RNAi技术抑制乳腺癌细胞表皮生长因子受体表达的在体实验研究

目的探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染乳腺癌细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据。方法(1)建立裸鼠肿瘤动物模型,计算成瘤率。(2)体外转染乳腺癌细胞,常规动物接种,测量肿瘤体积和动物重量,计算肿瘤抑制率。(3)采用免疫组化和Western blotting技术测定肿瘤组织的表皮生长因子受体蛋白水平,采用Real-time PCR检测表皮生长因子受体基因水平,采用ELISA检测动物血清及肿瘤抽提蛋白中EGF含量。结果MDA-MB-231、ZR-75细胞成瘤率依次为30.00%、88.89%,MDA-MB-231细胞的成瘤能力明显弱于ZR-75细胞。ELISA检测结果证实dsRNA-表皮生长因子受体可将血清及肿瘤组织抽提蛋白中的EGF含量分别降低16.77%、12.59%。Real-time PCR结果表明dsRNA-表皮生长因子受体可将表皮生长因子受体基因表达下调21.05%。结论(1)采用体外化学合成的siRNA结合阳离子脂质体可有效在体转染乳腺癌细胞。(2)在体实验中RNAi效应持续的时间明显长于体外实验。(3)针对表皮生长因子受体基因序列设计的siRNA可作为极具开发前途的抗肿瘤新药,其在体实验中触发RNAi可能的作用机制尚需进一步深入探讨。

流式细胞术检测血小板活化的影响因素分析

目的:探讨流式细胞术(FCM)检测血小板活化的影响因素。方法:采集6名志愿者静脉血,枸橼酸钠为抗凝剂,室温放置不同时间后进行三色免疫荧光标记,FCM检测血小板早期活化标志物纤维蛋白原受体(Fib-R,即PAC-1)和晚期活化标志物P选择素(CD62P)的变化。结果:血小板活化标志物PAC-1和CD62P随着放置时间的延长而表达增加(P<0.05)。抽血后10min和30minPAC-1和CD62P测定值分别相差2.7%和3.5%。且抽血后在不同的活化水平下重复检测多次,结果重复性好,其变异系数(CV)<5%。结论:在室温,枸橼酸钠抗凝条件下,放置时间对血小板活化标志物PAC-1和CD62P的检测结果有较大影响,宜在30min内对采集血液免疫荧光标记后进行流式细胞仪检测。

尾加压素Ⅱ对培养的心脏成纤维细胞增殖和胶原基因表达的影响

目的观察尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)在体外对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖和Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)基因表达的直接影响,以探讨UⅡ在心力衰竭心肌重塑中的作用。方法以胰酶消化和差速贴壁法分离和纯化SD乳鼠的CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,RT-PCR测定CoL-ⅠmRNA表达水平。结果UⅡ对CFs增殖呈浓度依赖性,随着UⅡ作用浓度的增加,MTT光吸收值呈先升高后降低的趋势,其中1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L的UⅡ作用显著(P<0.05);1×10-7 mol/L、1×10-8 mol/L和1×10-9 mol/L浓度的UⅡ能促进CFs的CoL-ⅠmRNA表达(P<0.01)。结论UⅡ可直接促进CFs的增殖及CoL-ⅠmRNA表达,作用大小与UⅡ浓度有关,提示UⅡ在心力衰竭心肌重塑的病理生理过程中可能发挥重要作用。

尾加压素Ⅱ诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大的研究

目的研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)能否诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大。方法心肌细胞体外培养40 h后,换无血清DMEM继续培养24 h,应用流式细胞仪和3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法观察不同浓度UⅡ作用24 h后对心肌细胞大小和蛋白掺入率的影响。结果10-7 mol/L的UⅡ能增加心肌细胞的大小(P=0.021)和3H-Leu掺入率(P=0.015)。结论UⅡ能诱导体外培养的乳鼠心肌细胞肥大。

CFSE标记细胞的影响因素探讨

目的探讨影响CFSE标记细胞效果的多种因素。方法用不同配制时间、不同浓度的CFSE标记不同浓度的HL60细胞、MCG803细胞以及人淋巴细胞。结果配制的CFSE在存放2年以后标记率下降12．32％；在10μmol／L范围内细胞标记率与CFSE浓度成正比；低浓度细胞的标记率比高浓度的更高；同等条件下HL60细胞的标记率高于MCG803细胞；细胞的异质性使同一群细胞的标记率发生差异；散点图比直方图更适合CFSE标记细胞的传代分析。结论2．5～5μmol／L的CFSE是理想的标记浓度,10^6／mL是合适的标记细胞浓度。均一的细胞是高质量标记的关键。

