广西畜禽大肠杆菌O157∶H7流行病学调查

目的为了掌握广西畜禽大肠杆菌O157∶H7的流行病学情况。方法应用细菌分离、生化特性鉴定、血清凝集反应和PCR鉴定等方法在2007-2010年广西200多个畜禽养殖场进行畜禽大肠杆菌O157∶H7的流行病学调查。对采集的2 915份样本进行了大肠杆菌O157∶H7的分离鉴定、致病性试验、药物敏感试验以及毒力基因检测。有5份样本经细菌培养特性、生化特性、血清凝集反应和PCR鉴定为大肠杆菌O157∶H7,样本细菌分离率为0.17%。小白鼠致病性试验显示分离菌株的毒力各有差别,对小白鼠的致死率在33.4%～100%之间。药敏结果表明分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、多粘菌素B、罗红霉素、利福平和林可霉素不敏感。毒力基因的检测结果表明,5株分离菌株携带的毒力基因略有差异,并与其致病性强弱有一定的相关性。结论大肠杆菌O157∶H7主要在猪群传播,具有一定的毒力,对常用抗生素耐药。

广西牡蛎养殖业的现状与发展对策

【目的】更好地促进广西牡蛎养殖业的健康可持续发展,为政府管理部门及科技工作者提供参考。【方法】对当前广西牡蛎养殖业现状和问题进行分析,找出阻碍当前广西牡蛎养殖业发展的主要原因,提出促进广西牡蛎养殖业健康可持续发展的对策与建议。【结果】目前广西牡蛎养殖业普遍存在种质资源良莠不齐、牡蛎死亡现象时有发生、牡蛎加工方式落后、牡蛎贸易链短等问题。【建议】通过挖掘本地种质资源优势,建立无特定病原体(SPF)牡蛎原种场;合理规划养殖,构建安全高效的健康可持续发展的海水养殖模式;研究、引进养殖和加工新技术,延伸牡蛎产业链条等方式,以促进广西牡蛎养殖业的高效、健康可持续发展,增加牡蛎养殖业的经济效益。

2011年-2014年广西猪流行性腹泻病毒检测及其M基因的序列分析

本试验应用RT-PCR方法对2011年1月—2014年4月采自广西南宁、玉林等14个地区的331份仔猪腹泻粪便样品进行猪流行性腹泻病毒（PEDV）检测。结果显示331份样品中有210份为PEDV阳性,阳性率为63.44%。对其中25份阳性样品的PEDV M基因进行克隆和测序,将测序结果与GenBank中PEDV参考毒株的M基因序列进行同源性比对分析并构建系统进化树。25个PEDV M基因序列与51个参考毒株M基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.9%、94.3%~99.6%。PEDV M基因遗传变异分析结果表明,广西2013年—2014年的PEDV流行毒株与北京、安徽、武汉、河北、广东等地2010年—2013年的流行毒株亲缘关系较近,而与中国早期分离株CH/S（GenBank登录号：JN547228）、疫苗株CV777（GenBank登录号：AF353511）和Attenuated DR13（GenBank登录号：JQ023162）的遗传距离较远。提示广西现流行的PEDV与早期毒株相比已发生较为明显的变异。

广西陆川猪肺炎支原体P46基因克隆及序列分析

为了解广西陆川猪肺炎支原体（Mhp）地方流行毒株的主要免疫原性表面蛋白基因P46的序列特征、基本结构及遗传变异等特点，试验以2011至2013年广西纯种陆川猪疑似猪支原体肺炎（MPS）阳性病料为研究对象，抽提DNA进行PCR扩增，将克隆出与目的基因大小相符的片段回收，再与载体连接，转化到大肠杆菌DH5“感受态细胞中，筛选阳性克隆及测序，扩增获得4株Mhp毒株（GXLC1、GXLC2、GXLC3和GXLC4），随后用DNAStar软件对P46基因序列进行比对分析。结果表明，已克隆出的P46基因序列长度为1104bp，编码368个氨基酸，其中该序列中含有3个编码色氨酸的TGA密码子，而不是终止密码子；1个CGG为编码精氨酸的稀有密码子，而不是其他支原体中的无义密码子。所获得的4株Mhp毒株的P46基因序列与所参考的MhpJ株、232株、7448株及168株的核苷酸同源性为98．4％～99．4％，氨基酸同源性为98．6％～99．5％，毒株之间P46基因的同源性很高，保守性较强。

