黄芪对红斑狼疮细胞凋亡和T淋巴细胞亚群的影响

目的:研究黄芪对系统性红斑狼疮(SLE)细胞凋亡和T淋巴细胞亚群的影响,探讨其对SLE的治疗作用。方法:将80例初发SLE患者随机分为常规治疗组和黄芪治疗组(常规治疗的基础上加用黄芪注射液)。观察两组患者治疗前后外周血淋巴细胞上Fas、Bcl-2抗原的表达和T淋巴细胞亚群的变化。结果:两组患者治疗后外周血淋巴细胞上Fas抗原的表达下调(P<0.01),Bcl-2抗原的表达以及CD4+亚群、CD4+/CD8+比值上升(P<0.01);其中,治疗后Fas抗原表达的下调、CD4+亚群及CD4+/CD8+比值的上升在黄芪治疗组更显著(P<0.05)。结论:黄芪在一定程度上增加了激素/免疫抑制剂对细胞凋亡的抑制作用,调节T淋巴细胞亚群比例和功能趋于正常,可以作为提高SLE疗效的重要治疗措施。

社鼠和针毛鼠线粒体DNA序列的歧异及其系统进化关系

社鼠和针毛鼠是有着广泛地理分布的山地鼠种,它们的一些形态特征及核型明显有别于同属的其它鼠类。社鼠的亚种——雷琼社鼠局限于分布在广东省西部地区和海南省,它的形态特征多似社鼠,但也有少数特征相似于针毛鼠。对于社鼠和针毛鼠的分类地位及社鼠亚种的分化一直有着各种讨论。本研究进行了社鼠和雷琼社鼠以及针毛鼠龙门种群和香港种群的细胞色素b(264个核苷酸位点)和12SrRNA(387个核苷酸位点)基因片段的测序。社鼠与雷琼社鼠线粒体的细胞色素b基因片段问包含有19个变异位点、12SrRNA基因片段问包含11个变异位点和2个插入/缺失位点。针毛鼠的2个种群间的细胞色素b和12SrRNA基因片段分别包含了3个和11个变异位点。通过邻接法和最大简约法重建的系统进化关系表明:雷琼社鼠与社鼠有着紧密的亲缘关系,它的亚种地位得到了线粒体DNA序列证据的肯定。针毛鼠龙门种群和香港种群细胞色素b和12SrRNA基因片段序列的歧异反映出两个种群由于长期的地理隔离及其所经历自然选择的结果。

两种荧光定量法检测HCV RNA结果的比较

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,分析其定量检测HCV RNA的灵敏度和特异性以及HCV RNA含量与患者病情的相关性。方法选取100例抗HCV抗体阳性患者,包括慢性肝炎患者45例、肝硬化患者30例、肝癌患者25例的样本,用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行HCV RNA检测,另观察近期196例抗HCV抗体阳性和48例抗HCV抗体阴性样本荧光定量PCR HCV RNA含量与肝功能的相关关系。结果荧光定量双探针法阳性率为93%(93/100);两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为84%(84/100)和79%(79/100),经卡方检验差异有统计学意义(P<0.05)。196例中抗HCV与HCV RNA阳性一致率为57.1%(116/196),其中伴肝功能改变49.0%(96/196)。HCV RNA含量与AST和ALT异常程度无显著相关性(P>0.05),相关系数分别为0.4293及0.3899。HCV RNA高拷贝数患者肝功能异常率为85.2%(69/81),低拷贝数者肝功能异常率为40.9%(47/115),经卡方检验,χ2=38.63,差异有统计学意义(P<0.001)。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性,HCV RNA含量与患者肝功能损伤程度无明显相关性。

HBV-DNA与HBV PreS1 Ag、HBeAg应用价值的探讨

目的探讨HBV-DNA、HBV PreS1 Ag和HBeAg3指标在提示乙型肝炎病毒复制、病情转归以及疗效观察等方面的作用。方法采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA,以<5.0×102拷贝/mL为阴性。采用ELISA法检测"乙肝两对半"和HBV PreS1 Ag。结果151例乙肝病人中有58例HBeAg阳性标本,HBV-DNA与HBeAg、HBV PreS1 Ag阳性符合率分别为96.6%、87.9%。71例接受抗病毒治疗和80例未接受抗病毒治疗病人HBV-DNA与HBV PreS1 Ag阳性一致率分别为84.5%和46.6%,差异有统计学意义(χ2=20.944,P<0.01)。结论HBeAg阳性仍是现阶段乙型肝炎病毒复制监测的理想指标,HBV PreS1 Ag可作为HBV感染及既往或现症病毒复制的支持性指标,但不适于作为抗病毒治疗监测指标。

