8432张阿奇霉素联合孟鲁司特钠治疗呼吸系统疾病的门诊处方分析

目的:分析阿奇霉素联合孟鲁司特钠治疗呼吸系统疾病的处方应用情况,为临床用药提供参考。方法:随机抽取我院2012年7月～2013年6月同时含口服阿奇霉素和孟鲁司特钠及诊断为呼吸系统疾病的门诊处方8432张,利用Excel对设计的项目的用药情况进行统计分析。结果:8432张处方6个月以下患者处方占4.47%(377/8432);6个月～18岁患者处方7060张,占83.73%(7060/8432);19岁以上成年患者占11.80%(995/8432)。结论:阿奇霉素联合孟鲁司特钠治疗呼吸系统疾病门诊处方的使用基本合理,但在与其他止咳平喘药、抗组胺药、糖皮质激素类药一起治疗时,应注意茶碱类、支气管扩张剂、糖皮质激素类的用药剂量、用药天数方面适当调整。

联合靶向Survivin和Livin的双重siRNA表达载体的构建及其活性鉴定

目的构建联合靶向凋亡抑制基因Survivin和Livin的双重siRNA表达载体并鉴定其活性,为研究同时下调Survivin和Livin表达的协同效应奠定基础。方法选取已证实有效的分别靶向Survivin和Livin的siRNA序列,通过定向克隆技术构建同时编码2个siRNA分子的真核表达载体pSilencer2.1-Sur-Liv,将其转染HepG2细胞后检测Survivin和Livin mRNA水平的变化,同时转染表达DsRed2-SURVIVIN和GFP-LIVIN的Hela荧光报告细胞观察荧光强度变化。结果双重siRNA表达载体pSilencer2.1-Sur-Liv构建成功,转染HepG2后Survivin和Livin mRNA水平明显下降,转染Hela报告细胞后荧光强度变弱。结论联合靶向Survivin和Livin的双重siRNA表达载体构建成功,并能有效下调Survivin和Livin的表达水平。

两种条件下实时测定硝苯地平片溶出度研究

目的对比中国药典法与日本橙皮书法条件下硝苯地平片溶出度测定结果,为本品质量控制、溶出度评价提供依据。方法随机取6个市售不同厂家硝苯地平片,采用光纤药物溶出度实时测定仪进行溶出度测定,并将2种条件下测定的结果进行比较分析。结果 6个厂家样品采用中国药典法条件测定的溶出度在60 min时均能达到75%以上,符合中国药典标准规定,但6个厂家样品溶出行为存在差异;采用日本橙皮书法条件测定的溶出度30min时均小于70%,达不到日本橙皮书标准规定,且60 min时均未达到溶出平台。结论硝苯地平片溶出度在2种条件下检测的结果存在显著性差异,6厂家样品质量存在差异,且中国药典法溶出条件比日本橙皮书法宽松。

艾滋病DNA疫苗细菌内毒素检查法的方法建立

目的建立艾滋病DNA疫苗细菌内毒素的检查法。方法根据《中国药典》(2020年版)四部通则1143凝胶法进行细菌内毒素检查和方法学验证,验证该方法的灵敏度、干扰试验、中间精密度以及耐用性。结果经过灵敏度复核,鲎试剂(0.5 EU·mL^(-1))的λC在0.5λ~2.0λ,干扰试验显示供试品在最大稀释倍数下对结果无干扰,中间精密度符合要求,不同厂家、供试品阳性对照的配制方法结果显示该方法耐用性好。结论建立的方法有较好的灵敏度、专属性、中间精密度和耐用性,可用于艾滋病DNA疫苗细菌内毒素的检测。

醒脑开窍针刺法治疗脑梗死早期运动功能障碍的临床观察

【目的】观察醒脑开窍针刺法治疗脑梗死早期运动功能障碍的临床疗效。【方法】将96例早期脑梗死患者随机分为观察组和对照组,每组各48例。对照组给予常规治疗,观察组在对照组治疗的基础上,给予醒脑开窍针刺法治疗。连续治疗8周。治疗8周后,观察2组患者治疗前后美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分与简化肢体运动功能评定量表(FMA)评分的变化情况,以及功能性步行量表(FAC)评分与Barthel指数(BI)评分的情况,比较2组患者治疗前后血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化情况,并采用表面肌电图检测肱二头肌、腕屈肌、股直肌、股二头肌的积分肌电值(iEMG)的变化情况。【结果】(1)治疗后,2组患者的NIHSS评分与BI指数评分均明显改善(P<0.05),且观察组在改善NIHSS评分与BI指数评分方面均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)治疗后,2组患者的FMA评分(包括上肢与下肢)及FAC评分均明显改善(P<0.05),且观察组在改善FMA评分(包括上肢与下肢)及FAC评分方面均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗后,2组患者的IL-6、IL-8、TNF-α含量均明显改善(P<0.05),且观察组在改善IL-6、IL-8、TNF-α含量方面均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)治疗后,2组患者的肱二头肌、腕屈肌、股直肌、股二头肌iEMG值均明显改善(P<0.05),且观察组在改善肱二头肌、腕屈肌、股直肌、股二头肌iEMG值方面均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】醒脑开窍针刺法治疗脑梗死早期运动功能障碍,能明显改善患者的运动功能,提高患者的生活质量,减轻氧化应激反应,疗效显著。