广西猪牛羊鸡戊型肝炎血清流行病学调查分析

【目的】全面掌握了解广西各地猪、牛、羊、鸡戊型肝炎(HE)的感染状况及其流行特点。【方法】采用双抗原夹心ELISA检测来自广西各地猪(850份)、牛(392份)、羊(428份)、鸡(352份)共2022份血清中的抗HEV抗体,并比较不同地区、不同动物间抗HEV抗体阳性率的差异。【结果】4种主要畜禽的血清总抗HEV抗体阳性率为44.76%(905/2022),其阳性率大小排序为:猪(77.53%)>牛(27.81%)>羊(21.03%)>鸡(13.35%);不同地区的畜禽血清抗HEV抗体阳性率都是以猪群的最高,均在59.00%以上。而从不同地区的4种畜禽血清总抗HEV抗体阳性率来看,以南宁市的最高(61.94%)、河池市的最低(30.93%)。【结论】广西的猪、牛、羊、鸡群中均存在HEV感染,且猪在传播HEV方面起主导作用。

禽流感病毒疫苗研究进展

疫苗接种仍然是防控禽流感的最有效措施之一,目前有紧急接种、预防接种、系统接种及替代接种等4种常见形式。禽流感疫苗的主要类型包括灭活全病毒疫苗、亚单位疫苗、重组病毒载体疫苗、DNA疫苗、复制缺陷型疫苗、病毒样颗粒疫苗及通用疫苗等,影响其免疫效果的因素有免疫原选择及佐剂类型、病毒变异、决策机构的反应速度、免疫覆盖率、疫苗质量及稳定性、遗传结构及机体免疫状态、加强免疫方案等。鉴于传统禽流感疫苗不能对不同亚型禽流感病毒(AIV)及变异株提供交叉保护,且所使用的油佐剂副作用较大,对动物机体损伤较严重,今后应加强研制新型免疫佐剂及其他更安全高效的新型疫苗来弥补现有禽流感疫苗的不足。

广西猪群肠道寄生虫感染情况调查

【目的】摸清广西区规模化猪场和散养户猪群肠道寄生虫的流行情况，旨在为养殖户提供预防及控制猪寄生虫病的科学依据。【方法】通过直接涂片法、沉淀法、尼龙筛淘洗法、卢氏碘液染色法、蔗糖溶液漂浮法等对广西12个市的规模化猪场和散养户猪群共3021份样品进行肠道寄生虫感染情况调查。【结果】广西猪群感染的肠道寄生虫主要有猪球虫、小袋纤毛虫、线虫和隐孢子虫，小袋纤毛虫和猪球虫的感染虽然比较普遍，但感染强度均较低，属于正常带虫现象。广西规模化猪场中线虫感染率最高的是类圆线虫（2．26％），其次是鞭虫（0．98％）和蛔虫（0．81％），食道口线虫最低（0．58％）；在广西散养户猪群中，线虫感染率最高的是蛔虫和鞭虫，均为8．19％，最低是食道口线虫（4．56％）。0-6月龄猪群中各种线虫的感染率随着日龄的增长而增长，但6月龄以后，线虫感染率在规模化场猪趋于平缓，散养户猪群则明显下降。【结论】广西猪群仍然存在寄生虫感染的危害，其中线虫的优势虫种是猪蛔虫和鞭虫，即广西当前甚至未来几年内，猪群需要重点防范的体内寄生线虫仍是蛔虫和鞭虫。

广西奶水牛场隐孢子虫感染情况的调查

了解广西奶水牛隐孢子虫病的感染情况,为兽医生物安全卫生提供数据。采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行检测,共检测南宁、来宾等6市8个奶水牛养殖场1 009头份不同日龄的奶水牛新鲜粪样。应用形态学分类和PCR技术对分离的隐孢子虫卵囊进行种类鉴定,发现1头奶水牛呈隐孢子虫感染阳性,其卵囊通过分离纯化后,经形态学和分子生物学鉴定为安氏隐孢子虫(Cryptosporidium anderso-ni)。广西奶水牛隐孢子虫感染率极低,主要是安氏隐孢子虫感染。

广西羊源布鲁氏菌的种型鉴定

为了对广西山羊体内分离的布鲁氏菌进行种型鉴定,选取广西隆安县和南宁市流产的山羊胎儿体内分离出的布鲁氏菌各1株,经16SrRNA基因序列扩增和测序发现,分离株与布鲁氏菌的同源性高达98.6%~100%,表明分离菌株为布鲁氏菌。采用MOS-PCR和生物学分型方法对分离株进行进一步鉴定,结果表明分离株均为羊种生物Ⅱ型布鲁氏菌。动物攻毒试验显示,分离菌株均为强毒菌株。药物敏感试验结果显示,强力霉素、四环素、庆大霉素、链霉素和卡那霉素有较强的抑菌效果。

