青蒿素、青蒿琥酯抗皮肤瘢痕的体外实验研究

目的:检测青蒿素和青蒿琥酯对人皮肤瘢痕成纤维细胞生长的影响,探索建立抗皮肤瘢痕膏剂的有效配方。方法:原代培养建立人皮肤瘢痕成纤维细胞系,MTT法和流式细胞仪检测细胞凋亡,计算增殖抑制率和凋亡指数。结果:浓度为0.206g/L和0.103g/L的青蒿素对人皮肤瘢痕成纤维细胞有明显的抑制作用;青蒿琥酯对人皮肤瘢痕成纤维有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。浓度为0.206g/L的青蒿素和浓度为240、120mg/L的青蒿琥酯的凋亡率和坏死率较对照组高(P<0.01)。结论:青蒿素、青蒿琥酯可抑制体外培养的皮肤瘢痕成纤维细胞的生长,作为抗皮肤瘢痕外用膏剂的功效药物,值得进一步研究。

bFGF、TGFβ_1在人皮肤病理性瘢痕不同时期的表达及意义

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(transforming growth fac-torβ1,TGFβ1)在病理性瘢痕不同时期中的表达情况,并探讨它们在瘢痕形成中的作用。方法:收集病理性瘢痕患者43例,应用免疫组化SP法检测其瘢痕组织及正常皮肤中bFGF、TGFβ1的表达并进行统计学分析。结果:瘢痕形成晚期的组织bFGF表达水平明显高于瘢痕形成早期,在增殖期瘢痕、成熟期瘢痕的表达显著低于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P<0.05)。但在不同发生时期的瘢痕中,TGFβ1表达水平差异不明显(P>0.05),而在病理性瘢痕的表达明显高于正常皮肤组织(P<0.05)。结论:bFGF可能是抑制瘢痕形成的重要因子;TGFβ1可能是瘢痕维持其形态和结构的主要内源性生长因子。

水蛭素对皮肤增生性瘢痕成纤维细胞bFGF及TGFβ_1表达的影响

目的:检测水蛭素对人皮肤瘢痕成纤维细胞碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGFβ1)表达的影响,探讨水蛭素抑制瘢痕形成的作用及机制。方法:体外培养并鉴定人皮肤瘢痕成纤维细胞,实时荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测不同浓度水蛭素作用人成纤维细胞24h后,bFGF、TGFβ1的mRNA和bFGF、TGFβ1蛋白表达水平。结果:浓度为0.156～2.5 U/L的水蛭素可下调瘢痕成纤维细胞TGFβ1mRNA、蛋白的表达,同时上调bFGF的mRNA、蛋白的表达,不同浓度组间比较,差异有统计学意义。水蛭素可抑制增生性瘢痕成纤维细胞分泌TGFβ1,促进其分泌bFGF。结论:水蛭素抑制瘢痕可调节bFGF、TGFβ1分泌,由此抑制成纤维细胞的生长、增殖并进一步抑制瘢痕形成。

珍珠液对体外培养人瘢痕成纤维细胞生长的抑制

背景:研究发现,珍珠液有促组织细胞再生、消除瘢痕等功效。目的:观察珍珠液对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖的影响。设计、时间及地点:分组对比观察实验,于2008-09/12在广西医科大学医学实验中心完成。材料:瘢痕组织组织标本来自广西医科大学整形外科患者。珍珠液是珍珠的水解液,含有多种氨基酸、多肽、维生素、矿物质和天然酶等,购自北海国发生物有限公司。方法:参考Veelken方法进行成纤维细胞原代及传代培养,反复传代去除非成纤维细胞成分后,建立人皮肤瘢痕细胞系。取对数生长期的人皮肤瘢痕成纤维细胞3～5代,用胰蛋白酶消化成单细胞悬液,接种于96孔塑料培养板,密度为0.5×104/孔,每孔加入100μL的细胞悬液和100μL的DMEM培养基,常规培养24h后吸弃原培养液,实验分组:珍珠液组:加入已经配置的含珍珠液质量浓度为125.00,62.50,31.30,15.60,7.80,3.90,1.95,0.98mg/L的培养基200μL;对照组:每孔只加200μL的培养基。主要观察指标:MTT法检测成纤维细胞增殖情况,TUNEL法检测成纤维细胞凋亡情况。结果:珍珠液对成纤维细胞的半效抑制浓度IC50为15mg/L,除0.98mg/L质量浓度外,其余质量浓度均能有效地抑制成纤维细胞的生长,且呈剂量依赖性抑制成纤维细胞的生长,珍珠液的浓度越高,对成纤维细胞的抑制率越大。剂量IC50=15mg/L培养的成纤维细胞体积缩小、胞质少、密度变小,凋亡细胞多、呈棕黄色。对照组成纤维细胞体积大、胞质丰富、密度大。珍珠液作用后的细胞凋亡指数高于空白对照组(P<0.01)。结论:珍珠液能抑制体外培养皮肤瘢痕成纤维细胞的生长,并诱导其凋亡。

