脐血CD_3AK细胞的制备、生物活性测定及临床应用初探

目的 研究用脐血单个核细胞制备CD3 AK细胞的抗肿瘤作用 ,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标。方法 分离脐血单个核细胞 ,分别用IL 2和IL 2 +CD3 Ab诱导LAK和CD3AK细胞 ,并测其扩增数量和对K5 6 2细胞的杀伤活性 ;测定肿瘤患者用CD3 AK细胞治疗前后外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性。结果 脐血LAK细胞和脐血CD3 AK细胞均于培养后第 11天时扩增倍数最高 ,分别是培养前的 18倍、2 4倍 ,对K5 6 2的杀伤活性分别是培养前的 2 .6倍和 3.2倍 ;肿瘤患者输注CD3 AK细胞一疗程后 ,其PBMC的NK杀伤活性由 6 2 %升高到 82 % ,平均升高 32 %。结论 (1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3 AK细胞良好的前体细胞。 (2 )LAK和CD3 AK细胞的数量和杀伤能力在培养的第 11天时达高峰 ,而且CD3 AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞。 (3)CD3 AK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性。 (4 )

脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的临床应用研究

目的:研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标。方法:分离脐血单个核细胞,分别用IL-2和IL-2+CD3Ab诱导LAK和CD3AK细胞,并测其扩增数量和对K562细胞的杀伤活性;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况和外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性。结果:脐血LAK细胞和脐血CD3AK细胞均于培养后11天时扩增倍数最高,分别是培养前的18倍、24倍,对K562的杀伤活性分别是培养前的2.6倍和3.2倍;肿瘤患者输注CD3AK细胞一疗程后,其外周血T淋巴细胞亚群绝对计数有明显升高:总T升高66.0%,Th升高68.0%,Ts升高58.0%;其PBMC的NK杀伤活性由63.0%升高到81.0%,平均升高28.0%。结论:1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3AK细胞良好的前体细胞。2)LAK和CD3AK细胞的数量和杀伤能力在培养的11天时达高峰,而且CD3AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞。3)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群绝对计数和PBMC的NK活性。4)肿瘤患者的外周血T淋巴细胞计数和PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数。

流式细胞术分析六类肿瘤患者外周血淋巴细胞绝对数值的变化

目的了解六类肿瘤患者的免疫状态,探讨T细胞亚群、NK细胞、B细胞绝对数值与肿瘤的相关性。方法采用流式细胞术检测204例肿瘤患者外周血淋巴细胞(T、Th、Ts、NK、B细胞)绝对数值,其中肺癌71例,肝癌39例,鼻咽癌28例,结肠癌29例,乳癌22例,食道癌15例,并与38例正常对照比较。结果与正常对照组比较,肿瘤患者外周血T细胞、Th细胞、Ts细胞、NK细胞绝对数值均降低(P<0.05),B细胞绝对数值无显著差异(P>0.05);各数值在不同肿瘤之间无显著差异(P>0.05)。结论肿瘤患者细胞免疫功能普遍低下,T细胞亚群、NK细胞、B细胞绝对数值可作为肿瘤患者免疫功能的监测指标。

结直肠癌变的两个分子生物学途径

结直肠癌可以分为遗传性的和非遗传的，遗传性结直肠癌有两种，一种是家族性腺瘤息肉病（famlllaladenomatouspolypests，FAP），另一种是遗传性非息肉病性结直肠癌（hereditarynonpolyposiscol－orectalcancer，HNPCC）。非遗传性结直肠癌即为散发性结直肠癌。遗传性结直...

神经生长因子的制备及生物活性测定

神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)是最早发现的神经细胞调节因子。自1987年以来,我们对NGF 的制备和应用进行了较系统的研究,现将我科用人体胎盘制备 NGF 及其活性测定的结果报告如下。1 材料和方法1.1 试剂和 NGF 制备1.1.1 试剂:羧甲基纤维素 CM_(52)。美国 Whatma 公司产品;DMEM 培养基,GIBCO 产品;

人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增

目的 研究人脐血来源的树突状细胞 (DCs)体外培养扩增 ,并检测其功能。方法 应用Ficoll Hypaque离心获得界面细胞 ,贴壁培养 2h ,获得单个核细胞 ,体外以重组hGM CSF( 5 0ng/ml) +hIL 4( 10ng/ml) +hTNF α( 5 0ng/ml)诱导培养 14天。在DCs发育过程中 ,在光镜下观察其生长情况 ,应用流式细胞仪检测DCs表型。采用MTT法检测DCs活化的T细胞对肿瘤细胞的杀伤性。结果 第 6天体外培养的DCs由贴壁状态变为悬浮毛刺状细胞 ,随着培养时间的延长 ,此类细胞数量增多 ,第 12天为形态不规则的毛刺状 ,为典型树突状细胞形态。流式细胞仪检测表明 ,成熟DCs高水平地表达HLA DR、CD 80、CD83、CD 1a、CD 11c、CD12 3。被激活的T细胞对 2种来源于不同组织的肿瘤细胞均产生了明显的杀伤性。结论 人脐血经rhGM CSF +rhIL 4+hTNF α体外诱导培养 ,能诱导出DCs。

CEA-rV负荷DC诱导CIK对CEA阳性肿瘤细胞的杀伤研究

目的用CEA-rV负荷脐血来源树突状细胞(DC)后,再诱导CEA抗原特异的细胞因子诱导的杀伤细胞,研究其对CEA阳性肿瘤细胞株杀伤活性的作用。方法用淋巴细胞分离液分离脐带血单核细胞,分别诱导DC、CIK细胞及CEA-rV负载DC后,再与CIK细胞混合培养诱导CEA特异的细胞毒性T淋巴细胞。分别用以上不同类型细胞杀伤CEA阳性和CEA阴性的肿瘤细胞株。结果CEA-rV诱导的特异性CIK对CEA阳性肿瘤细胞的杀伤活性,Lovo为58.2%、A549为62.4%,较之DC-CIK组对CEA阳性肿瘤细胞Lovo为44.8%、A549为50.2%,具有更高的杀伤活性,差异有统计学意义(P<0.05)。CEA-rV诱导的特异性CIK对CEA阴性肿瘤细胞的杀伤活性K562为79.7%、Bel7402为70.1%,DC-CIK组对CEA阴性肿瘤细胞K562为78.7%、Bel7402为67.8%,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。用CEA-rV诱导的特异性CIK对CEA阳性肿瘤细胞Lovo杀伤提高了89.4%,A549提高了83.1%;而对于CEA阴性肿瘤细胞K562杀伤提高了32.5%,Bel7402提高了21.7%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论负载CEA-rV基因重组痘苗的DCs(CEA-rV-DCs)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CEA-rV-DCs-CIK)对CEA阳性肿瘤细胞有特异性杀伤能力。