一例多种病毒混合感染引起母猪繁殖障碍的实验室诊断

2014年4月初，广西某猪场送检流产母猪病料，畜主描述1周内猪场多头母猪流产，使用多种药物治疗无效。为能明确病因，根据发病情况、剖检病变，采集剖检流产母猪肺脏、淋巴结、脾脏等病料于广西兽医研究所病毒室进行实验室检测，结果确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）和圆环病毒2型（PCV2）多病毒混合感染导致的母猪流产。

广西鸡巨型艾美尔球虫的分离鉴定

为了了解广西鸡球虫病的流行种类,对一起疑似鸡巨型艾美耳球虫病例进行了临床诊断和实验室检测,并对分离到的球虫卵囊进行鉴定,从病例的病理变化和球虫卵囊形态特征等鉴定为鸡巨型艾美耳球虫。

近年广西主要猪病的流行概况及防控对策

近年，随着我国养猪业的不断发展，养殖规模扩大，技术水平不断提高，生猪生产总体平稳，但猪病对养猪生产的影响和危害依然很大。猪病的种类越来越多，控制也越来越困难。一些疫病，如仔猪流行性腹泻持续发生和流行以及猪繁殖与呼吸综合征（俗称“猪蓝耳病”）的散发性疫情等均给养猪业造成极大的经济损失。

广西陆川猪猪肺炎支原体P97基因R1区克隆及序列分析

本试验通过深入了解广西陆川猪猪肺炎支原体（Mhp）地方流行毒株的黏附因子P97基因R1区的序列特征、基本结构及遗传变异等特点,为广西地方品种陆川猪猪支原体肺炎（MPS）有效的综合防控措施提供理论依据,并为进一步研究广西陆川猪Mhp地方流行毒株特性打下坚实的基础。参考Mhp基因组序列设计扩增P97基因R1区的1对引物,以2011年—2014年广西陆川猪MPS阳性病料为研究对象,提取基因组DNA,PCR扩增P97基因R1区,对PCR产物进行测序,将广西陆川猪Mhp不同地方流行毒株的P97基因R1区序列的碱基组成和推导的氨基酸序列进行比对。DNAStar软件分析结果表明,所获得的15株广西陆川猪Mhp毒株（GXLC-1、GXLC-2、GXLC-3、GXLC-4、GXLC-5、GXLC-6、GXLC-7、GXLC-8、GXLC-9、GXLC-10、GXLC-11、GXLC-12、GXLC-13、GXLC-14、GXLC-15）和3株广西其他品种猪Mhp毒株（GX227、GX595、GX674）的P97基因R1区的多处碱基发生变异。通过推导氨基酸序列统计P97R1区五氨基酸（AAKPV/E）重复数为9~18,平均值为12,TN重复数为1~4,结果发现广西陆川猪Mhp流行毒株变异使其毒力和黏附能力增强,再加上陆川猪呼吸道短小狭窄的特殊结构,更易导致广西陆川猪MPS的发生。

广西奶山羊养殖业发展前景探讨

奶山羊养殖业是一项惠及民生又能较快脱贫致富的养殖业。早在一百多年前北海市就有外国传教士带奶山羊到涠洲岛自产鲜羊奶饮用，后来陆续有人学养奶山羊，特别在上世纪八、九十年代以后慢慢出现奶山羊养殖户为市场供应鲜羊奶，养殖投资者有城市周边农民，也有下岗工人，由于效益颇好，近年有较大发展。目前北海市已有近20个专业户，奶山羊存栏2500多只，受北海市奶山羊养殖的影响，近年又有浦北县、横县相继出现奶山羊养殖户.

RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗

【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。

猪支原体肺炎研究进展

猪支原体肺炎是猪肺炎支原体所引发的一种以气喘为主要症状,以肺部对称性肉变为主要病理变化的慢性接触性呼吸道传染病,在世界各地普遍存在,严重危害养猪业的健康发展。随着对猪肺炎支原体的深入研究,发现其单一感染致死率虽低,但是易引发其他病毒或细菌等病原的续发或并发感染,导致猪呼吸道疾病综合征,使得疫情变得更为复杂,增加猪病诊断与防控的难度,造成巨大的经济损失。论文根据猪肺炎支原体的最新研究进展,从病原学、流行病学特点、主要抗原蛋白的研究、诊断、疫苗研制、防控措施等六个方面做一综述,从而为猪肺炎支原体的进一步研究及该病的防控提供新思路。

