基于Illumina Hiseq 4000高通量测序平台的暗色唇鲮线粒体基因组特征分析

【目的】研究暗色唇鲮(Semilabeo obscurus)的分子遗传学特性,为暗色唇鲮种质资源遗传多样性分析和分子标记研究提供基础数据。【方法】利用高通量第二代测序技术,构建暗色唇鲮线粒体基因组全序列,分析序列的结构特征。【结果】暗色唇鲮的线粒体基因组全序列长度16598~16599 bp,GC含量42.65%~42.7%,共含有13个蛋白编码基因、22个tRNA、2个rRNA(12S-rRNA和16S-rRNA)以及1个控制区。线粒体基因组除ND6外,GC-skew值均为负值,COXI、ND3以及ND6的AT-skew值为负值,其余基因的AT-skew值均为正值。暗色唇鲮的13个蛋白编码基因氨基酸总长为3794 aa,偏好密码子(RSCU>2)分别是终止密码子Arg(CGA)、Gly(GGA)、Leu(CTA)、Pro(CCA)、Ser(TCA)以及终止密码子Stp(TAA)。暗色唇鲮(唇鲮属Semilabeo)与泉水鱼Pseudogyrinocheilus prochilus的亲缘关系最近,和卷口鱼Ptychidio jordani、直口鲮Rectoris posehensis、异华鲮Parasinilabeo assimilis存在较高的亲缘关系。【结论】暗色唇鲮的线粒体基因组结构和基因排列顺序与鱼类基因组典型结构和排列一致。

桑源阴沟肠杆菌LAMP检测方法的建立和应用

桑源阴沟肠杆菌是引起桑树发生枯萎症状的重要病原之一。对桑源阴沟肠杆菌全基因组序列进行分析,得到桑源阴沟肠杆菌特异基因序列,并以该特异基因序列为靶序列,设计筛选合适的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物组,通过荧光扩增曲线法、PCR产物琼脂糖凝胶电泳法及PCR产物SYBR Green Ⅰ染色法3种判定方法优化反应体系,进而建立桑源阴沟肠杆菌LAMP检测技术和产品。采用Yt4引物组,在60℃、外内引物浓度比为1∶10的最优反应条件下,桑源阴沟肠杆菌阳性质粒检测灵敏度为25×10^6拷贝/μL。在特异性实验中,桑源阴沟肠杆菌菌株的阳性反应能产生S型荧光扩增曲线,电泳法可得到梯形条带,染色法反应液变为绿色,而在其他供试菌株及阴性对照中均未发生这些现象。应用建立的LAMP检测法和普通PCR方法分别对来自4个不同地区的11个桑树枯萎症状样品进行同步平行检测,2种方法的检测结果一致,但LAMP检测法更简单、快捷和灵敏。建立的桑源阴沟肠杆菌LAMP检测方法,为桑源阴沟肠杆菌的快速检测及桑树枯萎病的诊断提供了新技术。