酪氨酸激酶A和血管内皮生长因子受体2在涎腺腺样囊性癌侵袭转移中的作用

目的通过检测酪氨酸激酶A(TrkA)与血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)在涎腺腺样囊性癌(SACC)的表达情况,探讨TrkA与VEGFR2在SACC侵袭转移中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测47例SACC患者组织病理切片中TrkA与VEGFR2的表达情况,结合临床资料统计分析,评价TrkA、VEGFR2与SACC侵袭转移特性的相关性。结果 TrkA、VEGFR2在SACC组织中的阳性率分别是87.23%(41/47例)和85.11%(40/47例),在有神经侵袭、有复发/转移的SACC患者组织切片中TrkA和VEGFR2的表达率均高于无神经侵袭、未复发/转移者,且差别有统计学意义(P<0.05)。组织内微血管密度(MVD)计数与VEGFR2的表达率成正相关关系;MVD在神经侵袭组为25.14±2.83,在无神经侵袭组为18.81±1.33,两者差异有统计学意义(P<0.05);MVD在复发/转移组为26.58±2.38,未复发/转移组为19.06±1.39(P<0.05)。结论 TrkA、VEGFR2的表达强弱与SACC的嗜神经侵袭,复发转移成正相关关系,提示该2种受体在SACC的侵袭转移过程中具有重要作用,并据此推测TrkA、VEGFR2可以作为评价涎腺腺样囊性癌患者预后的指标。

青蒿琥酯对腺样囊性癌NACC细胞系抑制作用的实验研究

目的观察青蒿琥酯(ART)对人腭部小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞体外增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其机制。方法经不同浓度ART处理体外NACC细胞株后,噻唑蓝法、克隆形成实验检测ART对细胞增殖的影响,并在倒置显微镜及电镜下观察细胞形态学的改变;细胞划痕实验检测ART对细胞迁移能力的改变;流式细胞仪检测ART对NACC细胞周期及凋亡的影响。结果 (1)ART对体外NACC细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),这种作用呈明显的时间、剂量依赖性(P<0.05),24 h、48 h、72 h ART半抑制浓度分别为113.09、74.80、35.61μg/ml;(2)ART处理后的NACC细胞出现形态和结构的改变;(3)ART可以明显地抑制NACC细胞的迁移(P<0.05);(4)不同浓度ART均能促进NACC细胞凋亡,随着ART浓度的增加,NACC细胞凋亡率逐渐升高(P<0.05);(5)低浓度ART可将细胞阻滞在G1期,当浓度达到50.0μg/ml时,ART可将细胞阻滞于G2期。结论 ART对人腺样囊性癌NACC细胞具有明显的抑制作用,并能调整细胞周期,诱导其凋亡。

青蒿素、青蒿琥酯抗皮肤瘢痕的研究

目的检测青蒿素和青蒿琥酯对兔耳增生性瘢痕模型瘢痕防治的效果。方法用青蒿素和青蒿琥酯配制外用膏剂治疗兔耳腹侧增生性瘢痕模型，用药28d后切取瘢痕HE染色、VG染色，检测瘢痕组织的增生指数、成纤维细胞数密度及胶原纤维面积密度。结果青蒿素、青蒿琥酯配制的膏剂组均较对照组瘢痕平坦、柔软且成纤维细胞胞体变小，胶原纤维排列较稀疏、整齐。青蒿素组增生指数、成纤维细胞数密度、胶原纤维面积密度分别为（1．452±0．27）、（3638．245±463．0）细胞／mm^2、（32．29±6．9）％；青蒿琥酯组增生指数、成纤维细胞数密度、胶原纤维面积密度分别为（1．445±0．24）、（3585．016±638．9）细胞／mm^2、（34．74±8．27）％。两实验组检测指标均小于基质对照组及空白对照组，P〈0．01。青蒿素组与青蒿琥酯组相比较，P〉0．05，差异无统计学意义。结论青蒿素、青蒿琥酯膏可有效地抑制动物实验性皮肤瘢痕。

酪氨酸激酶B与VEGF在涎腺腺样囊性癌中的表达及其与侵袭转移相关性的分析

目的:通过检测酪氨酸激酶B(TrkB)及血管内皮生长因子(VEGF)在涎腺腺样囊性癌(SACC)的表达情况,探讨TrkB和VEGF在SACC侵袭转移中的作用及两者相关关系。方法:采用免疫组织化学S-P法检测47例SACC患者组织病理切片中TrkB和VEGF的表达情况,结合临床资料统计分析,评价TrkB,VEGF在SACC侵袭转移中的作用及两者的相关性。结果:TrkB,VEGF在SACC组织中的阳性率分别是89.36%(42/47例)和85.1%(40/47例),在有神经侵袭、转移及实性型SACC患者组织切片中TrkB和VEGF的表达率均高于无神经侵袭、转移及腺样管状型者,且差别有统计学意义(P<0.05);TrkB和VEGF的表达率成正相关关系(P<0.01)。结论:TrkB,VEGF的表达强弱与SACC的嗜神经侵袭,血行转移能力成正相关关系,表明两者在SACC的侵袭转移过程中具有重要的作用,且TrkB和VEGF的表达呈正相关关系,并由此推测TrkB可以作为抗血管治疗SACC的潜在的靶向目标。