少加样高收效制备创伤修复剂纤维粘连蛋白的方法(英文)

背景纤维粘连蛋白不仅对细胞起支架作用,而且是细胞间重要的连结因子,具有类似调理素作用,可促进单核吞噬细胞系的吞噬功能,在炎症和创伤中起修复作用。目的以新鲜健康男性“O”型血浆为原料,为制备纤维蛋白结合素筛选出加样量小,方法简便、收得率高的纯化方法。设计开放性实验。单位广州市红十字会医院暨南大学第四附属医院创伤外科研究所。材料实验于2000-07/2002-07在广州市红十字会医院创伤外科研究所完成。材料主要包括新鲜健康男性“O”型血浆、明胶、CNBr-activatedSepharose4B、交联葡聚糖G-25、尿素、三羟甲基氨基甲烷等。方法用明胶与溴化氰活化琼脂糖珠偶联的亲和层析柱对纤维蛋白结合素进行纯化。①加人血浆取新鲜健康男性O型血浆150m L,每次向柱内加入25m L,停留20min,流速3.5m L/m in。②去杂蛋白用pH7.5的Tris-柠檬酸钠平衡液洗柱,洗至流出液280nm下吸光度值<0.02,再用含1mol/L NaCl的Tris-柠檬酸钠洗去其他杂蛋白。③收集纤维蛋白结合素用3m ol/L脲-Tris洗脱液洗柱,收集纤维蛋白结合素。④纤维蛋白结合素收集液去尿素取纤维蛋白结合素的收集液,过SephadeG-25,去除尿素。⑤除菌用0.22μm滤菌器过滤除菌。主要观察指标①十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果。②停留时间对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响。③加入血浆量对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响。结果①十二烷基黄酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分离胶浓度为7%,浓缩胶浓度为3%,纤维蛋白结合素电泳结果为单一蛋白区带。②停留时间对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响血浆加样量为150m L,柱内不停留和停留时间为10,20,30m in时纤维蛋白结合素收得率分别是(65.24±3.45)%,(74.77±4.05)%,(86.99±4.10)%,(80.47±3.75)%。③加入血浆量对提纯纤维蛋白结合素收得率的影响柱内停留时间为20m in时,血浆加样量为100,130,150,180m L时纤维蛋白结合素收得率分别是(72.56±3.63)%,(77.61±3.14)%,(86.99±4.12)%,(74.67±3.05)%。结论在明胶亲和柱体积不变的条件下,制备纤维蛋白结合素的量与血浆加样量、血浆在柱内停留时间密切相关。明胶亲和柱的血浆最佳加样量为150m L,每次血浆在柱内停留时间应为20m in,此法制备的纤维蛋白结合素加样量小,收得率高。

透明质酸钠预防骨关节炎Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化

目的 研究关节内注射透明质酸钠 (海尔根 )预防膝骨关节炎 (OA)过程中Ⅱ型胶原抗体水平及其动态变化。方法 取 12只成年新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型 ,随机等分为 2组。Ⅰ组术后当时及每 2周关节内注射 1ml 1%透明质酸钠 (Hyalgan)至 12周 ;Ⅱ组注射 1ml生理盐水为对照。各组术前及术后每隔 2周收集血清 ,建立间接法ELISA ,检测Ⅱ型胶原抗体水平。结果 Ⅰ组术后第 6、10、12周Ⅱ型胶原抗体水平与术前比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;Ⅱ组Ⅱ型胶原抗体水平第 10周显著高于术前 (P <0 .0 5 ) ;Ⅰ组与Ⅱ组同期比较Ⅱ型胶原抗体水平均无显著差异。结论 OA使机体产生自身免疫 ,引起自身Ⅱ型胶原抗体水平增加。透明质酸钠能促进体液免疫应答 ,导致抗体水平进一步升高。提示 ,注射透明质酸钠治疗膝骨关节炎时 。