虎杖水提液对非酒精性脂肪肝大鼠的干预效果

目的分析虎杖水提液对非酒精性脂肪肝大鼠进行干预的效果。方法以高脂饲料饲养Wistar大鼠12周,诱发NAFLD,然后转以基础饲料饲养4周,并对NAFLD大鼠进行虎杖水提液干预与对照实验。通过生化检测方法分析各组大鼠血清和肝组织甘油三酯、总胆固醇和葡萄糖水平的变化。结果干预组大鼠的肝组织和血清的甘油三酯、总胆固醇和葡萄糖含量均低于对照组,其中肝、血总胆固醇和血清甘油三酯含量的差异显著(P<0.05)。结论虎杖水提液能够调整和改善NAFLD大鼠的脂肪和糖代谢,降低肝组织和血清甘油三酯、总胆固醇和葡萄糖水平。

脐血体外同时扩增造血干祖细胞、T细胞及树突状细胞

目的:探索体外同时扩增脐血中造血干祖细胞、T细胞及树突状细胞的可能性和最佳细胞因子组合方案。方法:采集健康正常足月产新生儿脐血,分离出单个核细胞,在不同的细胞因子组合作用下培养14天。培养于0、3、7和14天时收集细胞,用FCM分析扩增前后脐血CD34+、CD3+T及DCs细胞含量。结果:3组不同细胞因子组合实验组A:SCF+IL3,6;B:SCF+IL3,6,4;C:SCF+IL3,6,4(5×)均能显著扩增脐血中的单个核细胞和CD34+细胞,各组的CD34+细胞最高值出现在第7天,CD34+细胞平均增加倍数10～20倍不等。在扩增初期,各组CD3+T有所下降,7天时CD3+T细胞有不同程度的增加,14天时扩增最高的组别中CD3+T细胞是新鲜脐血的2倍。DCs标志CD1a、CD80、CD83和CD86,在所有组别中培养3天时有所下降,第7天时在含IL4的组别中有显著上升,且CD1a和CD80表达高于CD83和CD86;14天时则有所回落。IL4对CD34+和CD3+T细胞扩增有一定促进作用。结论:脐血中T细胞、DC细胞在一定细胞因子组合下,可与CD34+细胞同时在体外被扩增和诱导分化。

bmi-1shRNA逆转录病毒表达载体的构建及稳定转染LoVo细胞系的建立

目的构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体,建立稳定转染的LoVo细胞系,探讨稳定转染bmi-1shRNA对大肠癌细胞LoVo靶基因表达的影响,为下一步应用RNAi技术治疗打下基础。方法设计合成靶向bmi-1基因编码短发夹RNA的两条寡核苷酸序列,另设计无义对照序列,构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-C,载体经脂质体2000介导转染LoVo细胞,通过嘌呤霉素筛选,建立稳定转染的LoVo细胞系,显微镜观察、MTT检测、荧光定量PCR、Western blot检测bmi-1表达受抑后对细胞的增殖影响。结果成功构建了针对bmi-1基因的shRNA表达载体,建立了稳定转染的LoVo细胞系,bmi-1shRNA对LoVo细胞bmi-1mRNA表达抑制率为80%、bmi-1蛋白抑制率为82%,P<0.05。结论针对bmi-1基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,bmi-1mRNA与蛋白表达受抑制,但对细胞形态学无明显影响。

胞膜和胞浆分化抗原联合检测在儿童白血病免疫分型中的意义

目的 探讨胞膜和胞浆分化抗原联合检测在儿童白血病免疫分型检测中的意义。方法 采用流式细胞术，运用三色和四色荧光标记技术，检测44例儿童初诊急性白血病病例。结果 44例急性白血病病例中，采用胞膜抗体即可确诊急性B淋巴细胞白血病20例，急性T淋巴细胞白血病1例，急性非淋巴细胞自血病10例，其余13例病例进一步进行胞浆抗原染色，最后确诊为双表型白血病病例7例（1例为T／髓双表型，6例为B／髓双表型），6例为伴有髓系标记的急性B淋巴细胞白血病。结论 对于跨系表达的急性白血病病例以及形态学难以区分是淋系还是髓系的急性白血病病例，流式免疫分型的胞浆抗原检测起着关键作用，对临床诊疗意义重大。