H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立

【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒(AIV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化快速检测技术,为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素(HA)基因序列,设计一套针对HA基因6个区域的4条特异性引物,在反应之前向反应液中加入荧光试剂(Calcein/MnCl2混合液),然后对反应条件和体系进行优化。【结果】优化的RT-LAMP技术操作简便迅速,常规水浴锅中50min可完成,能特异性地检测出H5亚型AIV,但对其他HA亚型AIV、禽呼吸道病原体无交叉扩增反应,灵敏度是常规RT-PCR的10倍;反应结束后无需打开反应管盖,即可根据反应液的颜色变化对结果进行判定。【结论】建立的H5亚型AIVRT-LAMP可视化检测技术具有简便、快速、特异等特点,可在设备有限的基层兽医站及养殖场对H5亚型AIV进行快速初步诊断。

重组禽呼肠孤病毒S1133σ3基因表达及其免疫原性研究

【目的】构建禽呼肠孤病毒(ARV)S1133σ3基因的真核重组质粒,研究其表达蛋白的免疫原性,为研发ARV基因疫苗奠定基础。【方法】采用RT-PCR对ARVS1133毒株的σ3基因进行RT-PCR扩增,扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接后,转化大肠杆菌DH5α,然后提取重组质粒的DNA,经双酶切、PCR扩增鉴定和纯化。以阳性重组质粒pcDNA3.1-σ3免疫7日龄SPF雏鸡,同时设灭活S1133、表达σ3蛋白及生理盐水对照,二次加强免疫两周后,采用Westernblotting检测鸡群血清抗体;并用S1133毒株进行攻毒,4d后进行ARV检测。【结果】重组质粒pcDNA3.1-σ3的双酶切和RT-PCR扩增鉴定结果一致,均能扩增出约999bp目的条带;免疫攻毒试验结果表明,pcDNA3.1-σ3处理、灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理和生理盐水处理的病毒检出率分别为7.4%、3.7%、11.1%和29.6%,pcDNA-σ3处理与生理盐水处理的差异显著(P<0.05),但与灭活S1133处理、表达σ3蛋白处理的差异不显著(P>0.05);病毒检出部位最高是关节,其次是胸腺和肾脏,胸腺检出率为零。【结论】真核表达ARVS1133σ3蛋白具有较好的免疫保护,可作为免疫抗原进行下一步的疫苗中和试验。

禽流感病毒RT-LAMP检测技术的建立

根据GenBank中禽流感病毒(AIV)M基因序列,设计针对所有亚型AIV的通用检测引物,并对反应条件进行优化,建立了检测AIV的逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)可视化检测方法。结果表明,建立的检测方法对禽流感病毒总RNA最小检出限为10fg,灵敏度为RT-PCR的1 000倍,能特异地检测出所有不同的HA亚型禽流感病毒,对其他禽呼吸道病原体无扩增反应;本方法快速,在常规水浴锅或金属恒温槽中50min就可完成,反应结束后不需开盖即可直接用肉眼根据反应液的颜色变化对结果进行判定。本研究建立的禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法具有操作简便、仪器设备要求简单、灵敏、快速、特异等优点,适合在基层进行AIV的快速早期筛检。

猪流行性腹泻病毒变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株多重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV变异毒株、经典毒株及弱毒疫苗株的S基因和ORF3基因,设计合成2对特异性扩增引物,用以扩增PEDV S基因和ORF3基因,通过目的片段的数量和片段大小来判断PEDV的毒株类型;通过对退火温度等反应条件的优化,建立了检测不同PEDV毒株类型的多重RT-PCR鉴别检测方法。结果显示,所建立的多重RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV变异毒株、经典毒株和弱毒疫苗株;PEDV变异毒株扩增出2条目的条带,分别为234 bp的ORF3基因片段和826 bp的S基因片段;PEDV经典毒株扩增出1条目的条带,片段大小为234 bp的ORF3基因片段;而弱毒疫苗株扩增出1条目的条带,片段大小为185 bp的ORF3基因片段;与猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪乙型脑炎病毒、猪细环病毒及猪细小病毒均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸浓度为2.3×10-4ng/μl;且该方法具有良好的重复性。利用该方法对采集自广西部分地区的91份临床腹泻样品进行检测,样品中PEDV阳性样品有64份,其中变异毒株占89.06%(57/64),经典毒株占4.69%(3/64),弱毒疫苗株占6.25%(4/64)。结果表明,该多重RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简单,为猪流行性腹泻的流行病学及病原的鉴别诊断研究提供了可供借鉴的技术手段。