左旋氨氯地平对高血压患者血管内皮细胞生长因子影响

目的研究高血压患者血管内皮细胞生长因子(VEGF)与左室肥厚(LVH)的关系以及左旋氨氯地平对VEGF的干预作用。方法 62例轻、中度原发性高血压患者,根据左室质量指数(LVMI)分左室肥厚组(30例)和非肥厚组(32例),2组患者均给予左旋氨氯地平2.5～5 mg/d,共8周。同时选择同期健康体检的27例健康者作为对照组。比较3组之间以及2组高血压患者之间治疗前后血清肌酐(Cr)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超敏C反应蛋白(hsCRP)、空腹血糖(FBG)和餐后2 h血糖(2hBG)以及VEGF水平的差异。比较VEGF与其他指标的关系。结果 1)2组高血压患者的VEGF均显著高于对照组(P<0.01),左室肥厚组的VEGF显著高于非肥厚组(P<0.05)。2)VEGF与LVMI正相关(R=0.391,P<0.01)。3)左旋氨氯地平2.5～5 mg/d治疗8周,可以有效地降低轻中度高血压患者的SBP,DBP,TC,LDL-C,hsCRP和VEGF。结论 1)高血压患者的VEGF升高,伴左室肥厚者更为严重。2)左旋氨氯地平可以降低轻中度高血压患者VEGF水平。

t-PSA、f-PSA和FPSAR对前列腺癌诊断价值的探讨

目的探讨血清总前列腺特异抗原（t-PSA）、游离前列腺特异抗原（f-PSA）和游离与总前列腺特异抗原比值（FPSAR）对前列腺癌（PCa）和良性前列腺增生（BPH）的诊断和鉴别诊断的价值。方法使用雅培AXSYM全自动免疫分析仪，用微粒子酶免疫分析法（MEIA）检测41例正常人群和经临床确诊的49例PCa和124例BPH患者血清中的t-PSA、f-PSA，并计算FPSAR。结果49例PCa患者和124例BPH患者中，PCa组和BPH组的t-PSA、f-PSA、FPSAR差异有显著性（P〈0．01）。但有5例PCa和46例BPH患者位于诊断灰区（PSA介于4—10μg／L时）。此PCa组和BPH组的t-PSA、f-PSA差异无显著性（P〉0．05），但FPSAR差异有显著性（P〈0．05）。结论对于在诊断灰区内的患者，FPSAR因其较高的敏感性和特异性更有助于PCa与BPH的鉴别诊断。若将t-PSA≥20μg／L，f-PSA≥5μg／L，FPSAR〈0．1作为PCa的诊断标准，则诊断的特异性高达95％以上。

心肌钙蛋白Ⅰ在烧伤后渗出期与感染期中的变化

目的 :探讨心肌钙蛋白Ⅰ (cTnⅠ )在烧伤后渗出期与感染期病人血中升高的规律与炎症反应的关系。方法 :采用化学发光法定期检测烧伤患者渗出期 (n =2 5 )和感染期 (n =30 )血中cTnⅠ浓度 ,所有患者予以动态心电图监测。结果 :渗出期患者 ,仅有 11例略升高 ,在 0 .0 5 μg/L～ 0 .16 μg/L之间。感染期 (5～ 14d)呈轻到中度升高 ,平均值比正常参考范围明显升高者 ,见于体表烧伤总面积 >30 % (P <0 .0 0 1)或创面有明显渗出的患者 (P <0 .0 0 2 )。当患者创面有明显渗出或焦痂自然剥离时 ,cTnⅠ水平升至峰值 ,手术切痂后 ,cTnⅠ水平下降。所有患者心电图未发现任何缺血性改变的迹象。结论 :cTnⅠ水平升高揭示烧伤患者存在非缺血性心肌损伤 。

甲状腺自身抗体的两种方法检测结果的比较及临床价值的探讨

目的 对比两种方法检测甲状腺球蛋白抗体 (TGA)、甲状腺微粒体抗体 (TMA)、甲状腺过氧化酶抗体(TPoA)结果及其临床价值 .方法 对 7例桥本氏病 (HD)和甲状腺功能亢进 4 0例 ,采用RIA法检测TGA、TMA及CLIA法测定其TGA、TPoA的水平 .结果 HD患者RIA法检测TGA、TMA和CLIA法检测TGA、TPoA均高于正常水平 ,2 1例甲亢患者两种方法的检测结果均有 1项以上增高 ;7例CLIA法检测TGA、TPoA有 1项以上增高 ,但RIA法检测TGA、TMA均为阴性 ;其余 11例两种方法测定结果均为正常水平 .相关系数比较 :方法内TGA和TMAr=0 .94 (RIA法 ) ,TGA和TPoAr=0 .15 (CLIA法 ) ;RIA法和CLIA法TGAr=0 .5 5 ,TMA和TPoAr=0 .6 3.结论 ①对于HD ,TGA和TMA或TGA和TPoA的同时检测 ;②对于甲亢CLIA法检测TGA和TPoA的阳性率明显优于RIA法检测TGA和TMA .

