RNA干扰endophilin A2抑制大鼠海马神经元突触囊泡内吞

目的:探讨内吞蛋白(endophilin)A2对大鼠海马神经元突触囊泡内吞的影响。方法:设计干扰endophilin A2的小分子干扰片段,通过Western blot的方法筛选出针对endophilin A2有效的特异性干扰片段;用免疫荧光的方法验证干扰片段对神经元内源性endophilin A2的干扰效果;利用双全细胞膜片钳的方法,记录不同刺激方案下的兴奋性突触后电流(excitatory postsynaptic currents,EPSCs)的情况,以明确endophilin A2对突触囊泡循环的影响。结果:(1)免疫荧光结果显示endophilin A2的干扰片段能显著减少海马神经元内源性endophilin A2的表达(P<0.05);(2)双全细胞膜片钳结果显示,0.1 Hz的低频刺激下,干扰endophilin A2表达的神经元EPSCs大小与阴性对照组没有明显差异;而无论是单串高频刺激下还是多串高频刺激下,干扰endophilin A2表达的神经元标准化EPSCs的下降程度都明显增强(P<0.05)。结论:(1)成功筛选出特异性干扰endophilin A2的有效干扰片段;(2)干扰endophilin A2的表达不影响海马神经元突触囊泡胞吐;(3)干扰endophilin A2的表达可抑制大鼠海马神经元突触囊泡内吞。

脑梗死复发的相关因素分析

目的 探讨脑梗死复发的相关因素及二级预防方法。方法 回顾性分析了资料完整的 2 6 1例脑梗死患者 ,采用Logistic回归模型方法及 χ2 检验方法。结果 首次发病年龄、性别、既往TIA史、高血压病史、糖尿病史、高脂血症、服抗凝药及嗜烟与脑梗死复发相关 (P值均小于 0 .0 5)。年龄 <4 5岁者复发高于≥ 4 5岁者 (P <0 .0 0 5)。嗜烟≥ 10年者复发高于嗜烟 <10年者 (P <0 .0 0 1)。服抗凝药组 ( 76例 )与未服抗凝药组 ( 45例 )复发率比较有显著差异 (P <0 .0 1)。服抗凝药≥ 2年的患者与服抗凝药 <2年的患者复发率比较有显著差异 (P <0 .0 1)。结论 :首次发病年龄、TIA史、高血压病史、糖尿病史、高脂血症及嗜烟是脑梗死复发的危险因素 ,年龄<4 5岁、嗜烟≥ 10年的脑梗死患者更易复发。服抗凝药可减少复发率 ,服药时间≥ 2年效果更好。本研究提示对脑梗死患者应控制危险因素 。

活血化瘀药对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 时效量效关系对照验证(英文)

