穗花杉双黄酮抑制人脐静脉内皮细胞血管形成的实验研究

为探讨穗花杉双黄酮(Amentoflame,AF)对人脐静脉内皮细胞ECV304血管形成及机制的影响,从而为穗花杉双黄酮治疗肿瘤及其他血管增生性疾病提供理论基础,采用MTS检测AF对ECV304血管内皮细胞增殖的作用,细胞划痕实验观察AF对ECV304细胞迁移的影响,体外血管形成实验观察AF对ECV304血管形成的影响,Western blot检测AF对ECV304细胞血管形成相关信号通路及蛋白如磷酸化AKT(p-AKT)、金属基质蛋白酶9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、促血管生成素2(angiopoietin 2,Ang 2)表达影响。结果表明AF能够抑制ECV304细胞的增殖作用,并呈梯度依赖性;AF具有抑制ECV304细胞迁移的作用,并且能够抑制ECV304体外血管样结构的形成;Western blot结果显示100μmol/L的AF能够降低ECV304细胞p-AKT、MMP-9、Ang-2的蛋白表达。

新型氧化铁微粒(MIRB)标记兔骨髓间充质干细胞及其MRI体外显影研究

目的采用能被荧光显微镜检测的新型氧化铁纳米颗粒（MIRB）标记兔骨髓间充质干细胞（BMSC），研究其标记效率和对BMSC增殖活性的影响，并初步探讨标记BMSC体外MRI的可行性，为移植干细胞活体MRI提供实验基础。方法成功培养和鉴定免骨髓间充质干细胞（BMSC）后，采用铁浓度为25pgμg/mL、50μg／mL的MIRB标记BMSC，应用MTS法比较两浓度组标记BMSC和未标记BMSC增殖活性；通过观察标记细胞内荧光显影和普鲁士蓝染色评价两浓度组的标记效率，应用1．5T MR对不同数量级细胞分别T，WI和T＊WI序列扫描。结果两组标记细胞内均可见明显荧光显影，普鲁士兰染色显示两个不同铁浓度MIRB标记细胞的标记率比较差异无统计学意义（P〉0．05）；MTS检测提示两个标记细胞组和未标记细胞组的细胞增殖活性有统计学差异（P〈0．05）；对不同数量级的MIRB标记BMSC行MR．扫描，T2W1和T2＊WI能检测到的最小细胞数量级为1 x 1（一结论25μg Fe／ML和50μg Fe／mL的MIRB均能有效标记BMSC，但对BMSC的增殖活性有影响且随浓度增加而加重，因此25μg Fe／1nL是适合的标记浓度。1．5T MR可在体外检测到标记细胞信号改变，最小细胞数量级为1×10^5。

穗花杉双黄酮通过促进E-cadherin/β-catenin复合体表达抑制卵巢癌细胞迁移

目的探讨穗花杉双黄酮(AMF)对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响。方法采用细胞划痕实验与Transwell实验检测AMF对细胞迁移的影响,Western blotting检测AMF对SKOV3细胞黏附相关分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)与β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,细胞免疫荧光检测AMF对SKOV3细胞β-catenin表达与分布的影响。结果细胞划痕实验与Transwell实验显示,与对照组相比50μmol·L^(-1)与100μmol·L^(-1)AMF能够显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的迁移;Western blotting结果显示,与对照组相比,50μmol·L^(-1)与100μmol·L^(-1)AMF能够显著促进SKOV3细胞E-cadherin与β-catenin的表达;细胞免疫荧光显示,AMF能够显著促进β-catenin的表达,且主要分布于细胞膜。结论AMF能够抑制卵巢癌细胞SKOV3的迁移与侵袭,其主要机制可能与其上调细胞黏附分子E-cadherin/β-catenin复合体表达有关。

大鼠脂肪来源干细胞对紫外线造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用研究

目的探讨大鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对紫外线照射造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用。方法取3~4周龄SD大鼠(体质量100~120 g)腹股沟脂肪,利用Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养ADSCs并传代;取第3代细胞采用流式细胞仪检测其表面相关标记,行成骨及成脂诱导鉴定其多向分化潜能。另取SD大鼠关节软骨,利用酶消化法分离培养软骨细胞并传代,并行甲苯胺蓝染色鉴定。取第3代软骨细胞,采用40 J/m^2剂量紫外线照射;照射后细胞分别以正常培养基培养(照射组)、以含ADSCs培养上清的培养基培养(ADSCs上清组)或与ADSCs共培养(ADSCs组)24h。以不进行紫外线照射的正常第3代软骨细胞作为对照(对照组)。采用MTS法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色、Western blot法检测软骨细胞DNA损伤标志蛋白磷酸化组蛋白2A变异体(phosphorylatedhistone family 2A variant,γH2AX)的表达情况。结果经流式细胞仪检测及成骨、成脂诱导鉴定,所培养细胞为ADSCs。对照组、照射组及ADSCs上清组吸光度(A)值分别为2.20±0.10、1.34±0.04、1.57±0.06,照射组及ADSCs上清组显著低于对照组,照射组显著低于ADSCs上清组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色示,照射组、ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白荧光强度明显高于对照组,但ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白荧光强度明显弱于照射组,ADSCs组和ADSCs上清组则无明显区别。Western blot法检测示,照射组、ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白相对表达量均明显高于对照组,但ADSCs上清组及ADSCs组显著低于照射组,差异均有统计学意义(P<0.05);ADSCs组和ADSCs上清组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠ADSCs有助于恢复紫外线照射后的软骨细胞的增殖,降低DNA损伤标志蛋白γH2AX的表达,对紫外线照射所致软骨细胞损伤具有修复作用。