建立ELISA法检测烧伤患者血清纤维连接蛋白活性

目的 :建立ELISA法检测烧伤患者血清纤维连接蛋白 (Fn)结合明胶活性并阐明其意义。方法 :采用明胶包被ELISA法 ,包被、封闭、加入待检血清、抗人Fn抗体、HRP SPA及TMB显色 ,测定 345例烧伤患者及 37例健康人血清Fn活性。结果 :该ELISA法敏感度高、特异性强、重复性好。检测烧伤患者血清发现Fn活性随着烧伤面积和深度的增加而降低 ,特重度烧伤患者Fn活性较健康人显著降低 (P <0 0 5 ) ,烧伤合并感染者血清Fn活性较未感染者降低。结论 :患者血清Fn活性下降与烧伤面积、深度和机体感染有关。

透明质酸钠预防骨关节炎时Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化(英文)

背景:研究表明透明质酸钠可作用于机体免疫系统,调节免疫细胞分泌细胞因子变化,从而抑制炎症,对治疗早期骨关节炎具有一定疗效。目的:观察关节腔内注射透明质酸钠预防膝骨关节炎过程中对Ⅱ型胶原抗体水平的影响及其动态变化。设计:随机对照观察。单位:广州市红十字会医院创伤外科研究所。材料:实验于2002-03/08在广州市创伤外科研究所动物及免疫室完成。选用成年新西兰大白兔12只。方法:取12只成年新西兰兔制备Hulth膝骨关节炎动物模型,随机等分为两组,透明质酸钠组和生理盐水对照组。透明质酸钠组术后当时及每2周关节内注射10g/L透明质酸钠1mL至12周;对照组注射生理盐水1mL为对照。各组术前及术后每隔2周收集血清,建立间接夹心酶联免疫吸附法,检测Ⅱ型胶原抗体水平。主要观察指标:对比分析不同时期实验组与生理盐水对照组预防兔膝骨关节炎血清Ⅱ型胶原抗体水平的动态变化及两组组内各时期Ⅱ型胶原水平与术前的比较。结果:所有实验数据均来自12只新西兰大白兔实验结果统计数据。透明质酸钠组术后第6,10,12周Ⅱ型胶原抗体水平与术前比较均显著提高(P<0.05);生理盐水对照组Ⅱ型胶原抗体水平第10周显著高于术前(P<0.05);透明质酸钠组与生理盐水对照组同期比较Ⅱ型胶原抗体水平均无显著差异。结论:骨关节炎使机体产生自身免疫,引起自身Ⅱ型胶原抗体水平增加。透明质酸钠能促进体液免疫应答,导致抗体水平进一步升高。提示注射透明质酸钠治疗膝骨关节炎时,应考虑其免疫调节作用。但值得一提的是,透明质酸钠为糖胺多糖本身不具备产生特异性Ⅱ型胶原抗体的免疫原性,它究竟通过何种途径调节体液免疫应答有待于进一步深入观察。

瘢痕增生与烧伤患者血清纤维连接蛋白明胶结合活性的相关性

目的:检测烧伤患者血清纤维连接蛋白(Fn)结合明胶活性,并探讨其与烧伤面积、深度和感染等因素的关系。方法:采用ELISA法平行检测345例烧伤患者、32例瘢痕患者和37例正常人对照血清Fn结合明胶活性。结果:随着烧伤面积和深度的增加,Fn结合明胶活性降低,特重度烧伤患者Fn活性显著低(P<0.05),瘢痕患者Fn活性显著高于正常对照(P<0.05)。烧伤患者Fn结合明胶活性与年龄、性别和血型无关。感染及吸入性损伤患者血清Fn结合明胶活性下降。同一烧伤程度不同性别Fn活性在中度和特重度烧伤组男性显著高于女性(P<0.05),瘢痕患者Fn活性男性显著高于女性(P<0.05);特重度烧伤Fn活性女性显著低于正常对照(P<0.05),瘢痕患者Fn活性女性显著高于正常对照(P<0.05)。结论:Fn活性降低与烧伤程度、吸入性损伤和机体感染有关。瘢痕患者血清Fn活性增加可能与其发病机制有关。Fn活性检测与含量测定具有不同病理生理意义。

周围神经缺损静脉桥接模型的制备

探讨静脉桥接周围神经缺损 (peripheralnervede fect,PND)静脉管制作技术。胰蛋白酶灌注法制作的去内膜静脉管 。