多发性骨髓瘤CD38及CD56表达的研究

目的研究CD38及CD56在多发性骨髓瘤(Multiplemyeloma,MM)细胞上的表达。方法采用三色免疫荧光直接标记法及多参数流式细胞术分析13例多发性骨髓瘤的免疫表型。结果13例MM标本的CD38均为强阳性;70%(9/13)骨髓瘤标本CD56和CD38双阳性。结论CD38及CD56有助于对MM的诊断,并且为MM亚型的分类提供重要的依据。

盘龙七片对膝骨性关节炎患者疗效与外周血Th17细胞及相关细胞因子的关系

目的探讨膝骨性关节炎患者不同中医证型患者外周血Th17细胞和相关的细胞因子(IL-17、IL-1β和IL-6)的水平与盘龙七片疗效的关系。方法选取淤血阻滞、阳虚寒凝、肾虚髓空三种中医证型患者各25、24和26例,正常对照组24例,患者采用盘龙七片治疗,每日3次,每次3片,治疗前和治疗6周后,留取正常对照组和患者外周血,采用流式细胞术和ELIS法检测Th17细胞和血清细胞因子IL-17、IL-1β和IL-6浓度,并进行疗效评估。结果肾虚髓空、阳虚寒凝、瘀血阻滞三种中医证型患者Th17细胞比例和细胞因子浓度均高于正常对照组,且呈现逐渐增高的趋势,差异有统计学意义(P<0.05);三种中医证型有效治疗者,Th17细胞比例和细胞因子浓度显著降低,差异有统计学有统计学意义(P<0.05);三种中医证型患者疗效呈现增高的趋势,肾虚髓空型高于另外两种证型,差异有统计学意义(P<0.05)。结论膝骨性关节炎患者外周血Th17细胞比例和细胞因子IL-17、IL-1和IL-6浓度与盘龙七片的疗效有关,可作为中医证型和预后的参考指标。

兔VX2肝癌介入治疗后早期发生凋亡的流式细胞术检测

目的研究经肝动脉插管灌注碘油抗癌药乳液化疗栓塞和单纯灌注化疗后的早期兔肝VX2肿瘤发生凋亡。方法27只新西兰大白兔瘤组织块种植肝VX2肿瘤,A组(n=9)经肝动脉灌注碘油抗癌药乳液,B组(n=9)肝动脉灌注化疗,C组(n=9)肝动脉灌注生理盐水,每组分别在处理后第24h、72h、120h处死实验兔各3只,采用FITC-AnnexinV/PI流式细胞术分析介入处理后早期的肿瘤细胞凋亡。结果肿瘤边缘部的凋亡早期细胞百分率(PapE)与凋亡晚期细胞百分率(PapL)及峰值时间点分别为:A组(9.48±4.58)%、(33.46±8.81)%、24h、72h,B组(4.46±1.47)%、(11.65±3.51)%、24h、24h,C组(2.50±1.39)%、(5.99±1.22)%。肿瘤中心部的PapE、PapL与峰值时间点分别为:A组(16.48±6.32)%、(43.56±18.51)%、24h、72h,B组(7.50±3.10)%、(18.53±14.04)%、24h、24h,C组(5.61±1.92)%、(14.63±12.23)%。结论Lp-THACE诱导肝癌肿瘤细胞早期大量凋亡是其有效的主要作用机制,其诱导凋亡作用明显大于THAI。

