RASA4表达失活促进鼻咽癌增殖的机制研究

目的:探究RASA4基因在鼻咽癌(NPC)中的表达情况,研究RASA4基因对影响NPC增殖和转移的影响及分子机制。方法:利用GEO数据库进行NPC中RASA4转录水平的Meta分析。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和western blotting法检测NPC细胞中RASA4 mRNA及蛋白表达水平,免疫组织化学染色法检测RASA4在NPC组织中的蛋白表达及定位情况,CCK-8及平板克隆实验评估RASA4对NPC细胞增殖能力的影响。结果:基于GEO数据的生物信息学分析显示,RASA4在NPC中的m RNA表达显著下调。RT-qPCR和western blotting显示NPC细胞中RASA4 mRNA及蛋白表达下调。外源性过表达RASA4基因可抑制NPC细胞增殖。结论:RASA4可能是NPC潜在的抑制基因,研究其失活机制及其功能对于NPC的发生机制和治疗具有重要意义。

山竹果皮提取物Garcinone E对鼻咽癌S18细胞迁移和侵袭的影响及相关机制研究

目的探讨山竹果皮提取物Garcinone E对鼻咽癌S18细胞迁移和侵袭的影响及相关机制。方法使用不同浓度的Garcinone E处理S18细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,通过Transwell实验检测S18细胞迁移、侵袭能力。通过Western blot实验检测S18细胞转移相关蛋白[组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)]、周期相关蛋白[细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、周期蛋白依赖性激酶7(CDK7)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)]及自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、泛素结合蛋白p62(SQSTM1/p62)、苄氯素1(beclin-1)、自噬相关蛋白3(Atg3)]的表达水平。结果Garcinone E能够显著抑制S18细胞增殖(P<0.05),半抑制浓度(IC 50)=(3.34±0.03)μmol/L,并对S18细胞的迁移和侵袭能力均具有抑制作用(P<0.05)。Garcinone E可以上调S18细胞的TIMP1、TIMP2、p21、LC3B、SQSTM1/p62、beclin-1和Atg3蛋白的表达水平(P<0.05),下调MMP-2、MMP-9、CDK2、CDK6、CDK7和cyclin B1蛋白的表达水平(P<0.05)。结论Garcinone E能抑制鼻咽癌S18细胞的转移和侵袭能力,阻滞细胞周期,抑制细胞自噬,可作为鼻咽癌化疗药物研发的候选先导化合物。

细胞焦亡因子在稽留流产蜕膜组织中的表达研究

目的探讨稽留流产妇女蜕膜组织中细胞焦亡因子的表达情况及细胞焦亡对稽留流产的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和免疫组织化学法(IHC)分别检测稽留流产妇女(稽留流产组)和正常早期妊娠、正常人工流产妇女(正常人流组)蜕膜组织中细胞焦亡因子半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA、白介素-1β(IL-1β)mRNA及其蛋白的表达情况。结果实时FQ-PCR检测结果显示,稽留流产组蜕膜组织Caspase-1 mRNA、IL-1βmRNA相对表达量明显高于正常人流组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。IHC结果显示,Caspase-1主要表达于细胞质内,IL-1β主要表达于细胞质和胞核内;稽留流产组蜕膜组织中的Caspase-1、IL-1β表达量均高于正常人流组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论细胞焦亡因子Caspase-1和IL-1β在早期稽留流产患者蜕膜组织中的表达上调,细胞焦亡与稽留流产可能存在明显的关联。

Garcinone C对鼻咽癌细胞衰老、迁移和侵袭功能的影响及作用机制研究

目的探讨Garcinone C对鼻咽癌细胞衰老、迁移和侵袭功能的影响及作用机制。方法Garcinone C处理鼻咽癌细胞HONE1,通过β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞。应用Transwell实验检测Garcinone C干预对鼻咽癌细胞HONE1、HK1迁移、侵袭能力的影响。应用Western blot实验检测鼻咽癌细胞HONE1、HK1上皮间充质转化(EMT)标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP2)蛋白表达水平,以及铁死亡相关蛋白铁蛋白重链1(FTH1)、胱氨酸转运体蛋白xCT的表达水平。结果经Garcinone C处理后,HONE1细胞衰老率上升(P<0.05),HK1和HONE1细胞迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。Garcinone C干预可上调HONE1、HK1细胞E-cadherin和TIMP2蛋白的表达水平(P<0.05),下调N-cadherin和FTH1、xCT蛋白的表达水平(P<0.05)。结论Garcinone C可能通过抑制鼻咽癌细胞的迁移、侵袭,并诱导其衰老和发生铁死亡的途径发挥治疗鼻咽癌的作用,具有应用的前景。

