血液净化治疗在脓毒血症中的研究与应用进展

脓毒血症（sepsis）是指重症感染引起的全身炎症反应综合征,可导致多器官功能障碍,引起患者死亡。美国全国住院数据（nationwide inpatient sample）显示,脓毒血症在美国人群中发生率约为0.3%,脓毒血症死亡率高达30%[1]。来自于我国多中心的观察研究显示,ICU的患者中严重脓毒血症发生率为37.3%,死亡率达33.5%[2]。脓毒血症已经成为社会公共卫生事业面临的重大难题。

重组蛋白A免疫吸附剂的制备及吸附性能研究

以琼脂糖凝胶为载体,重组蛋白A为配基制备免疫吸附剂。过血浆动态吸附之后洗脱得到含有免疫球蛋白的洗脱液;通过分析洗脱液中免疫球蛋白的纯度可以考察吸附剂对免疫球蛋白的吸附选择性;最后利用等温静态吸附检测了吸附剂对人免疫球蛋白(hIgG)溶液的吸附行为。结果表明,洗脱液中免疫球蛋白的纯度大于92%,重组蛋白A吸附剂对免疫球蛋白吸附选择性较好;等温静态吸附结果符合Langmuir等温吸附模型;进一步分析Langmuir吸附模型,表明该吸附剂在临床治疗中有吸附量大的明显优势,重组蛋白A免疫吸附剂具有很好的临床应用前景。

内毒素血症的发病机制及治疗研究进展

综述了内毒素以及内毒素血症的发病机制等,并从传统中医药、抗生素及抗生素抗体治疗等方面简述了治疗内毒素血症的方法,重点阐述了血液净化技术的特点及其在治疗内毒素血症中的应用,并对血液净化法治疗内毒素血症的广阔前景进行了展望。

人IgE重链恒定区2～4区蛋白的真核表达、纯化及其相互作用分子捕获

目的真核表达、纯化人IgE重链恒定区2～4区(IgECε2-4)蛋白,利用表面等离子体共振技术(SPR)捕获其相互作用蛋白。方法构建3个含不同信号肽序列的IgECε2-4重组真核表达载体,分别瞬时转染HEK293FT悬浮细胞,优化选用表达量最高的重组质粒进行大量瞬转表达,镍柱亲和层析纯化。免疫荧光技术鉴定重组蛋白与KU812细胞表面IgE受体FcεRⅠ的结合,采用SPR技术捕捉人血清中与IgECε2-4相互作用的蛋白。结果含信号肽3(SP3)的重组质粒表达量最高,表达量约为6.2 mg/L;亲和纯化获得高纯度的人IgECε2-4蛋白;免疫荧光技术鉴定显示重组蛋白IgECε2-4可与KU812细胞表面受体结合。通过SPR技术捕获到人血清中39种可能与IgECε2-4结合的蛋白。结论获得纯化的重组蛋白IgECε2-4,IgECε2-4能与KU812细胞表面FcεR1α受体结合,靶标垂钓结果显示IgECε2-4能与人血清中的39种蛋白存在相互作用或有间接结合作用。

聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)桶用于血液透析浓缩液包装的适用性评价

目的探讨聚对苯二甲酸乙二醇酯[poly(ethylene terephthalate),PET]桶用于血液透析浓缩液包装的适用性。方法按照《口服液体药用聚酯瓶》和相关标准评价PET桶用于血液透析浓缩液包装的适用性。结果 PET桶的理化性能测试和血液透析浓缩液浸提后的溶出物试验表明,PET桶的理化性能和溶出物符合标准要求。以醋酸溶液(pH=2)浸提液后的锑浓度为0.093μg/ml,折算为5L A浓缩液中迁移出来的锑为47.7μg。按正常透析(稀释35倍,透析5h,用量4.28L)计算,单次透析时透析液中锑含量为40.8μg,远低于按WHO规定的6μg/kg日耐受摄入量计算的60kg成人日耐受量(360μg/日)。生物学评价结果显示,PET桶材料无体外细胞毒性,皮肤致敏反应为阴性,且无皮内反应。堆码模拟过程中没有出现PET桶或外包装纸箱变形,破裂和倒塌的现象。结论试验结果表明,所有试验结果均满足相应标准或应用要求,PET可用于血液透析浓缩液的包装。