背景:脑缺血后再灌注性血脑屏障损伤是脑缺血和再灌注损伤的重要病理生理基础。目的:观察以活血化瘀的4个最基本中药(红花、桃仁、川芎、赤芍)作为施加因素对脑缺血再灌注大鼠血清和脑组织匀浆中的一氧化氮、免疫球蛋白、C 反应蛋白、补体等免疫指标及脑组织细胞形态和超微结构产生的变化,并验证其时效和量效关系。设计:随机对照实验,单盲法评估。材料:实验于2001-01/2002-12在广州市红十字会医院创伤研究所实验室完成。红花、川芎、桃仁、赤芍为单味中药饮片浓缩颗粒,按1∶1∶1∶2比例制成含2.5g/m L 生药汤剂(活血化瘀药)。实验动物选择成年雌性SD 大鼠138只,体质量280～300g,由广州中医药大学实验动物中心提供。干预:采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型(经2h 大脑中动脉阻断后再灌注24h)。138只大鼠随机分为6组,每组23只。假手术组:结扎各血管,不阻塞大脑中动脉。灌药1组:术前30m in 灌胃给予2g/kg活血化瘀药。灌药2组:术前30m in 灌胃给予2.5g/kg 活血化瘀药。灌药3组:术前连续7d 灌胃给予2g/kg 活血化瘀药。灌药4组:术前连续7d 灌胃给予2.5g/kg 活血化瘀药。对照组给予等容积生理盐水。①全部大鼠清醒后于缺血2h 再灌注24h 进行神经功能缺损评分(5分制,0～1分为神经功能轻度缺损,2～4分为神经功能重度缺损)。②再灌注24h 后从各组大鼠中随机选取10只,检测脑匀浆、血清C 反应蛋白及补体C3和C4水平采用速率散射比浊法,检测脑匀浆和血清中一氧化氮浓度采用硝酸还原酶法。③再灌注24h 后从各组大鼠中随机选取10只,麻醉后迅速断头取脑,然后在110℃烘箱中烘干至恒重,计算脑组织含水量。④光学显微镜下观察各组大鼠脑组织细胞形态。⑤再灌注24h 后从各组中随机选取3只大鼠,制备脑组织冠状切片,采用透射电镜观察各组大鼠脑组织超微结构。主要观察指标:①各组大鼠神经功能缺损评分结果。②各组大鼠脑匀浆及血清中C 反应蛋白及补体C3和C4水平,一氧化氮浓度。③各组大鼠脑组织含水量。④各组大鼠脑组织细胞形态和脑组织超微结构。结果:138只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠神经功能缺损程度比较:灌药各组大鼠缺血再灌注24h 后重度缺损所占比例明显低于对照组(P <0.01),灌药4组低于灌药2组(P <0.05)。②各组大鼠脑组织含水量比较:假手术组和灌药各组大鼠脑组织含水量低于对照组(P<0.05)。③各组大鼠脑匀浆一氧化氮浓度比较:假手术组和灌药各组大鼠低于对照组(P <0.01)。灌药3组低于灌药1组(P <0.05)。灌药4组低于灌药2,3组(P <0.01)。④各组大鼠血清一氧化氮浓度比较:假手术组和灌药各组血清一氧化氮浓度均高于对照组(P <0.01)。灌药3组高于灌药1组(P <0.05)。灌药4组高于灌药2,3组(P <0.05)。⑤各组大鼠脑匀浆和血清C 反应蛋白水平比较:假手术组和灌药各组低于对照组(P <0.05～0.01),灌药3组低于灌药1组(P <0.01),灌药4组低于灌药2,3组(P <0.05～0.01)。⑥各组大鼠脑匀浆和血清补体C3水平比较:假手术组和灌药各组低于对照组(P <0.05～0.01)。灌药3组低于灌药1组(P <0.05)。灌药4组低于灌药2,3组(P <0.01)。⑦各组大鼠脑匀浆和血清血清补体C4水平比较:假手术组和灌药各组低于对照组(P<0.05～0.01)。灌药3组低于灌药1组(P <0.05)。灌药4组低于灌药2,3组(P <0.01)。⑧各组大鼠脑水肿情况比较:对照组脑组织明显充血水肿,表明炎症反应明显。灌药组脑水肿、病理损害较对照组轻。⑨各组大鼠脑组织超微结构的改变:假手术组超微结构正常,对照组皮质坏死边缘区的细胞、毛细血管、髓鞘水肿明显,神经元细胞器减少,灌药3,4组细胞膜界限清楚,结构完整,线粒体丰富,大小均匀,有髓纤维形态正常,灌药1,2组介于两者之间。结论:①给予活血化瘀药大鼠神经功能缺损评分降低,用药时间长的大鼠神经功能缺损评分低,提示大鼠神经功能缺损程度改善与用药时间延长有关。②给予活血化瘀中药大鼠脑组织一氧化氮浓度降低,血清中一氧化氮浓度增高,说明活血化瘀中药可以逆转缺血再灌注后一氧化氮浓度在不同组织中的异常改变来减轻脑损伤。③给予活血化瘀中药大鼠脑组织和血清中补体C3和C4水平明显降低,说明该药可通过启动补体系统而减轻对脑组织的损伤,C 反应蛋白也明显降低,更进一步提示该药可抑制炎症反应。④用药时间越长脑损伤越轻,且用药剂量以2.5g/L 效果较好。

活血化瘀汤对抗大鼠脑缺血再灌注损伤的量效和时效作用(英文)