质谱MRM技术在生物标志物研究中的应用

质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术是一种基于已知信息或假定信息设定质谱检测规则,针对性的获取数据的方式,具有高选择性、高特异性、高灵敏度等优点,在基于蛋白质组学的生物标志物研究中,逐渐受到研究者的重视。从MRM定义、MRM在生物标志物研究中的优势、应用及其局限性和前景进行综述。

一种卵巢癌快速药敏试验方法的效果研究

目的:建立一种快速确定卵巢癌患者对多种常用化疗药物敏感性的检测方法,初步探讨对卵巢癌患者进行个体化化疗的应用价值。方法:从1例卵巢癌患者初次手术切除的标本中分离腹膜转移灶,进行细胞培养,取第2至第4代细胞,分别以紫杉醇(PTX)、多西紫杉醇(DTX)、顺铂(DDP)、卡铂(CBP)和奈达铂(NDP)单药及两种化疗药物联合干预,采用实时无标记细胞分析技术(RTCA)检测细胞增殖情况,同时观察二甲双胍(MTF)配伍后的化疗增敏作用。结果:NDP组标准化细胞指数(NCI)曲线下降快,在给药后24h、36h、48h和60h时点的NCI值明显低于其他单药组(P<0.05)。NDP+DTX组在24h、36h和48h时点的NCI值明显低于DDP+PTX组和CBP+DTX组(P<0.05)。联合使用MTF后,加药后12~72h,DDP+PTX+MTF组的NCI值明显低于DDP+PTX组(P<0.05);在12h、48h、60h时点,NDP+DTX+MTF组NCI值明显低于NDP+DTX组(P<0.05)。结论:该原代卵巢癌腹膜转移灶细胞对NDP单药和NDP+DTX组合最敏感,联合使用MTF可增加该细胞对化疗药物的敏感性。RTCA系统可对卵巢癌腹膜转移肿瘤细胞的药物敏感性进行快速分析,为优选合理的临床化疗方案、判断患者是否适用MTF作为增敏剂提供依据。

不明原因复发性流产中铁死亡的生物信息学分析及验证

目的:探究铁死亡关键基因在不明原因复发性流产(URSA)发生发展中的作用,初步确定潜在生物标志物。方法:从基因表达综合(GEO)数据库下载数据集GSE26787,利用GEO2R筛选差异表达基因(DEGs);从FerrDb V2数据库下载铁死亡相关基因;DEGs与铁死亡基因取交集获得URSA铁死亡相关基因;利用DAVID数据库对URSA铁死亡相关基因进行基因本体(GO)富集及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析;利用String数据库和Cytoscape软件分析蛋白互作网络,筛选Hub基因;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Hub基因在人工流产组及URSA组患者蜕膜组织中mRNA的表达水平。结果:共筛选出55个URSA铁死亡基因;GO功能富集提示URSA铁死亡相关基因主要在自噬调节、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录正调控、膜的整体组分、酶及p53蛋白受体结合富集。KEGG通路分析显示URSA铁死亡基因富集最明显的为FoXO信号通路。采用String数据库及Cytoscape软件筛选出的URSA铁死亡关键基因分别为EGFR、SRC、KRAS、MDM2。RT-qPCR检测结果显示,EGFR、SRC、MDM2在URSA组中的表达均低于人工流产组(均P<0.05);KRAS在URSA组和人工流产组中表达无统计学差异(P>0.05)。结论:铁死亡相关基因EGFR、SRC、MDM2可作为诊治URSA的潜在生物标志物。

抗VASN-EGFFN3重组蛋白的单克隆抗体的制备

目的:通过大肠杆菌表达系统表达和纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白,免疫小鼠制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。方法:构建p ET30a(+)-VASN-EGFFNN3重组载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为载体表达VASN-EGFFNN3重组蛋白。用镍离子亲和层析柱纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白。利用纯化后的VASN-EGFFN3重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,用杂交瘤技术制备抗VASN-EGFFN3单克隆抗体。结果:成功构建pET30a(+)-VASN-EGFFNN3重组原核表达质粒,诱导的重组VASN-EGFFNN3蛋白主要以包涵体的形式存在。纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的血清抗体效价大于1∶2187000,免疫效果良好。利用杂交瘤技术获得2株杂交瘤细胞株。结论:成功利用大肠杆菌表达系统制备并纯化VASN-EGFFNN3重组蛋白,通过杂交瘤技术成功制备小鼠抗VASN-EGFFN3单抗。

