基因探针和PCR方法在菌痢流行病学研究中的应用

目的 探讨基因探针和PCR方法在F2a志贺氏菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法 对 4 3株自患者粪便和食物中分离到的F2a志贺氏菌进行 16srRNA、ipaH基因Southern杂交 ,随机PCR和set1/set2毒力基因PCR分析。 结果 随机PCR、ipaH基因Southern杂交将 4 3株F2a志贺氏菌分为两个不同的基因型 ,set1/set2毒力基因PCR分为三个不同的基因型 ,16srRNA基因Southern杂交均为同一基因型。结论 基因分型方法能更准确、深入地揭示菌痢暴发过程中各分离株之间的流行病学联系。其中set1/set2毒力基因PCR方法具有较高的分辨率 ,在F2a志贺氏菌的分子流行病学研究中具有重要的作用。

志贺菌痢暴发菌株的分子流行病学分析

目的 探讨 4种基因分型方法在一起F2a志贺菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法 对 43株从患者粪便和食物中分离菌株进行质粒图谱分析、质粒DNA酶切图谱分析、随机PCR分析、set1/set2毒力基因PCR分析。结果 随机PCR将 43株F2a志贺菌分为 2个不同的谱型 ,质粒图谱、set1/set2毒力基因PCR分为 3个不同的谱型 ,而质粒DNA酶切图谱分为 4个不同的谱型。其中基因型完全相同的菌株 3 5株 ,为引起本次菌痢暴发的流行株。7株基因型不同的菌株是本次暴发期间同时存在的散发病例。从食物中分离的菌株基因型与流行株相同 ,证明此次暴发是通过污染的食物而引起传播的。食堂炊事员粪便中虽然分离出了F2a志贺菌 ,但基因型与流行株不同 ,不是本次暴发的传染源。结论 DNA水平上的分型方法能更为准确。

菌痢暴发的分子流行病学分析

分析１９９２、１９９４年广州、江门两地菌痢暴发期间分离的８４株福氏２ａ志贺氏菌（广州暴发株３０株、散发株２８株、江门暴发株１２株、病例接触者分离株１４株）的质粒图谱及质粒ＤＮＡ限制性酶切图谱特征。结果表明：发生于不同地点、不同时间且传染来源不相同的两起菌痢暴发，由福氏２ａ志贺氏菌的同一克隆引起，该克隆可能是广东地区福氏２ａ志贺氏菌的优势克隆。江门菌痢暴发期间，自密切接触者分离的同型菌株分属３个不同的克隆，提示部分病例接触者感染的福氏２ａ志贺氏菌并非来自病例。比较表型分析（生化反应、血清学分型）与质粒分析，证实表型分析难以鉴别来源不同的同型克隆，而质粒分析提供了简便、敏感、特异鉴定不同来源同型克隆的有效手段。

稳定、无抗药的痢疾福氏2a和宋内双价菌苗候选株的构建

通过体内外基因重组,将大肠杆菌粘附因子cs3基因定位整合到痢疾杆菌福氏2a疫苗株T32菌染色体的asd基因内,使asd基因灭活;将来内O抗原基因克隆至无抗药性表达载体pXL378,获得重组质粒pXL390,将其转化asd-的T32受体菌,构建成福氏2a和宋内双价苗苗株FS01。实验表明:重组质粒pXL390在不带任何抗菌素基因的情况下,在asd-的T32受体菌内是稳定的。FS01株遗传稳定,能表达两种痢疾菌的PLS-O抗原,无明显毒性作用。动物试验表明,以FS01株皮下免疫的小鼠对福氏2a和宋内有毒株的腹腔攻击有100％的保护。

不同来源产毒性大肠杆菌的毒力型、耐药性及质粒分析

本研究对从广州郊区某乡的腹泻病人、健康人及环境（包括猪、鸡和环境）中分离到的产毒性大肠杆菌（ETEC）菌株进行了毒力型、耐药性及质粒分析。结果表明，病人ETEC株含LT或STp较多，环境株含LT较多。比较三种来源菌株对20种临床常用抗菌药物的耐药性，病人株的耐药谱最广，耐药率也最高；其次为环境株。根据耐药谱，可把大多数菌株（94％）分为6个型．不同来源ETEC株的优势耐药型有所不同，但不同毒力型ETEC株的耐药谱无明显不同。91．6％（55／60）的ETEC殊含有质粒，与正常大肠杆菌（78．6％）相近，最常见的质粒有2．2～2．6Md、3．3～4．5Md和＞20Md三种，ETEC株含＞20Md质粒显著高于正常大肠杆菌。未发现质粒谱与ETEC毒力型及耐药谱之间有明显的关系。

一起菌痢暴发的分子流行病学分析

本文对1997年在内蒙呼和浩特市一起菌痢暴发期间分离的43株福氏2a志贺氏菌进行质粒图谱和质粒DNA酶切图谱分析.结果为:43株福氏2a中出现三种不同的质粒图谱和四种不同的酶切图谱,其中41株(95.35%)质粒图谱相同,39株(90.70%)酶切图谱相同,其余各株具有各自独立的图谱特征.提示质粒图谱和酶切图谱相同的菌株是引起本次菌痢暴发的流行株,而图谱特征不同的菌株可能为本次暴发偶合的部分散发病例.质粒分析与表型分析相比较具有更特异敏感的特点,而质粒图谱与质粒DNA酶切图谱相比,后者的分辨率更高,但两种方法均存在着一定的局限性.