动态显色法检测注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子中内毒素的含量

目的建立定量检测注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)中内毒素的质控方法。方法采用动态显色法,通过标准曲线的可靠性验证和干扰试验,建立检测rhGM-CSF中内毒素的定量方法。结果标准曲线可靠性验证中,曲线的R2均>0.98,标准曲线成立;干扰试验显示,供试品复溶后稀释5倍后加入0.5 EU/ml的标准内毒素作为供试品回收液,经检测其内毒素回收率均接近100%,该稀释倍数下,供试品浓度对内毒素实验的干扰作用较小;另外,日常检测2批供试品的内毒素含量均小于限值,与凝胶法检测结果一致。结论该动态显色法方法可用于rhGM-CSF中内毒素的定量检测。

基于离子交换色谱法检测结核治疗性DNA疫苗纯度的方法建立

目的建立并验证结核治疗性DNA疫苗纯度的高效液相色谱测定方法。方法采用TSK gel DNA-NPR(4.6 mm×75 mm,2.5μm)色谱柱,流动相:以20 mmol·L^-1三羟甲基氨基甲烷(pH=9)为流动相A,以20 mmol·L^-1三羟甲基氨基甲烷-1 mol·L^-1氯化钠(pH=9)为流动相B,梯度洗脱,柱温:25℃;流速:0.5 mL·min^-1;检测波长:260 nm。结果质粒DNA在0.5~2.5μg的范围内与峰面积呈良好线性关系,R^2=0.9998,该法专属性、精密度和耐用性良好,检测限为0.001 mg·mL^-1,供试品在24 h内稳定。结论该方法符合检测结核治疗性DNA疫苗纯度的要求,适用于该产品的质量控制。

结核DNA疫苗宿主蛋白残留检测方法的建立

目的建立结核DNA疫苗中大肠杆菌宿主蛋白残留量检测的方法。方法采用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)建立结核DNA疫苗中宿主蛋白残留量检测的方法,对方法的准确度、专属性、线性范围和耐用性等进行验证,并采用建立的方法对结核DNA疫苗原液进行测定。结果大肠杆菌宿主蛋白含量在2~24ng·L^(-1)范围内,相关系数R 2>0.990,线性关系良好;该法宿主蛋白含量在高中低浓度范围内,回收率在70%~120%之内,准确度良好;该法不易受辅料、核酸、孵育温度和孵育时间影响,专属性和耐用性较好;三批原液的宿主蛋白残留量(HCP)均<1μg·mg^(-1)。结论此方法有较好的准确度、专属性、重复性、中间精密度和耐用性,可用于结核DNA疫苗的宿主蛋白残留量的检测。

半定量法检测结核DNA疫苗中SDS残留量的方法学验证

目的建立半定量法检测十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)残留量并进行方法学验证,用于结核DNA疫苗的质量控制。方法样本中残留的SDS与吖啶橙形成复合物,用Spectra Max 340PC微孔板检测器测定该复合物的吸光度。通过定量法测定SDS的残留量时,样品的吸光度不在标准曲线线性范围内,采用对比供试品与对照溶液的吸光度的半定量法,判断供试品中SDS的残留量。结果该方法回收率范围为102%~105%,不同人员、不同时间测定结果一致,该法受辅料、测试温度、萃取时间的影响较小,测定的3批供试品SDS残留量均小于0.02%。结论建立的方法准确度、中间精密度、专属性和耐用性较好,可用于结核DNA疫苗中SDS残留量的快速检测。

冻干机性能验证方法的建立和应用

目的:建立真空冷冻干燥机(冻干机)性能验证方法,对LYOTK5型冻干机性能进行验证。方法:根据2010版药品生产和质量管理规范(GMP)指南的要求,对冻干机抽真空速率、在线清洗和灭菌系统(CIP/SIP)、板层温度均匀性等性能指标进行测试,验证其是否符合产品工艺需求。结果:冻干机抽真空至25 Pa以下,所需时间<40 min;在线清洗覆盖率100%;在线灭菌完全,各温度点F_0>15 min;板层均匀性温度保持在-40℃、0℃和40℃时,各板层所有测试点在同一时刻温度最大值与最小值温差<2℃。结论:通过测试验证,所用冻干机各项性能可满足生产要求。

