高效液相色谱法测定环吡酮搽剂中环吡酮的含量

目的：用高效液相色谱法测定环吡酮搽剂中环吡酮的含量。方法：采用德国Purospher C18柱(4．0mm×125mm，5μm)以流动相A(乙腈)-流动相B(含25mmol·L-1枸橼酸、2．5mmol·L-1乙二胺四乙酸二钠，10％氢氧化钠溶液调pH6．5)(35：65)的混合液作为流动相，流速为1．0mL·min^-1，检测波长303nm，柱温30℃。结果：环吡酮在100～300μg·mL^-1范围内，浓度与峰面积的线性关系良好(r=0．9999)，高、中、低3种不同环吡酮浓度的平均回收率范围为99．9％～100．8％，RSD为0．35％～0．51％(n=3)。结论：本方法简便，快速，结果准确，可靠，重现性好，可供本品质量控制用。

抗艾滋病病毒蛋白CVNH在大肠杆菌中表达条件的优化

CVNH(Cyanovirin-N homology)蛋白家族是具有抗HIV活性的蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)的同源物。在前期研究中,已首次获得水蕨Ceratopteris thalictroides CVNH基因的全长序列,构建了pET32a-CtCVNH的原核表达载体。以此为基础,对CVNH在大肠杆菌Rosetta 2(DE3)中的表达条件进行优化。分别探讨了最佳培养基类型及成分、培养基初始pH、诱导时机、诱导剂浓度及诱导时间。优化后的诱导条件是:含24 g.L-1酵母提取物和72 g.L-1胰蛋白胨的TB培养基、培养基初始pH为8.0、菌液A600nm为0.6时加入1.6 g.L-1乳糖诱导6 h。CVNH蛋白的表达量较优化前提高了1.9倍。这为进一步开展CVNH的药物研制和开发奠定基础。

中药五环三萜类有效成分抗人肺癌细胞增殖和侵袭作用的研究

目的:研究中药五环三萜类有效成分熊果酸和齐墩果酸抗人肺癌细胞增殖、侵袭的作用,并探讨其抗侵袭作用的机理。方法:用熊果酸和齐墩果酸分别作用于克隆化高转移人肺癌细胞(PGCL3),测定细胞增殖抑制率、软琼脂集落形成率、对重建基底膜的侵袭能力、趋化运动能力、对层粘连蛋白的粘附能力以及组织蛋白酶B活性分泌等多项指标。结果:熊果酸和齐墩果酸均可降低PGCL3细胞增殖能力(P<0.001),IC50分别为44.73μmol/L和40.71μmol/L;30μmol/L、40μmol/L熊果酸和35μmol/L、45μmol/L齐墩果酸均能抑制PGCL3细胞的侵袭能力(P<0.001)且有剂量依赖性。抗侵袭作用机理的分析结果显示上述浓度的两种药物对细胞的运动、粘附能力及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用且均有统计学的显著意义,软琼脂集落形成率也显著降低。结论:熊果酸和齐墩果酸均有抗人肺癌细胞增殖和侵袭能力,其抗侵袭作用不是对侵袭的某一环节的阻断,而是对侵袭各个基本环节的全面抑制作用。

HproTα／hIL-2融合蛋白真核载体的构建及鉴定

利用基因重组技术构建了含信号肽的人源胸腺素α原和白介素2(proTα/IL-2)融合基因的真核表达载体pVAX-PI。用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,转染后24、48、72、96 h采用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2的表达情况,分别用CTLL-2依赖细胞株/MTT法和脾细胞增殖实验测定融合蛋白IL-2和proTα活性,采用ECL western blotting分析和鉴定目的蛋白的相对分子质量大小。结果表明,转染上清在31 kDa处有特异性阳性反应条带,质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且于转染后48 h目的蛋白的表达量达峰值。细胞转染上清中的IL-2活性可达58 IU/mL,proTα具有促进小鼠脾脏细胞增殖的作用,可作为基因治疗药物的开发之用。

研究白茶提取物的抗氧化及肝保护作用

目的:本实验通过研究白茶提取物对四氯化碳(CCl4)引发的肝损伤是否起到一定程度上的改善作用,为白茶的药用价值提供一定的理论依据。方法:用白茶提取物高、中、低三个剂量组和白茶提取物非CCl4处理组注射CCl4及生理盐水前连续4天给予小鼠灌胃白茶提取物混悬剂,空白对照组及阴性对照组同样灌以同体积的生理盐水,每天一次。第4天,白茶提取物高、中、低三个剂量组及阴性对照组腹腔注射CCl4,空白组及白茶提取物非CCl4处理组腹腔注射同体积的生理盐水。24小时后取肝组织样品观察病理状态。结果:与阴性对照组的小鼠肝脏病理状态相比,加入了不同浓度白茶提取物对肝脏的保护相对较强,且随着浓度的增大,保护作用有所增强。结论:白茶提取物具有较高的抗氧化作用;白茶提取物对肝损伤有保护作用。

人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆与原核表达

目的克隆人胸腺素α原/白介素2融合基因,构建其原核表达载体并在大肠杆菌系统中有效表达。方法采用RT-PCR方法,从人白血病细胞和人T淋巴细胞中分别扩增得到胸腺素α原/白介素2基因,利用基因重组技术将融合基因片段重组于pET42a原核表达载体上,构建成pET42a-PI。经酶切、测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导蛋白表达。表达产物经离子交换和分子筛纯化后进行Western blot分析,通过人外周血单核细胞玫瑰花结实验对融合蛋白进行了初步的活性测定。结果凝胶电泳显示PCR产物的长度约750 bp,测序结果表明,扩增片段与预期序列一致。重组菌在IPTG诱导下表达相对分子质量为28 kDa的蛋白,纯化后的融合蛋白能提高人外周血单核细胞玫瑰花结形成率,表明具有一定活性。结论成功克隆和构建了人胸腺素α原/白介素2融合基因的原核表达载体,并在原核表达系统中得到有效表达。

浅谈质量受权人制度在我国的实施

本文通过笔者在担任质量受权人期间的工作体会，对质量受权人制度在我国实施现状及成效进行分析，提出实施过程中存在的问题。对完善我国质量受权人制度的措施进行探讨，确保企业质量受权人制度的顺利推进。