EHECO157∶H7基因文库中含eae基因的LEE克隆子的筛选

PCR扩增EHECO15 7∶H7eae基因的特异片段并制成杂交探针 ,采用斑点杂交和酶切方法从自构建的基因文库中筛选不含SmaⅠ的LEE片段。结果筛选到长约 2 3kb的LEE片段。表明筛选片段长度与预测不符 ,可能存在变异 。

志贺氏菌痢暴发菌株的分子流行病学分析

目的:探讨四种基因分型方法在一起F2a志贺氏菌痢暴发的流行病学研究中的意义。方法:对43株分离自患者粪便和食物的菌株分别进行质粒图谱分析、质粒DNA酶切图谱分析、随机PCR分析、setl/set2毒力基因PCR分析.结果:随机PCR将43株F2a志贺氏菌分为西个不同的谱型,质粒图谱、setl/set2毒力基因PCR分为三个不同的谱型。而质粒DNA酶切图谱分为四个不同谱型。其中基因型完全相同的菌株35株,为引起本次菌痢暴发的流行株。7株基因型不同菌株是本次暴发期间同时存在的散发病例。从食物中分离的菌株基因型与流行株相同.证明此次暴发是通过污染的食物而引起传播的。食堂炊事员粪便中虽然分离出了F2a志贺氏菌.但基因型与流行株不同。不是本次暴发的传染源。结论:DNA水平上的分型方法能更为准确、深入地揭示菌痢暴发过程中各分离株之间的流行病学联系。

基于消息的Visual Basic多媒体程序设计方法

本文详细介绍了在ＶＢ环境下使用基于消息的ＭＣＩ指令进行多媒体软件设计的方法，并给出程序实例。

浅谈现场实践教学的准备工作

现场实践教学工作大致可以分为4个阶段,也就是计划阶段、准备阶段、实施阶段、总结阶段。其中准备阶段的意义显得尤其重要。兵家最讲究“不打无准备之战”,在现场实践教学中,如果准备工作做得比较周全、完美,就能为现场实践教学工作的圆满成功创造条件、打好基础;如果准备工作做得不扎实、有欠缺,就会为现场实践教学工作的圆满成功埋下隐患。因此,本次现场实践教学开始实施之前,我们做了大量的前期准备工作,为保证本次现场实践教学活动的顺利展开打下了坚实的基础。现将我们认为现场实践教学活动前应进行的“五个准备”总结如下。

用多基因PCR检测和区分不同群型霍乱病原菌

目的 建立一种快速、敏感的诊断方法 ,用于检测和区分霍乱弧菌O1群古典型 (CVC)、埃尔托型 (EVC)、O139群和非O1非O139群。方法 分别针对霍乱弧菌肠毒素A亚单位 (ctxA)基因、O139群特异基因、霍乱弧菌溶血素A亚单位 (hlyA)基因和毒力协同调节菌毛A亚单位 (tcpA)基因设计引物 ,建立多基因PCR方法。PCR产物经电泳 ,根据扩增条带的大小和数目 ,可检测和区分CVC、EVC、O139群和非O1非O139群。针对ctxA和O139群特异基因分别设计一对内引物 ,建立套式PCR。结果 对分离于患者的 6 0株EVC ,2株CVC ,15株O139群和 30株非O1非O139群进行检测 ,扩增结果与设计均一致。多基因PCR敏感性可达到 10 0cfu ,套式PCR可达到 10cfu。对分离于环境标本的 10株EVC和 15株O139群检测表明 ,前者均为产毒株 ,后者均为非产毒株。结论 该方法快速、特异、敏感 ,具有较大的应用价值。

多基因单链构象多态性技术在大肠癌多基因突变联合测定中的应用

多基因单链构象多态性（ＭＳＳＣＰ）是一种与多基因聚合酶链反应（ＰＣＲ）联合应用，一次性快速测定多基因突变的方法［１］。本研究建立了测定ＡＰＣ基因突变聚集区域（ＭＣＲ）和Ｋｒａｓ第１２／１３密码子突变的ＭＳＳＣＰ技术。一、材料与方法１样本收集：收集...

AP-PCR和set1、set2两基因PCR用于志贺氏菌基因多态性研究

本文应用随机引物PCR(简称AP-PCR或PAPD)和set1、set2两基因PCR方法分析了71株F2a志贺氏菌的基因多态性.结果为:两种引物的AP-PCR中,引物12将71株F2a志贺氏菌分为2种不同的基因型,引物17和set1、set2两基因PCR将所有菌株分为4种不同的基因型,两种方法结合则可分为7种不同的基因型;其中65株F2a志贺氏菌基因型相同,其余6株各为独立的型别.本研究表明APPCR和set1、set2两基因PCR为志贺氏菌基因多态性分析的有效手段,两者结合则更为完善;研究结果还表明在我国南北不同地区不同时间分离到的无论是暴发株还是散发株均具有相同的优势克隆,说明其为引起国内菌痢散发和暴发的主要基因型,是流行病学研究和防治的重点.