注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子中内毒素的定量检测

目的建立定量检测注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子（rhGM-CSF）的细菌内毒素含量的方法。方法参考《中国药典》2010年版中细菌内毒素的检测方法，通过建立标准曲线和预干扰实验确定样品的稀释倍数，采用终点显色法定量检测rhGM—CSF细菌内毒素含量。结果注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子（rhGM-CSF）进行2倍稀释，用细菌内毒素定量法检测无明显干扰作用，内毒素回收率在50％～200％，检测结果与凝胶法结果一致。结论应用终点显色法测定注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子（rhGM．CSF）中的细菌内毒素是可行的。

人外周血淋巴细胞培养基冻干工艺研究

目的对染色体分析用人外周血淋巴细胞培养基进行冻干工艺进行优化。方法首先以澄清度和细胞培养分裂相比例为检测指标确定冻干前培养液浓缩倍率。其次运用正交试验设计法L934法,以冻干粉外观、水分残留率、分裂相比例为检测指标,对冻干工艺过程的的预冻、升华干燥、解析干燥等三个阶段的主要参数进行考察和分析,获得主要参数最优组合的冻干曲线。最后,以优化的冻干工艺生产的三批冻干培养基进行适用性验证。结果确定冻干前培养液的浓缩倍率为3.0。正交实验分析表明:主干燥时间和主干燥真空压力对细胞分裂相比例的影响有显著的统计学意义(p<0.05)。优化的冻干参数为预冻温度-45℃、时间2 h;升华干燥阶段温度从-45℃升温至20℃,时间14 h,真空压力35 Pa;解析干燥阶段的温度维持于28℃,真空压力为1.0 Pa,终点测试压力无变化时通入干燥无菌空气至冻干箱内压力为76 kPa后压塞,再通入干燥无菌空气至箱体内压力为1个标准大气压时冻干结束。用优化冻干工艺生产的三批培养基的验证结果显示外观合格率、水分残留率、常温保存180 d后的分裂相比例均符合质量标准要求。结论优化的淋巴细胞培养基冻干工艺可行,可用于制备常温贮存的人外周血淋巴细胞培养基。

人粒细胞巨噬细胞刺激因子过滤工艺确认研究

目的考察滤器(滤膜)与人粒细胞巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)药液的相互作用。方法对滤器的吸附性、可提取物、兼容性等各项目进行试验,确认其符合广州白云山拜迪生物医药有限公司产品质量要求。结果活性药物成分rhGM-CSF过滤前后无明显吸附;每个Millipak 20滤器可提取不挥发物总量为0.5 mg,总有机碳为0.3 mg,可提取物经傅里叶变换红外光谱(FTIR)和反向高效液相色谱(RP-HPLC)分析鉴定为聚丙烯酸酯,无生物毒害;膜片和滤器均表明不存在兼容性问题。结论采用的过滤器及滤膜符合药品质量要求,可为进一步评估过滤工艺提供数据支持。

HPLC在注射用重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子冻干粉针剂主药含量测定中的应用

目的建立注射用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)冻干粉针剂中主要活性成分的HPLC的测定方法。方法 HPLC色谱条件中,色谱柱为TSK gel G3000SW(300.0 mm×7.5 mm,5μm),流动相为0.1 mol/L磷酸盐缓冲液,流速为1 ml/min,自动进样20~40μl,检测波长为280 nm。研究该色谱条件是否能分析rh GM-CSF冻干粉针剂中的各组分、实验重现性以及不同进样体积与各组分峰面积的线性关系。结果检测出rh GM-CSF冻干粉针剂中的主成分为rh GM-CSF蛋白和人血白蛋白,rh GM-CSF蛋白进样量与峰面积呈良好线性关系,R2>0.99,百分含量的RSD值均<3%。结论该法可用于检测rh GM-CSF冻干粉针剂蛋白量在10~20μg范围内的的活性成分含量。

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子宿主DNA残留的研究

目的建立及优化重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)宿主DNA残留的检测方法。方法基于固相斑点杂交原理,以rhGM-CSF的工程菌DNA为模板,制备地高辛标记的探针,用试剂盒及药典的方法处理阳性对照品,并将其与探针进行杂交,采用底物显色法和化学发光法显色,建立灵敏度较高的检测方法;运用建立的方法检测2批次rhGM-CSF原液中DNA残留量。结果样品经试剂盒处理,杂交后采用化学发光法显色灵敏度较高,可达到10 pg;2批rhGM-CSF原液每人份剂量的宿主DNA残留量均小于100 pg。结论该方法具有检测灵敏度高、准确性好、操作简便等优势,可用于rhGM-CSF原液的检测及质量控制。