虎杖提取液干预对NAFLD大鼠脂肪组织相关基因表达的影响

目的在基因表达水平上分析虎杖提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型的干预效果及其作用机制。方法以高脂饲料饲养Wistar大鼠诱发NAFLD,然后转以基础饲料饲养,并对NAFLD大鼠进行虎杖提取液干预与对照实验。通过RT-qPCR方法检测干预组和对照组大鼠脂肪组织瘦素、脂联素、肿瘤坏死因子α、抵抗素和解偶联蛋白2的mRNA相对水平,以t检验分析两组间数据的差异。结果干预组大鼠脂肪组织瘦素mRNA和脂联素mRNA相对水平比对照组有所下降(P>0.05;P>0.05)。干预组大鼠脂肪组织的肿瘤坏死因子αmRNA相对水平比对照组显著下降(P<0.05)。所有对照组样品均可检测到解偶联蛋白2mRNA,而只有个别干预组样品可检测到较低水平的解偶联蛋白2mRNA。干预组和对照组样品均未检测到抵抗素mRNA。结论虎杖是TNF-α的抑制药物,可有效改善肝组织的脂肪变性和炎症的状况。

脐血体外同时扩增T、NK及干祖细胞移植治疗BALB/c小鼠白血病

目的:观察体外同时扩增T、NK及干祖细胞脐血用于移植治疗BALB/c小鼠白血病效果。方法:在不同的细胞因子组合作用下定向扩增脐血干祖细胞及T、NK免疫细胞。扩增7天后,5×106个/只脐血细胞经尾静脉接种X射线照射的白血病小鼠,观察各组小鼠存活时间及检查存活证据及微小残留白血病细胞。结果:1.细胞因子SCF,IL-3,IL-6,IL-7,IL-2组合能显著扩增脐血中的CD34+、CD3+T、NK细胞。2.尾静脉接种2×106个/只K562产生可移植性白血病BALB/c裸鼠。3.BALB/c白血病小鼠移植6周后,实验组共存活鼠12只。而未移植者在60天内死于肿瘤。4.流式细胞分析移植30天后小鼠外周血中人CD3+细胞从最低新鲜脐血移植组(0.48±0.40)%,最高SCF+IL-3,6,7组中为(3.01±1.25)%。RT-PCR检测发现,在12只扩增后移植存活6周小鼠中,检测不到bcr/abl基因。在3只新鲜脐血移植存活6周的小鼠中,1只呈现阳性,说明移植取得了造血与免疫重建。所有脐血移植小鼠均未出现明显临床GVHD症状。结论:这种扩增后含一定水平T、NK免疫细胞的脐血能重建可移植性BALB/c白血病小鼠的造血和免疫。

PRC1高表达与前列腺癌生化复发的相关性研究

目的研究细胞质分裂调控蛋白1(PRC1)在前列腺癌中的表达情况及其与生化复发的相关性。方法采用实时定量PCR及蛋白免疫印迹法检测PRC1在前列腺癌与癌旁前列腺组织的表达水平,并利用Taylor基因芯片数据库对PRC1基因mRNA水平进行验证。Kaplan-Meier法分析前列腺癌患者总体生存率及生化复发时间与PRC1 mRNA表达水平之间的关系。Cox回归分析临床病理特征与生化复发的相关性。结果 12对前列腺癌及癌旁前列腺组织中,前列腺癌的PRC1 mRNA及蛋白表达均高于癌旁前列腺组织(P均<0.01)。Taylor基因芯片数据库分析显示,PRC1在前列腺癌组织中的表达水平高于非癌组织(P<0.001),且出现生化复发或转移、Gleason评分高、临床分期≥T3A期者的PRC1 mRNA表达水平高于无出现生化复化或转移、Gleason评分低、临床分期<T3A期者(P均<0.05);Kaplan-Meier分析显示,PRC1高表达组的无生化复发率明显低于PRC1低表达组(P=0.008);Cox回归分析显示,PRC1(P=0.001)、Gleason评分(P<0.001)、术前PSA水平(P=0.021)及病理分期(P=0.021)是前列腺癌生化复发的影响因素。结论 PRC1在前列腺癌中的高表达与生化复发呈正相关,PRC1表达水平有助于判断前列腺癌患者的预后。

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

目的研究micro RNA-126(mi R-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达mi R-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证mi R-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果与对照组相比,转染mi R-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达mi R-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,mi R-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论过表达mi R-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。

流式细胞术检测原发性血小板减少性紫癜患者外周血血小板相关抗体

目的建立快速测定血小板相关抗体(PAIgG、PAIgM)的方法,以期监测原发性血小板减少性紫癜(ITP)患者的诊断、治疗。方法流式细胞术分析ITP患者及正常人外周血血小板表面IgGI、gM的表达情况。结果ITP患者PAIgG、PAIgM表达率分别为(28.51±11.22)%、(14.47±6.89)%,而正常人外周血PAIgG、PAIgM表达量分别为(5.41±1.96)%(、3.15±0.97)%;两者差异有统计学意义。结论流式细胞术检测ITP患者的外周血血小板表面血小板相关抗体,是目前监测ITP患者辅助诊疗的一个较快速、敏感的方法。