血液净化用内毒素亲和吸附剂的制备研究

采用高碘酸钠法,以琼脂糖凝胶微球为载体,多粘菌素B(Polymyxin B,PMB)为配基,合成了血液净化用内毒素吸附剂,探讨了高碘酸钠的反应浓度、反应时间、反应温度对载体活化的影响,以及PMB的反应浓度、反应时间对偶联的影响,并对最优条件下合成的高分子吸附剂进行血浆中细菌内毒素的亲和性能评价。结果表明:琼脂糖活化时Na IO4的浓度为0.2 M、反应时间为4 h、反应温度为37℃时醛基含量达到最高值112.0μmol/g;配基偶联时PMB浓度为20 mg/mL、反应时间为4 h时配基偶联量达到最高值17.5 mg/g,静态吸附实验表明每毫升吸附剂填料对血浆中内毒素的吸附容量为71.7 EU,清除率为71.7%,表明该最优条件下合成出的吸附剂对血浆中细菌内毒素具有高选择性,高吸附容量。

超声辅助检测血浆内毒素的鲎试验方法及应用

目的探讨超声对检测血浆内毒素的影响。方法以富血小板血浆和贫血小板血浆为研究对象,以超声等不同预处理血浆方式作为标准,分为6组,A组(超声辅助预处理富血小板血浆组)、B组(无超声只漩涡振荡辅助预处理富血小板血浆组)、C组(内毒素处理剂辅助预处理富血小板血浆组)、D组(超声辅助预处理贫血小板血浆组)、E组(无超声只漩涡振荡辅助预处理贫血小板血浆组)、F组(内毒素处理剂辅助预处理贫血小板血浆组),每组5个样本,应用终点偶氮显色法鲎试剂定量检测血浆中微量内毒素。结果 (1)A组与B组间回收率具有显著性差异(t=9.424,P<0.001),但最优回收率数量无显著性差异(χ~2=1.111,P=0.500);A组与C组间回收率无显著性差异(t=-0.815,P=0.439),且最优回收率数量也无显著性差异(χ~2=0.000,P=0.778);D与E组间回收率具有显著性差异(t=30.395,P<0.001),但最优回收率数量无显著性差异(χ~2=2.500,P=0.222);D与F组间回收率无显著性差异(t=-0.375,P=0.717),且最优回收率数量也无显著性差异(χ~2=0.000,P=0.527);A与D组间回收率无显著性差异(t=0.355,P=0.732),且最优回收率数量也无显著性差异(χ~2=0.476,P=0.500)。(2)超声法变异系数小,分别为2.7%,3.5%,且测试回收率在90%~100%之间,比国家标准要求的50%~200%更加准确。结论采用超声辅助预处理血浆检测方法具有成本低、灵敏度高、检测结果可靠和检测效率高的优点。

小鼠抗人IgE单克隆抗体制备及鉴定

目的制备高特异性的小鼠抗人IgE单克隆抗体(mAb)作为候选免疫吸附剂。方法用重组人IgE重链2~4区(IgECε2-4)免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后,用甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞。用IgECε2-4包被酶标板,间接ELISA筛选阳性细胞株,用天然IgE、IgG、IgM、IgA、IgD包被酶标板,间接ELISA检测阳性杂交瘤细胞无血清培养上清与天然IgE的亲和性和特异性;将稳定分泌特异性抗IgE mAb的细胞株扩大培养,小鼠体内诱生腹水法制备mAb,检测腹水的效价和亲和力,利用mAb亚型鉴定试剂盒检测获得的mAb的亚型。结果经过5次细胞融合总共得到29株阳性杂交瘤细胞,有11株与天然IgE亲和性较强,有2株与其他免疫球蛋白几乎无交叉反应,分别为3E9和7B4。结论成功制备了小鼠抗人IgE mAb,该mAb具有高效价、较高亲和力和高特异性。

血液净化用载体的研究现状及未来发展

血液净化是清除血液中毒物和致病物的重要方法,包括血液灌流、血液滤过、血液透析等。血液净化的核心技术就是血液净化吸附剂的选择,因此选择合适的血液净化吸附剂用载体起着至关重要的作用。本文简要介绍了血液净化用载体的基本要求、血液净化疗法的基本原理以及血液净化用载体的开发现状,并对其未来的发展进行了评述。