子机制。方法把小鼠置于高氧环境中处理24 h后,取其肺脏切片通过免疫组化检测Flot-2的表达。通过体外肺上皮细胞株进一步验证高氧后Flot-2在细胞中基因和蛋白水平的表达情况。通过质粒转染的方式把Flot-2的基因整合进肺上皮细胞的基因组中使Flot-2高表达,把肺上皮细胞分别置于空气和高氧环境中继续培养24 h,收集细胞后提取总蛋白,通过Westen blot检测经典凋亡途径中的各个相关因子,包括Caspase-3、Caspase-9,以及线粒体和细胞质中的细胞色素C,进一步研究在Flot-2高表达情况下,高氧对细胞凋亡的影响。结果 Flot-2广泛存在于支气管上皮和肺泡上皮细胞中,高氧刺激后表达明显增加。肺上皮细胞经质粒转染高表达Flot-2之后接受高氧刺激,细胞的死亡减少,凋亡途径中关键的凋亡蛋白Caspase-3及其活性片段cleaved-Caspase-3明显减少。内源性线粒体途径中关键的凋亡蛋白Caspase-9及其活性片段cleaved-Caspase-9也明显减少。同时线粒体中的细胞色素C的释放也相应减少。结论高氧刺激可使肺上皮细胞Flot表达上调,其作用是保护细胞对抗高氧所造成的损伤,调控的分子机制与细胞的线粒体凋亡途径有关。

氢质子磁共振频谱活体检测结肠癌耐药性的初步探讨

目的探索1H-MRS活体检测结肠癌耐药性的可能性。方法 5只耐药(耐5-FU)与5只不耐药人类结肠癌SW480荷瘤裸鼠于肿瘤直径大于1.5cm时行1H-MRS检查,随后处死荷瘤鼠,切下肿瘤检测其PKC、P-gp、MRP1蛋白表达(Western Blot),观察肿瘤凋亡(TUNNEL法)。分析结肠癌耐药性与1H-MRS检测代谢物、肿瘤耐药基因表达、肿瘤凋亡的相关性。结果不耐药组人类结肠癌SW480裸鼠肿瘤的cho、lac、Lip及m I峰/cr面积比较耐药组人类结肠癌SW480/5-FU裸鼠增加,差别有统计学差异(P<0.05)。耐药组PKC、P-gp、MRP1蛋白表达明显高于不耐药组,差别有统计学差异(P<0.05)。在TUNNEL检测切片上,两组肿瘤组织均可见肿瘤细胞凋亡,两者差别无统计意义(P>0.05)。肿瘤代谢物cho、Lac、Lip、m I/cr与肿瘤耐药性呈正相关性;cho面积与肿瘤PKC表达光密度呈正相关,与肿瘤Pgp表达光密度呈正相关。结论肿瘤代谢物cho、lac、Lip的改变有可能有助于利用1H-MRS活体检测结肠癌耐药性改变。

CD74低表达对人胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨干扰CD74表达对人胰腺癌细胞株Capan-2细胞生物学行为的影响。方法设计CD74．短发夹RNA（CD74-shRNA）干扰序列构建CD74干扰质粒转染Capan-2细胞（CD74-shRNA组），以转染pSUPER空载质粒为对照，采用MTr法检测细胞增殖活力，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，实时定量PCR和免疫印迹法检测CD74mRNA和蛋白表达，实时定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9mRNA表达。结果细胞增殖活力检测和划痕实验显示，干扰CD74表达可降低Capan-2细胞的增殖活力、抑制细胞迁移（均P〈0．05）。Transwell实验显示，培养48h后CD74-shRNA组和对照组的穿膜细胞数分别为（102．5±9．03）个/孔、（139．1±9．89）个／孔，CD74-shRNA组显著低于对照组（P〈0．05）。相对于对照组，CD74-shRNA组细胞CD74mRNA和蛋白表达抑制率分别为61％、90％，MMP-2和MMP-9mRNA表达抑制率分别为84％、85％。结论CD74低表达可抑制Capan-2细胞增殖、迁移和侵袭，CD74可能作为胰腺癌治疗的新靶点。