浅谈胚胎学教学体会

胚胎学是重要的医学基础课程之一,学好胚胎学对医学生学习后期专业课程,具有重要意义。可是,中医学院的胚胎学和组织学教材合编为一本,根据教学大纲规定,教学时数共为56学时,而胚胎学仅为6学时。

肝细胞癌中OY-TES-1基因mRNA的表达

目的检测OY-TES-1基因mRNA在肝细胞癌(HCC)中的表达水平。方法建立实时定量PCR方法 ,检测56例HCC及37例配对癌旁组织中目的基因OY-TES-1及看家基因HPRT的表达,OY-TES-1 mRNA的表达量以OY-TES-1/HPRT表示,应用SPSS13.0统计分析软件进行数据分析。结果 (1)经实时定量PCR检测,HCC中OY-TES-1 mRNA阳性率为73.21%(41/56),癌旁组织阳性率为64.86%(24/37),有17对HCC及配对癌旁组织均表达阳性,OY-TES-1 mRNA在HCC及癌旁组织中的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);(2)HCC中OY-TES-1 mRNA水平明显高于对应的癌旁组织(P<0.05),但与HCC患者的年龄、性别等临床资料无关。结论 OY-TES-1 mRNA在HCC中有较高的表达频率,其表达水平高于对应的癌旁组织,它有望作为用于HCC辅助诊断及免疫治疗的肿瘤抗原。OY-TES-1蛋白在HCC及癌旁组织中的表达及相关意义尚值得做进一步的研究。

海洛因成瘾致大鼠脑损伤机制的探讨

目的:从形态学上研究海洛因成瘾致大鼠脑损伤的机制。方法:采用递增法人为建立海洛因成瘾动物模型,设对照组和模型组,取2组大白鼠前额皮质、海马、下丘脑等部位脑组织做电镜观察。结果:海洛因成瘾大白鼠脑内多部位神经元胞体、轴突、树突都出现变性、胀亡、凋亡等超微病理结构改变;星形胶质细胞增生肥大,亦可见退变星形胶质细胞;广泛性出现血脑屏障(BBB)通透性增加的超微结构变化,BBB周围星形胶质细胞水肿。对照组电镜超微结构影像正常。结论:海洛因成瘾可通过直接损害神经元、星形胶质细胞以及BBB的通透性改变等方面损伤脑组织。

癌睾丸抗原OY-TES-1在脑胶质瘤中的表达及其抗体血清学分析

背景与目的:胶质瘤是最常见的原发性恶性脑肿瘤,预后差,生存率低。近年来,以利用癌睾丸(cancer-testis,CT)抗原作为靶抗原行肿瘤免疫治疗已成为研究的热点,而OY-TES-1是CT抗原家族中的一员。本研究拟了解OY-TES-1在脑胶质瘤中的mRNA表达及其抗体出现情况,探讨将OY-TES-1应用于肿瘤免疫治疗及辅助诊断的可能性。方法:收集51例脑胶质瘤患者肿瘤组织标本及配套血清,107例健康人血清。通过RT-PCR,从mRNA水平研究OY-TES-1在脑胶质瘤组织中的表达;用酶联免疫吸附分析技术(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测患者及健康人血清OY-TES-1抗体;同时对OY-TES-1 mRNA的表达及血清抗体出现的临床意义做初步分析。结果:在脑胶质瘤患者中OY-TES-1 mRNA阳性率为80.4%(41/51),血清OY-TES-1抗体阳性率为15.7%(8/51),健康人血清则为阴性。OY-TES-1 mRNA的表达和血清抗体的出现均与脑胶质瘤患者的年龄、性别、病理分级、肿瘤大小等临床指标无关。结论:OY-TES-1在脑胶质瘤中存在较高的表达,并能引起部分患者的体液免疫反应,有望作为胶质瘤免疫治疗的靶抗原。

碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素致肾小管上皮损伤的拮抗效应

背景:体内实验证实成纤维细胞生长因子能有效保护庆大霉素致肾小管上皮细胞的损伤,但对体外培养细胞的作用如何不多见。目的:在建立庆大霉素肾毒性体外细胞模型的基础上,观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素肾毒性的保护作用。方法:采用酶加网筛方法分离纯化昆明小鼠肾小管上皮细胞,调整细胞浓度为1×108L-1,将细胞悬液移入96孔细胞培养板,分组培养:空白对照组:正常培养;庆大霉素组:10,30,50μL/孔(即400,1200,2000U/孔)记为G1、G2、G3;碱性成纤维细胞生长因子组:20,50,80μL/孔(即90,225,360ng/孔)记为B1、B2、B3;庆大霉素加碱性成纤维细胞生长因子干预组:先加碱性成纤维细胞生长因子12h后,再加庆大霉素12h培养,分9个剂量组,即G1B1、G1B2、G1B3、G2B1、G2B2、G2B3、G3B1、G3B2、G3B3,每组4复孔。观察细胞形态及数量变化。结果与结论:庆大霉素对肾小管上皮细胞的损伤呈剂量依赖性,中、高浓度组的上皮细胞皱缩,变圆,肿胀,贴壁差,内部胞质破坏严重,结构紊乱,低浓度组细胞数量改变不明显,并且开始有成纤维细胞出现;碱性成纤维细胞生长因子各组细胞饱满、折光性强,数量明显增多,50μL/孔浓度以上效果显著,与80μL/孔差异无显著性意义;庆大霉素加碱性成纤维细胞生长因子干预组中低浓度庆大霉素组细胞未见明显损害,细胞数量反而增多,中浓度庆大霉素组损害的细胞崩解减少、细胞皱缩和贴壁差的程度有所减轻,高浓度碱性成纤维细胞生长因子干预后细胞形态良好,但高浓度庆大霉素所致细胞肿胀、坏死损伤任何浓度的碱性成纤维细胞生长因子干预都无法改善。50μL/孔碱性成纤维细胞生长因子对中、低浓度庆大霉素所致肾毒性有拮抗作用,对高浓度庆大霉素所致肾毒性无保护作用。

肝癌细胞株中肿瘤特异性抗原GAGE基因mRNA的表达

目的:研究肿瘤特异性抗原GAGE基因mRNA在BEL-7404肝癌细胞株中的表达情况,评价其作为分子肿瘤标记以及肿瘤免疫治疗特异性靶位的可能性。方法:运用RT-PCR技术检测国内建株的肝癌细胞株BEL-7404中GAGE基因mRNA的表达,并与正常肝组织比较。结果:肝癌细胞株BEL-7404中GAGE基因呈阳性表达,正常肝组织中GAGE基因表达阴性。结论:GAGE基因可作为肝癌诊断的分子标记,并具有作为肝癌免疫治疗特异性靶位的潜在价值。

海洛因成瘾大鼠模型的方法建立

目的模仿人类吸毒成瘾的大量临床实例,建立海洛因成瘾大白鼠模型。方法采用递增法人为地给大白鼠皮下注射海洛因造成动物成瘾,动物设对照组和模型组。用纳洛酮促戒断,戒断症状按Maldonado评分法给予评分。结果模型组海洛因成瘾大鼠出现明显的依赖戒断症状,戒断评分值明显高于空白对照组(P<0.01)。结论用递增法皮下注射海洛因建立的海洛因成瘾大鼠模型,可在28天内形成海洛因依赖模型,该模型稳定可靠。

表皮生长因子与难免流产的关系探讨

[目的]探讨表皮生长因子(EGF)与难免流产之间的关系。[方法]随机选择和收集47例难免流产清宫术后刮出的绒毛组织和65例人工流产刮出的绒毛组织,采用免疫组织化学技术(SP法),观察表皮生长因子(EGF)在人工流产和难免流产刮出胎盘绒毛组织的定位表达和表达程度。[结果]人工流产组的表皮生长因子(EGF)的阳性表达率(98.46%)高于难免流产组的表皮生长因子(EGF)的阳性表达率(85.11%)。[结论]EGF缺乏可能影响胚胎的发育或者使胚胎停止发育,导致不可避免的流产。绒毛组织中EGF水平下降可能是难免流产发生的一个原因。

358例胎儿上、下肢长和手、足长的测量

不同胎龄人胎外形测量的统计资料,国内记载不完全相同,南宁地区资料更少。为了解不同发育时期人胎儿的生长发育规律,尤其为少数民族地区的胚胎发育积累资料,我们收集358例正常胎儿进行了测量观察。

