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题名癌-睾丸抗原GAGE-1基因的重组、表达及纯化
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作者
赵飞兰
李立志
封毅
卓少元
钟卫干
范蓉
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机构
广西中医药大学组胚教研室
广西民族医院普外科
广西中医药大学生化教研室
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出处
《肿瘤防治研究》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第3期248-251,共4页
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基金
国家自然科学基金资助项目(81260313/H1604)
广西自然科学基金青年基金资助项目(2011GXNSFB018086)
广西教育厅立项项目资助课题(200710LX025)
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文摘
目的为进一步研究临床应用癌-睾丸抗原GAGE-1诱导特异性抗肿瘤免疫反应,对GAGE-1基因进行克隆、体外原核重组表达及蛋白分离纯化。方法运用RT-PCR技术从人QGY-7701肝癌细胞株中扩增GAGE-1基因片段,插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GAGE-1,并导入大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;经包涵体透析复性及GST柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析鉴定。结果扩增得到GAGE-1基因5’端251 bp片段,与GeneBank公布的序列一致,构建的PGEX-6p-1-GAGE-1原核表达质粒经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达分子量约35.7 kD的GST-GAGE-1融合蛋白,纯化后蛋白纯度为90%以上。结论成功构建PGEX-6p-1-GAGE-1重组表达质粒,并成功表达纯化了GST-GAGE-1融合蛋白,为进一步深入研究GAGE蛋白奠定了基础。
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关键词
GAGE-1
原核表达
纯化
融合蛋白
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Keywords
GAGE-1
Prokaryotic expression
Purification
Fusion protein
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分类号
R346
[医药卫生—基础医学]
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