基于网络药理学研究白术-黄芪-枳实组方治疗帕金森病便秘的作用机制及实验验证

目的基于网络药理学探讨白术-黄芪-枳实组方治疗帕金森病便秘的作用机制及进行实验验证。方法运用网络药理学方法筛选白术、黄芪和枳实的主要活性成分,构建活性化合物-靶点网络,进行功能分析和信号通路分析,分析其治疗帕金森病便秘的分子机制。选取6周龄健康清洁级雄性SD大鼠20只,其中15只采用双靶点注射6-羟基多巴胺法建立帕金森病模型,成功后进一步使用洛哌丁胺3 mg/kg灌胃来建立帕金森病便秘模型,造模成功后根据随机数字表法将其分为模型组、阳性对照组、实验组,每组各5只,另外5只为正常组。实验组给予10 ml/kg白术-黄芪-枳实组方浓缩液灌胃;阳性对照组给予美多芭50 mg/kg和聚乙二醇1 mg/kg灌胃;正常组、模型组用等量的生理盐水进行灌胃,1次/d,持续2周。2周后采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测四组结肠中丝裂原激活蛋白激酶8(MAPK8)、白细胞介素-6(IL-6)、MYC、胱天蛋白酶3(Caspase3)基因及其蛋白表达情况。结果通过数据库及文献筛选,白术、黄芪和枳实中共得到50个活性分子,作用靶点有116个,其中与帕金森病便秘相关的作用靶点有85个。蛋白质-蛋白质相互作用网络中主要节点有MAPK8、表皮生长因子受体、细胞周期蛋白D1、IL-6、MYC、血管内皮生长因子A等。功能分析和信号通路分析结果显示,白术-黄芪-枳实组方主要通过ubiquitin-like protein ligase binding和ubiquitin protein ligase binding等生物过程参与帕金森病便秘,通过PI3K-Akt、MAPK和neurodegeneration-multiple diseases等信号通路干预帕金森病便秘。qRT-PCR及Western blot结果显示模型组MAPK8基因及其蛋白表达量均低于正常组,IL-6、MYC、Caspase3基因及其蛋白表达量均高于正常组,实验组MAPK8基因及其蛋白表达量高于模型组,IL-6、MYC、Caspase3基因及其蛋白表达量均低于模型组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论白术-黄芪-枳实组方通过多靶点、多通路参与治疗帕金森病便秘。