癌-睾丸抗原OY-TES-1多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备癌-睾丸抗原OY-TES-1多克隆抗体,并进行鉴定。方法以大肠杆菌表达的MBP/OY-TES-1融合蛋白作为抗原,免疫新西兰白兔,制备抗血清。经蛋白A凝胶纯化后,采用ELISA法检测抗血清的效价,Western blot和免疫组化法检测多克隆抗体的特异性。结果制备的抗血清经ELISA检测,效价不低于1∶128000,纯化后,其效价不低于1∶8000。Western blot显示,抗OY-TES-1多抗可与MBP/OY-TES-1融合蛋白、MBP、OY-TES-1重组蛋白和睾丸组织总蛋白特异性结合;免疫组化检测显示,精子头部呈现阳性反应。结论已成功制备了效价高、特异性强的癌-睾丸抗原OY-TES-1多克隆抗体,为深入研究OY-TES-1的生物学功能提供了工具。

精子蛋白32(sp32)/OY-TES-1在生精细胞中的分布及其抗体的血清学检测

目的:了解精子蛋白(sperm protein32,sp32)/OY-TES-1蛋白在生精细胞中的分布及抗sp32/OY-TES-1抗体在不育症患者血清中的出现情况。方法:用重组表达的OY-TES-1麦芽糖融合蛋白免疫新西兰白兔,制备sp32/OY-TES-1多克隆抗体,且经纯化鉴定后用于检测人精子和大鼠正常睾丸组织;用ELISA试验,检测不育症患者和正常人血清中抗sp32/OY-TES-1抗体。结果:①免疫后的兔血清含高效价的sp32/OY-TES-1多克隆抗体,并可与OY-TES-1麦芽糖融合蛋白特异性地结合;②免疫组化染色显示人精子头部、大鼠精子和精子细胞中呈免疫反应阳性。③ELISA检测结果显示76例正常人血清中无抗sp32/OY-TES-1抗体,而不育症患者血清其抗体的阳性率高达70.77%(46/65),并有较高的抗体水平。结论:本实验制备的sp32/OY-TES-1多克隆抗体可用于大鼠睾丸生殖细胞的检测,为后续用大鼠进行sp32/OY-TES-1的相关研究奠定了基础。sp32/OY-TES-1特异性地表达于精子细胞和精子,其抗体的出现意义与不育症的关系有待进一步研究。

妊娠期高血压疾病患者尿瘦素水平的测定与分析

目的探讨妊娠高血压疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy,HDCP)患者尿瘦素(urinary leptin)水平变化及其与妊娠高血压疾病的临床关系。方法选择2005年5月至2007年12月在广西中医学院第一附属医院住院的自愿参加本研究的90例孕妇为研究对象,将其按有无妊娠高血压疾病分为HDCP组(n=40)和对照组(n=50)。再将HDCP组分为,妊娠期高血压组(n=11),轻度子痫前期组(n=16),重度子痫前期组(n=13)(本研究遵循的程序符合广西中医学院第一附属医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组取得受试对象的知情同意,并与其签署临床研究知情同意书)。采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法分别测定两组孕妇尿瘦素水平,并行相关分析。结果HDCP组孕妇尿瘦素水平[(0.93±0.46)ng/mL]较对照组[(0.62±0.39)ng/mL]高,两组比较,差异有显著意义(P<0.05)。HDCP组中,妊娠高血压组、轻度子痫前期组患者尿瘦素水平分别与对照组比较[(0.76±0.36)ng/mL与(0.81±0.45)ng/mL vs.(0.62±0.39)ng/mL],差异无显著意义(P>0.05),但均明显低于重度子痫前期组[(1.21±0.52)ng/mL]。尿瘦素水平与妊娠高血压疾病患者的尿蛋白量相关,而与患者体重指数(body mass index,BMI)、收缩压与舒张压等临床参数无关。结论妊娠期尿瘦素水平增高,可能与妊娠高血压疾病对肾功能影响有关。尿瘦素水平的测定,对判断妊娠高血压疾病的严重程度具一定临床价值。