亚砷酸对小鼠成纤维细胞凋亡的影响

目的研究亚砷酸对成纤维细胞株增殖和凋亡的作用。方法运用镜下观察细胞生长形态、MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞Annexin V的表达。结果在4.0 mg/L的亚砷酸作用下,成纤维细胞不呈现典型的梭形贴壁细胞形态,增殖受抑制,并明显诱导细胞Annexin V的表达。亚砷酸低于2.0 mg/L时,对成纤维细胞无明显的凋亡诱导作用,而且细胞抑制不明显。结论高剂量的亚砷酸能改变成纤维细胞的细胞形态,并具有诱导细胞凋亡和抑制增殖的作用。

继发磺脲类药失效病理机制的探讨

目的 探讨 2型糖尿病患者继发磺脲类药 (SU )失效的发生机制。方法 利用总胰岛素原 (TPI)、完整胰岛素原 (IPI)和真胰岛素 (SI)定量检测技术 ,比较健康对照组 (n =10 )、SU有效组 (n =3 8)和继发SU失效组 (n =46)糖耐量试验 (OGTT)过程中胰岛素样激素分泌水平 (分别用曲线下面积AUCTPI、AUCIPI和AUCSI表示 )及其与血糖调节的关系 ,计算各组AUCTPI/AUCSI比和胰岛素抵抗指数 ,并用两分类Logistic回归分析筛选可能导致继发SU失效的危险因素 ,根据试验结果分析继发SU失效的发生机制。结果 两个糖尿病组空腹TPI和IPI均高于对照组 ,几何平均数(pmol/L) 分别为SU有效组 :14 9,4 1;SU失效组 :12 9,3 9;对照组 :3 2 ,0 6,差别有非常显著意义 ,所有P <0 0 0 1。糖负荷后两个糖尿病组AUCSI低于对照组 ,几何平均数分别为 (mu/L/h)SU有效组 :19 3 ;SU失效组 :2 4 6;对照组 :42 4,差别有显著意义 ,所有P≤ 0 0 1,但AUCTPI/AUCSI比高于对照组 ,几何平均数分别为SU有效组 :3 4;SU失效组 :2 3 ;对照组 :1 0 ,差别有非常显著意义 ,P均为 0 0 0 1。继发SU失效组OGTT第 3h的血糖水平 (2 2 8mmol/L)明显高于SU有效组 (19 5mmol/L) ,差别有非常显著意义 ,P =0 0 0 5,且与AUCSI无相关关系 (r=-0 15,P =0 3

心肌钙蛋白I在监测非缺血性心肌损伤中的应用

目的 探讨心肌钙蛋白I (cTnI)用于监测非缺血性心肌损伤的临床意义。方法 将 6 7例临床未见急性心肌梗死 (AMI)迹象的可疑心肌损伤患者分为 2组 :(1)急性心衰组 37例 ,患者心功能分级为Ⅳ级 ;(2 )烧伤组 30例 ,体表烧伤总面积为 4%～ 98%。定期采集 2组患者血样品 ,并用微粒子化学发光法检测样本cTnI浓度。结果 89%的急性心衰组患者cTnI水平升高 (P <0 .0 0 1) ,且与病情变化密切相关。当患者病情恶化时 ,cTnI水平升高 ;病情改善时 ,cTnI水平逐渐下降。 90 %的烧伤组患者cTnI水平在烧伤后第 5～ 14天期间呈轻到中度升高。平均值比对照组水平明显升高者 ,见于体表烧伤总面积 >30 %(P <0 .0 0 1)或创面有明显渗出的患者 (P <0 .0 0 2 )。当患者创面渗出明显或焦痂自然剥离时 ,cTnI水平升至峰值 ,手术切痂后 ,cTnI水平逐渐下降。 2例cTnI水平持续性升高的患者发展为心动过速。结论 cTnI是一种敏感的非缺血性心肌损伤标志物 ,动态监测cTnI水平变化有助于鉴别上述两类患者的心肌受损程度。