海洋黏细菌防治甘蔗梢腐病的筛选评价

【目的】明确来源于广西北部湾的海洋黏细菌对甘蔗梢腐病病原真菌的生物防治潜力,为研发有效防治甘蔗梢腐病的生物农药提供科学依据和物质基础。【方法】以来源于广西北部湾不同海洋生境的12种62株黏细菌为研究对象,以2株广西蔗区甘蔗梢腐病优势病原菌甘蔗镰孢菌(Fusarium sacchari)9DF-3-2和FS-2-1为靶标,通过平板对峙培养法评价黏细菌对甘蔗镰孢菌的拮抗作用,初步筛选出潜力活性菌株;利用透析膜对峙培养法、菌丝裂解法和菌丝生长速率法等从拮抗作用方式、对病原菌菌丝生长的影响等方面评价潜力活性菌株对甘蔗镰孢菌的生物防治潜力。【结果】通过平板对峙培养法从62株黏细菌中发现47株黏细菌对2株甘蔗镰孢菌9DF-3-2和FS-2-1具有明显的抑制作用,其活性菌株率达75.8%,有18株黏细菌对2株甘蔗镰孢菌的抑菌直径大于1.000 cm,其中以叶柄黏球菌(Myxococcusstipitatus)T163和蜂窝囊菌(Melittangiumsp.)T269的抑制作用最强。黏细菌胞外发酵液对甘蔗镰孢菌菌丝裂解试验结果显示,黏细菌T163和T269的胞外发酵液对2株甘蔗镰孢菌的菌丝抑制作用最明显;透析膜平板隔离试验结果显示,黏细菌T269、T163和T071受透析膜隔离后对甘蔗镰孢菌仍具有很好的抑制作用;黏细菌发酵提取物抗菌活性测定结果显示,黏细菌T163和T269的发酵提取物对2株甘蔗镰孢菌均具有较好的抑制作用,其中浓度为100.0μg/mL的T163发酵提取物的抑菌活性最好,其对9DF-3-2和FS-2-1的抑制中浓度(EC50)分别为13.97和84.58μg/mL。【结论】来源于广西北部湾的海洋黏细菌T163和T269对甘蔗梢腐病病原菌甘蔗镰孢菌表现出较好的生物活性,具有开发成绿色生物防治剂的潜力。

涠洲岛鹿角珊瑚共附生真菌Arachniotus ruber GXIMD 02510的次级代谢产物及抑菌活性研究

研究涠洲岛来源鹿角珊瑚(Acropora austera)共附生真菌Arachniotus ruber GXIMD 02510的次级代谢产物及其抑菌活性。采用多种现代色谱分离技术对菌株发酵产物进行分离纯化,利用核磁共振技术和文献数据对比解析化合物的化学结构,并测定其抑菌活性。从粗提物中共分离鉴定了13个化合物,分别为auxarthrols B,E,F和H(1—4)、paradictyoarthrin A(5)、chrysoqueen(6)、ocauxarthrol A(7)、1,3,6-三羟基-8-甲基占吨酮(8)、N-乙酰酪胺(9)、对羟基苯乙酸甲酯(10)、间羟基苯乙酸(11)、L-tenuazonic acid(12)和2,3,22,23-tertrahydroxy-2,6,10,15,19,23-hexamethyl-tetracosa-6,10,14,18-tetraene(13)。其中化合物1、4—6和11对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)具一定抑制活性,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为0.078~0.312mg·mL^(−1)。本研究丰富了蛛网霉属(Arachniotus)真菌代谢产物结构多样性,为抗生素研发提供化学实体。

