壳聚糖氧化石墨烯负载冬凌草甲素对A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究壳聚糖氧化石墨烯载体(CS-GO)负载冬凌草甲素(CS-GO-oridonin)对人肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响。方法:以A549细胞为对象,采用CCK-8法检测经不同质量浓度的CS-GO(3、6、12、24、48μg/mL)和负载了等质量冬凌草甲素的CS-GO-oridonin(3、6、12、24、48μg/mL,以冬凌草甲素质量计,下同)作用后的细胞存活率,并计算CS-GO-oridonin的半数抑制浓度(IC_(50));采用显微镜观察CS-GO和CS-GO-oridonin(均为32μg/mL)作用2、4、10、24 h后的细胞形态,并采用荧光标记法观察细胞对CS-GO、冬凌草甲素、CS-GO-oridonin(均为32μg/mL)的摄取情况;采用流式细胞术观察不同质量浓度CS-GO(16、32、64μg/mL)和CS-GO-oridonin(16、32、64μg/mL)作用后细胞的凋亡情况及细胞中活性氧(ROS)的含量,采用Westernblot法检测细胞中抗凋亡相关蛋白[髓样细胞白血病1(Mcl-1)、Bax、Bak]蛋白的表达情况。结果:经不同质量浓度CS-GO作用后,细胞的存活率仍不低于90%;经不同质量浓度CS-GO-oridonin作用后,细胞存活率呈下降趋势,且显著低于相同质量浓度的CS-GO组(P<0.01);CS-GO-oridonin的IC_(50)为32.61μg/mL。经CS-GO作用后,细胞形态未见明显改变;经CS-GO-oridonin作用后,细胞出现皱缩、成团脱落、悬浮物增多等现象;当细胞摄取冬凌草甲素和CS-GO-oridonin后,其荧光均较摄取CS-GO的细胞有所增强。与空白组比较,CS-GO 16、32、64μg/mL组细胞的凋亡率和细胞中ROS含量、凋亡相关蛋白的表达水平均无显著变化(P>0.05);而CS-GO-oridonin 16、32、64μg/mL组细胞的凋亡率、细胞中ROS含量和Bax、Bak蛋白的表达水平均显著升高,Mcl-1蛋白的表达水平均显著降低,且上述指标水平均显著高于或低于同质量浓度CS-GO组(P<0.05)。结论:CS-GO不会影响A549细胞的增殖及凋亡;CS-GOoridonin对细胞有明显的抑制和促凋亡作用,这种作用可能与增加细胞中ROS的产生、调控凋亡相关蛋白的表达有关。