B细胞刺激因子在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞上的表达及意义

目的探讨B细胞刺激因子(Blys)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞上的表达情况及临床意义。方法应用流式细胞仪技术,检测50例SLE患者(其中活动期和稳定期各25例)外周血单个核细胞上Blys的表达,与25例健康献血人员作比较。并分析SLE患者外周血单个核细胞上Blys的表达与病情活动、其他实验指标及自身抗体的关系。结果SLE患者外周血单个核细胞上表达Blys的百分率上调(P<0.001),活动期和稳定期SLE患者Blys的表达率均高于健康对照组(P<0.001和P<0.05);其中,活动期和稳定期SLE患者比较,活动期患者Blys的表达更高(P<0.05)。SLE患者外周血单个核细胞上Blys的表达水平与SLEDAI评分呈正相关(r=0.702,P<0.001),与免疫球蛋白IgG、IgM呈正相关(r=0.695,P<0.001和r=0.356,P<0.01),与补体C3、C4呈负相关(r=-0.42,P<0.001和r=-0.31,P<0.05)。dsDNA抗体(+)组患者外周血单个核细胞上Blys的表达较dsDNA抗体(-)组高(P<0.05)。C1q抗体(+)组患者外周血单个核细胞上Blys的表达也较C1q抗体(-)组高(P<0.05)。结论Blys在SLE外周血单个核细胞上的表达率升高。Blys的表达在一定程度上反映了病情的活动,并与自身抗体的产生相关。

慢性非细菌性前列腺炎大鼠中药灌肠治疗的作用机制

目的揭示中药灌肠治疗慢性非细菌性前列腺炎的作用机制。方法将9周龄60只Wistar大鼠分成三组,每组20只,分别给予中药保留灌肠治疗(Ⅰ组)、生理盐水保留灌肠(Ⅱ组)及不给予灌肠治疗(Ⅲ组),采用免疫组化检测治疗后慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织匀浆白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达变化。结果与Ⅱ、Ⅲ组比较,Ⅰ组前列腺组织的病理形态学改善明显;IL-1β、TNF-α及ICAM-1明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中药灌肠治疗后,可以降低慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织IL-1β、TNF-α及ICAM-1水平,促进慢性非细菌性前列腺炎的前列腺组织的炎症吸收,从而促使其康复。

PCR生物微流体芯片中的表面钝化技术

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种重要的体外DNA扩增技术,在生物化学、分析化学以及分子生物学等领域中得到广泛的应用.基于微电子机械系统(Microelectromechanical system,MEMS)技术构建而成的PCR生物微流体芯片由于具有反应速度快、样品消耗少以及所占空间体积少等优点而倍受人们亲睐.然而,伴随之较大比表面积以及其所用的裸露衬底材料常常抑制PCR反应,从而导致PCR不能顺利进行.本文结合本试验室的研究工作,综述了PCR生物微流体芯片中为了获得"友善"的PCR扩增体系而采取的表面钝化技术,主要包括表面钝化的必要性、静力学/动力学表面钝化技术以及硅相关材料对PCR抑制的机制等等.

白细胞介素-4调控糖代谢相关基因LDH-A诱导前列腺癌细胞PC3的增殖

目的:研究白细胞介素-4(IL-4)对前列腺癌细胞糖代谢和细胞增殖的影响。方法:IL-4处理前列腺癌细胞PC3,利用RT-q PCR、Western Blot、细胞增殖实验(CCK-8)以及乳酸测定实验,观察IL-4对乳酸脱氢酶A(LDH-A)的变化和细胞增殖的影响。结果:经过IL-4处理的前列腺癌细胞PC3,LDH-A的m RNA表达量(P<0.05)、蛋白表达量(P<0.05)明显升高,并促进PC3细胞的增殖(P<0.01)和乳酸产生(P<0.01)。结论:IL-4影响前列腺癌细胞的糖代谢,上调糖代谢相关基因LDH-A的表达,从而促进前列腺癌细胞的增殖。