小球藻生长因子对UVA诱导人皮肤成纤维细胞紫外损伤的保护作用研究

本研究通过苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法对小球藻生长因子(Chlorella growth factor,CGF)中各营养成分进行含量测定;采用MTT法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别测定CGF对紫外损伤的人皮肤成纤维细胞(HSF)的保护作用和胶原蛋白相关因子的表达。结果表明核苷酸在CGF中占比为84.40%±0.73%。CGF预处理能显著减轻UVA对HSF细胞的增殖抑制作用,与模型组相比以50μg/mL浓度CGF处理可使HSF细胞活力提高75.05%,且在5~50μg/mL内存在一定的剂量依赖关系。ELISA实验结果发现CGF可提高HSF细胞中基质金属蛋白酶抑制酶-1(TIMP-1)、I型胶原蛋白(COL-I)的表达,降低基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的表达。CGF是优异的外源性核苷酸营养物质,能有效减轻UVA引起的HSF细胞损伤,其作用可能与促进胶原蛋白的合成有关。

药用红树木榄胚轴抗HBV化学成分的研究

红树木榄(Bruguiera gymnorhiza)胚轴为京族常用治疗乙肝中草药。为研究木榄胚轴中化学成分及其抗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)活性,该文采用MTT法和实时荧光定量PCR方法测定木榄胚轴不同萃取部位抗HBV活性,使用现代色谱和波谱方法对活性萃取部位的化学成分进行分离鉴定,并测试获得的化学成分抗HBV活性。结果表明:(1)红树木榄胚轴的正丁醇萃取部位具有抗HBV活性;(2)从中分离了11个化合物,分别鉴定为尿嘧啶(1)、胸腺嘧啶(2)、腺嘌呤核苷(3)、oryzalactam (4)、正丁基-O-D-吡喃果糖苷(5)、nortetillapyrone (6)、(4R,6S)-4-methoxyl-2,3-dihydroaquilegiolide (7)、(4R,6S)-2-dihydromenisdaurilide (8)、没食子儿茶素(9)、1-(4-hydroxy-3-methoxy)-phenyl-2-[4-(1,2,3-trihydroxypropyl)-2-methoxy]-phenoxy-1,3-propandiol (10)和(-)-南烛木树脂酚-9-O-β-D-木吡喃糖苷(11),其中化合物4、5、7和8为首次从药用红树木榄中获得,化合物4具有抗HBV活性,其抑制率为23.59%。该研究结果丰富了木榄胚轴抗HBV化学成分。

2-酰基-4-酯基取代噻唑天然骨架的绿色仿生制备

2-酰基-4-酯基取代噻唑为具有抗癌活性的Tubulysin、ITE以及除藻活性优良的结构类似物Bacillamide家族核心骨架,经典合成方案路线繁琐,条件相对苛刻,收率低。本文结合最新生源路径,仿生改进关键氧化脱氢步骤,高效率制备该类型中间体,并且初步阐明相应机理,为其工业化生产提供新颖策略。

基于线粒体Cytb基因序列的褐石斑鱼种群遗传多样性分析

为评估种质资源状况被世界自然保护联盟(International Union for Conservation of Nature, IUCN)评定为易危物种的褐石斑鱼(Epinephelus bruneus)野生种群的遗传多样性和遗传分化水平,采用PCR方法测定褐石斑鱼西太平洋海区的中国海南岛(HN)、福建厦门(XM)和韩国济州岛(HG)3个地理群体的线粒体细胞色素b(Cytb)基因的部分序列,并对其基因序列遗传变异、谱系结构和群体扩张历史特征进行分析。结果显示,褐石斑鱼3个地理种群(88个个体)共检测出18个多态位点,共有7种单倍型;各地理群体遗传多样性水平较低,而且单倍型在群体间分布不均,韩国群体遗传多样性最高,中国海南和厦门群体遗传多样性较低。地理距离最远的韩国群体和中国海南群体遗传分化最高(F_(ST)=0.177 5),地理距离最近的中国海南群体和厦门群体的遗传分化最低(F_(ST)=0.013 4)。Mantel检验结果显示,3个褐石斑鱼群体间遗传距离和地理距离间存在显著相关,距离隔离(Isolation by Distance, IBD)是褐石斑鱼群体遗传分化的主要因素。褐石斑鱼群体遗传变异主要来源于群体内,群体间存在中度遗传分化(F_(ST)=0.097 1)。褐石斑鱼Cytb基因单倍型网络图表现为简单星形结构,符合群体扩张的历史特征。Tajima′s D和Fu′s Fs中性检验结果也证实西太平洋海区褐石斑鱼群体存在扩张的历史特征。本研究结果表明,西太平洋海区的褐石斑鱼总体遗传多样性水平较低,野生种质资源极易受到渔业捕捞和气候变化的影响而衰退,在全球气候变化的背景下,急需加强其种质资源的保护工作。