背景:已知脑缺血后再恢复血流可使脑损伤加重,也有一些研究结果证实中药的活血化瘀成分能对抗脑缺血再灌注损伤。目的:观察活血化瘀4个最基本中药(红花、桃仁、川芎、赤芍)作为施加因素对脑缺血再灌注大鼠血清、脑组织匀浆的免疫球蛋白、C 反应蛋白及补体等免疫指标变化的影响,并验证其量效和时效关系。设计:随机对照实验,单盲法评估。单位:广州市红十字会医院暨南大学附属第四医院神经内科。材料:实验于2001-01/2002-12在广州市红十字会医院创伤研究所实验室完成。实验动物选择成年雌性SD 大鼠138只,体质量280～300g,由广州中医药大学实验动物中心提供。红花、川芎、桃仁、赤芍为单味中药饮片浓缩颗粒,按1∶1∶1∶2比例制成含2.5g/m L 生药汤剂(活血化瘀药)。干预:采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型(经2h 大脑中动脉阻断后再灌注24h)。138只大鼠随机分6组,每组23只。假手术组:结扎各血管,不阻塞大脑中动脉。灌药1组:术前30m in 灌胃给予2g/kg 活血化瘀药。灌药2组:术前30m in 灌胃给予2.5g/kg 活血化瘀药。灌药3组:术前连续7d 灌胃给予2g/kg 活血化瘀药。灌药4组:术前连续7d 灌胃给予2.5g/kg 活血化瘀药。对照组给予等容积生理盐水。①全部大鼠清醒后于缺血2h 再灌注24h 进行神经功能缺损评分(5分制,0～1分为神经功能轻度缺损,2～4分为神经功能重度缺损)。②再灌注24h 后从各组大鼠中随机选取10只,采用速率散射比浊法检测脑匀浆、血清C 反应蛋白,补体C3,C4水平及血清IgG 含量。③再灌注24h后从各组大鼠中随机选取10只,麻醉后迅速断头取脑,然后在110℃烘箱中烘干至恒重,计算脑组织含水量。④光学显微镜下观察各组大鼠脑组织细胞形态。⑤再灌注24h 后从各组大鼠中随机选取3只,透射电镜观察各组大鼠脑组织超微结构。主要观察指标:①各组大鼠脑组织神经功能缺损评分结果。②各组大鼠脑匀浆、血清C 反应蛋白及补体C3和C4水平及血清IgG 含量。③各组大鼠脑组织含水量及脑组织细胞形态。④各组大鼠脑组织超微结构变化。结果:138只大鼠全部进入结果分析。①灌药各组大鼠缺血再灌注24h后重度神经功能缺损所占比例明显低于对照组(P <0.01),灌药4组低于灌药2组(13%,48%,χ2=6.571,P <0.05)。②脑组织含水量:假手术组和灌药各组大鼠脑组织含水量低于对照组(P <0.05)。灌药3组低于灌药1组(P <0.01)。③血清C 反应蛋白含量:假手术组和灌药各组低于对照组(P <0.01)。④血清补体C3含量:假手术组和灌药各组低于对照组(P <0.01)。⑤血清补体C4含量:假手术组和灌药各组低于对照组(P <0.01)。灌药3组低于灌药1组(P <0.01),灌药4组低于灌药2组和灌药3组(P <0.05)。⑥血清IgG 含量:假手术组和灌药各组低于对照组(P <0.01)。灌药4组低于灌药2组(P <0.05)。⑦脑匀浆C反应蛋白含量:假手术组和灌药各组低于对照组(t=5.626～17.929,P <0.01),灌药3组低于灌药1组(P <0.01),灌药4组低于灌药2组(P <0.05)。⑧脑匀浆补体C3水平:假手术组和灌药各组低于对照组(P <0.05～0.01)。灌药3组低于灌药1组(P <0.01)。灌药4组低于灌药2组(P <0.01)。⑨脑匀浆补体C4含量:假手术组和灌药各组低于对照组(P <0.05～0.01)。灌药3组低于灌药1组(P <0.01)。灌药4组低于灌药2组和灌药3组(P <0.01)。⑩脑组织充血水肿情况:对照组炎症反应明显,灌药组脑水肿、病理损害较对照组轻,⒒假手术组超微结构正常;对照组皮质坏死边缘区的细胞、毛细血管、髓鞘水肿明显,神经元细胞器减少,灌药3,4组细胞膜界限清楚,结构完整,线粒体丰富,大小均匀,有髓纤维形态正常,灌药1,2组介于两者之间。结论:①给予活血化瘀药使大鼠神经功能缺损评分降低,用药时间长的大鼠神经功能缺损评分低,提示用药时间长能更好地改善大鼠神经功能缺损程度。②给予活血化瘀中药可使大鼠脑匀浆和血清中补体C3和C4水平明显降低,血清IgG 含量降低,说明该药可通过启动补体系统而减轻对脑组织的损伤,C 反应蛋白也明显降低,更进一步提示该药可抑制炎症反应。③用药时间越长脑损伤越轻,且用药剂量2.5g/L 效果较好。