余甘子叶总黄酮对H22荷瘤小鼠免疫功能调节的影响

目的:探讨余甘子叶总黄酮对H22荷瘤小鼠免疫调节的影响与肿瘤微环境的变化及其相互关系。方法:昆明小鼠50只腋下H22细胞荷瘤造模后,根据瘤体大小采用随机区组法分为对照(Control)组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组,余甘子叶总黄酮低(YGZY-L:0.496 g·kg^(–1))、中(YGZY-M:0.991 g·kg^(–1))、高(YGZY-H:1.982 g·kg^(–1))剂量组,连续给药14 d。观察瘤质量及抑瘤率;ELISA法检测肿瘤组织中IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α含量水平;HE染色观察瘤组织形态;免疫组化法检测瘤组织CD4+T、CD8+T细胞比例;制备瘤组织单细胞悬浮液,分离淋巴细胞,并用流式细胞术观察肿瘤组织中浸润的淋巴细胞比例;Western blot观察NF-κB1、FLT3、PD-1、BTLA、CTLA-4表达情况。结果:抑瘤率为5-FU组62.2%,YGZY-L组13.3%,YGZY-M组40.7%,YGZY-H组53.5%;HE染色显示余甘子叶总黄酮使实体瘤细胞坏死、核固缩;免疫组化显示余甘子叶总黄酮和5-FU可以激活肿瘤微环境CD4+T细胞和CD8+T细胞数量(P<0.01);ELISA检测显示余甘子叶总黄酮显著上调肿瘤微环境中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α,下调IL-10(P<0.01);瘤组织浸润淋巴细胞流式分析发现,与Control组相比,余甘子叶总黄酮降低CD4+CD25+Foxp3+Treg、CD4+PD-1+TIL、CD8+PD-1+TIL比例,升高CD8+CD28+CTL比例(P<0.05或P<0.01);Western blot分析显示,与Control组相比,余甘子叶总黄酮显著降低肿瘤微环境中NF-κB1、FLT3表达量(P<0.01),及PD-1、CTLA-4、BTLA表达量(P<0.05或P<0.01)。结论:余甘子叶总黄酮可以通过改善肿瘤免疫微环境,调节荷瘤小鼠免疫功能来抵抗肝癌肿瘤。