表伊快霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力和生物被膜的影响

目的研究表伊快霉素(5’-epiequisetin)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)毒力因子和生物被膜的抑制作用。方法微量肉汤稀释法测定表伊快霉素对MRSA的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),绘制时间-抑菌曲线评估其持续抑菌效果;研究亚抑制浓度(sub-minimum inhibitory concentration,sub-MIC)的表伊快霉素对MRSA毒力因子溶血素、菌黄素和脂肪酶的影响。结晶紫染色法与光学显微镜观察评价表伊快霉素对MRSA生物被膜的作用;研究亚抑制浓度的表伊快霉素对MRSA运动性、胞外多糖产生的影响,通过扫描电镜观察其对MRSA细菌形态的影响。结果表伊快霉素抑制MRSA的MIC为16μg/mL。在sub-MIC浓度下,表伊快霉素可抑制MRSA毒力因子溶血酶、菌黄素、脂肪酶的产生;表伊快霉素对MRSA生物被膜形成有抑制作用,并可抑制胞外多糖的产生和MRSA的滑行运动;扫描电镜观察显示表伊快霉素可使MRSA排列疏松,菌体皱缩。结论表伊快霉素能够显著抑制MRSA毒力因子和生物被膜形成,能够减少MRSA的致病性和耐药性,可作为抗MRSA药物研究的先导化合物。

北海市经济贝类基本成分和碳氮生源要素含量测定分析

广西沿海贝类资源丰富,在海洋渔业和海洋生态系统中意义重大。为获取用于开展贝类增养殖容量评估,构建食物链网、生源要素和能量流动模型,以及开展北部湾海域海洋牧场建设和碳汇渔业评估的基础数据,本研究对北海市常见的14种经济贝类进行相关数据的测定与分析。实验对从北海市市场收集的14种经济贝类的壳长(SL)、壳宽(SW)或壳高(SH)、体质量(BM)、壳质量(SM)、软体部质量(MSP)进行测量,并同时对软体部的水分、粗蛋白、能量、碳和氮的含量及稳定同位素丰度等进行测定。实验结果表明,不同贝类的出肉率差别较大,贝壳较薄的大獭蛤(Lutraria maxima)和缢蛏(Sinonovacula constricta)等可超过70%。双壳贝类的软体部含水率均超过85%,腹足类的软体部含水率不超过81%。贝类的有机碳含量为39.77%-47.36%,氮含量为8.25%-11.80%。双壳贝类中尖紫蛤(Soletellina acuta)δ^(13)C最低,华贵栉孔扇贝(Chalamys nobilys)的δ^(13)C最高;双壳贝类中华贵栉孔扇贝的δ^(15)N最低,等边浅蛤(Macridiscus aequilatera)的δ^(15)N最高。软体部能量含量为16.11-20.81 kJ/g。双壳贝类软体部能量含量(E,kJ)与其壳长(SL,cm)的关系符合指数模型E=a×e^(b×SL),腹足类软体部能量含量(E,kJ)与其壳高(SH,cm)的关系符合指数模型E=a×e^(b×SH);软体部能量含量(E,kJ)与体质量(BM,g)的关系符合线性公式E=a×BM+b。不同种类的贝类的基本成分和生源要素的特征存在差异,与已有文献报道不同海区的同种贝类相关数据也存在较大差异。因此,在进行生态学相关研究时,数据的收集非常重要,借鉴相关物种的数据要非常谨慎。