原核与真核生物宿主DNA残留检测方法的建立与比较

目的建立原核生物[大肠杆菌(E.coli)]和真核生物(酵母菌和CHO细胞)宿主DNA残留的检测方法,并比较检测方法的灵敏度。方法以E.coli、酵母菌和CHO细胞宿主DNA为模板,制备地高辛标记的探针。将探针与宿主DNA进行杂交后采用底物显色法显色,建立3种生物宿主DNA残留检测方法,并比较温度对检测方法灵敏度的影响。结果建立了E.coli、酵母菌和CHO细胞宿主DNA的检测方法,灵敏度高达10 pg;同一条件下真核生物宿主DNA残留检测方法的灵敏度要高于原核生物。结论该检测方法具有灵敏度高、准确性好、操作简便等优势,可用于E.coli、酵母菌和CHO细胞宿主DNA残留的检测及质量控制。

氯吡格雷对比阿司匹林预防缺血性脑梗死再发的临床观察

目的:观察氯吡格雷对比阿司匹林预防缺血性脑梗死再发的疗效和安全性。方法:选取首次发生缺血性脑梗死患者96例,将其按照随机数字表法分成试验组(49例)和对照组(47例)。试验组患者给予氯吡格雷150 mg,口服,qd;对照组患者给予肠溶阿司匹林100 mg,口服,qd。两组患者皆连续服药24周。记录患者治疗前后颈动脉粥样硬化斑块面积、颈动脉管腔直径(CCAD)、内中膜厚度(IMT)、斑块性质、血浆黏度、全血低切黏度、血小板最大聚集率(MAR),并观察患者脑梗死再发情况及治疗过程中的不良反应发生情况。结果:治疗后试验组患者总有效率高于对照组(P<0.05);试验组患者颈动脉粥样硬化斑块面积、IMT、斑块总数、低回声斑块数、全血低切黏度、血浆黏度以及MAR均小于对照组,而CCAD大于对照组(P<0.05);试验组患者脑梗死再发率和不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论:氯吡格雷比阿司匹林能更有效地稳定和逆转缺血性脑梗死患者易损斑块,改善血液流变学,而且能够降低脑梗死再发的概率,安全性亦较好。

重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子原液工作对照品质控方法及质量标准的建立

目的建立重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage-colony stimulating factor,rh GMCSF)原液工作对照品质控方法及质量标准。方法利用NFS-60细胞增殖抑制法测定rh GM-CSF原液工作对照品的生物学活性和比活性;福林酚法测定蛋白含量;聚丙烯酰胺凝胶法(SDS-PAGE)、高效液相色谱法测定纯度;等电聚焦电泳法测定等电点;Edman法分析N-末端氨基酸序列;质谱法测定质谱分子量;液质肽图法分析二硫键和肽质图。结果 rh GM-CSF原液工作对照品各项鉴定指标经中国食品药品检定研究院标定合格,符合《中华人民共和国药典》(2015年版)、《生物制品国家标准物质制备和检定规程》、《人用重组人DNA蛋白制品总论》的要求。结论建立的质控方法及质量标准符合理化对照品的相关规定,具有安全、有效、质量可控的特点,rh GM-CSF原液工作对照品可用于检验的比较和判断。

结核DNA疫苗中卡那霉素残留的半定量检测法的建立及验证

目的用半定量法检测结核DNA疫苗中卡那霉素残留量。方法优化酶联免疫吸附法,验证该方法的准确度、中间精密度、专属性和耐用性。结果该方法能通过吸光度值的比较,判断供试品的含量,平均加样回收率为117%,准确度符合要求,其中间精密度符合要求。卡那霉素和其他3种相同浓度的抗生素(氨苄西林、庆大霉素、四环素)吸光度值相比,阳性率<1%,无交叉反应。当孵育温度和时间改变时,结果的RSD值均<20%。结论建立的方法有较好的准确性、中间精密度、专属性和耐用性,可用于结核DNA疫苗中卡那霉素残留量的检测。

治疗性结核DNA疫苗SDS含量检测

目的应用吖啶橙法来检测治疗性结核DNA疫苗中的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)的残留量。方法将SDS标准液与吖啶橙混合后,经甲苯萃取处理后在波长499 nm测定吸光度值,根据标准曲线计算供试品中SDS的含量。结果SDS浓度在0.005~0.32 mg·m L^(-1)的范围内,相关系数r>0.99,线性关系良好。该法受高温、辅料和核酸的影响较小。3批制剂的SDS残留量均小于0.02 mg·m L^(-1)。结论建立的方法操作简便、专属性、准确度和重现性较好,可用于结核DNA疫苗制剂中SDS残留量的检测。