涠洲岛珊瑚共附生真菌Alternaria sp. GXIMD 02516次级代谢产物研究

目的 研究涠洲岛珊瑚共附生真菌Alternaria sp. GXIMD 02516的次级代谢产物及其抗菌活性。方法 采用硅胶柱色谱等技术对化合物进行分离纯化,利用核磁共振、质谱等谱学技术进行结构鉴定,采用滤纸片琼脂扩散法和改良肉汤稀释法测定其抑菌活性。结果 从菌株Alternaria sp. GXIMD 02516的次级代谢产物中分离鉴定了15个化合物,分别为钩端孢菌素N(1)、leptosphaerin L(2)、clearanol D(3)、3-(1-羟乙基)-7-甲氧基苯酞(4)、porriolide(5)、tenuissimasatin(6)、(R)-3,4-二氢-4,6,8-三羟基-4,5-二甲基-3-亚甲基异铬烯-1-酮(7)、1-脱氧红布内酯(8)、djalonensone(9)、百叶酚(10)、phaeosphaeride A(11)、对羟基苯甲醛(12)、chaxine B(13)、BB(14)、去甲基林西甾醇A3(15)。化合物9~11和13~15对铜绿假单胞菌具有抑制作用,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为0.78~25μg/m L,化合物13~15还对表皮葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具抑制作用,MIC为0.78~3.13μg/m L。结论 化合物1为新化合物,4为新天然来源苯并呋喃酮类化合物,化合物11和13~15为首次从该属中分离得到,化合物9~11和13~15具有抑菌活性。

热浪岛珊瑚礁泥砂真菌多样性及真菌Cladosporium sp.GXIMD02067天然产物分离与鉴定

【背景】海洋沉积物真菌富含生物活性天然产物,但珊瑚礁泥砂真菌及其天然产物的研究较少。【目的】分离珊瑚礁泥砂真菌及其天然产物,探究珊瑚礁泥砂来源真菌多样性,为海洋真菌天然产物开发奠定基础。【方法】采用稀释涂布平板法分离马来西亚热浪岛珊瑚礁泥砂真菌并基于ITS rDNA序列分析鉴定真菌;综合运用硅胶柱、反相柱和制备HPLC色谱技术分离枝孢属真菌(Cladosporium sp.)GXIMD02067的天然产物,通过核磁共振波谱技术和文献数据比对鉴定化合物结构。【结果】19株真菌被分离,隶属1纲4目4科6属,包括7株曲霉属(Aspergillus)、6株青霉属(Penicillium)、2株枝孢属(Cladosporium)、1株蜡蚧菌属(Lecanicillium)、2株路霉属(Lulworthia)和1株Parengyodontium。GXIMD02065和GXIMD02066 ITS rDNA序列的相似度小于87%,是潜在新菌种。7个化合物从Cladosporium sp.GXIMD02067中分离并鉴定为pyrenocine A(1)、pyrenocine B(2)、胸腺嘧啶脱氧核苷(3)、1H-吲哚-3-甲醛(4)、对羟基苯甲酸(5)、对羟基苯乙酸甲酯(6)和对羟基苯甲醛(7)。化合物1对表皮葡萄球菌、粘性放线菌的MIC值为62.5μg/mL,对枯草芽孢杆菌的MIC值为125μg/mL,其他化合物在测试浓度下未显示抗菌活性。化合物1−7在测试浓度下未显示α-葡萄糖苷酶抑制活性。【结论】本研究报道了热浪岛海域珊瑚礁泥砂真菌多样性和该海域微生物的天然产物,丰富了珊瑚礁泥砂真菌的种类和天然产物的多样性,为进一步研究珊瑚礁泥砂真菌的活性天然产物奠定了基础。