临床ⅠB～ⅡB期宫颈癌直接手术和新辅助化疗后手术患者的手术-病理分期探讨

目的探讨临床分期及手术-病理分期在临床ⅠB~ⅡB期宫颈癌诊治中的意义。方法回顾性分析行手术治疗的388例ⅠB~ⅡB期宫颈癌患者的临床病理资料,分为直接手术(DS)和术前新辅助化疗(NACT)组,观察两组临床分期与手术-病理分期的差异。结果临床分期与手术-病理分期符合率为:DS组21.1%,NACT组10%。临床检查对阴道及宫旁浸润判断的敏感度、特异性、准确度DS和NACT组分别为66.7%、20.0%,67.5%、70.9%,67.4%、69.7%和50.0%、85.7%,58.0%、46.0%,57.6%、47.6%。DS组不同分期的阴道、深肌层浸润差异有统计学意义(P<0.05)。DS组以p TNM进行分期,癌栓是影响预后的因素(DFS:P=0.013,OS:P=0.004);以FIGO分期,分期与预后密切相关(DFS:P=0.024,OS:P=0.050)。NACT组FIGO分期中的分期是影响复发的因素(P=0.023),而淋巴结转移与预后密切相关(DFS:P=0.004,OS:P=0.044)。结论手术-病理分期与临床分期在ⅠB~ⅡB期宫颈癌中存在明显差异,其中ⅡB期的误差率最高,分期偏高导致本可手术的患者失去手术机会。

沉默KDM5A基因对卵巢上皮癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP耐药性的影响

目的:探讨沉默KDM5A基因表达对卵巢上皮癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP耐药性的影响及其机制。方法:选择高表达KDM5A的SKOV3/DDP细胞,设计KDM5A基因靶向的发夹状shRNA,筛选出最佳shRNA沉默片段,构建携带有目的基因的重组慢病毒干扰载体并感染SKOV3/DDP细胞,通过嘌呤霉素筛选,RT-PCR和Western blot法验证,建立稳定干扰KDM5A表达的细胞株SKOV3/DDP-KDM5Ai。将实验分为3组,即KDM5A沉默组(SKOV3/DDP-KDM5Ai)、阴性对照组(SKOV3/DDP-NC)和空白对照组(SKOV3/DDP),流式细胞仪检测细胞的周期比例及凋亡情况;CCK-8法检测细胞的IC 50;高效液相色谱分析法检测在不同质量浓度(7.5μg/ml和15μg/ml)顺铂作用48h后细胞内的药物浓度。RT-PCR技术和Western blot法细胞中β-catenin、P-gp及COX-2的mRNA和蛋白表达水平。结果:成功建立KDM5A基因表达沉默的SKOV3/DDP细胞株。SKOV3/DDP-KDM5Ai组细胞凋亡率增高,G 0/G 1期细胞比例明显增高,而S期和G 2期细胞比例明显下降,与SKOV3/DDP-NC组及SKOV3/DDP组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。SKOV3/DDP-KDM5Ai组细胞、SKOV3/DDP-NC组细胞及SKOV3/DDP组细胞对顺铂的IC 50分别为(17.5847±1.1482)μg/ml、(27.8587±0.8876)μg/ml、(28.1267±0.7308)μg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。SKOV3/DDP-KDM5Ai组在不同顺铂质量浓度(7.5μg/ml和15μg/ml)下细胞内顺铂浓度均明显高于SKOV3/DDP-NC组及SKOV3/DDP组(F=5.14,P<0.01)。RT-PCR技术和Western blot法显示,SKOV3/DDP-KDM5Ai组的β-catenin、P-gp及COX-2的mRNA和蛋白表达水平明显低于SKOV3/DDP-NC组及SKOV3/DDP组(P<0.05)。结论:KDM5A基因在顺铂耐药卵巢癌细胞中高表达,其沉默后可在体外降低顺铂耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞的耐药性,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。

鸡尾酒疗法对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1、COL Ⅰ及COL Ⅲ表达的影响

目的:研究鸡尾酒疗法对肝纤维化大鼠肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)及Ⅲ型胶原(COLⅢ)表达的影响.方法:采用CCl4造成大鼠肝纤维化模型,实验分为:牛磺酸组、表没食子儿茶素没食子酸酯组、三羟基异黄酮组、鸡尾酒组、秋水仙碱组、模型组和正常组.在实验的第10周末取肝组织,HE染色法观察肝组织改变,免疫组织化学法检测肝组织中TGF-β1、COLⅠ及COLⅢ的表达.结果:病理组织学观察发现各组能明显改善肝纤维化大鼠肝组织结构和肝纤维化,免疫组织化学检测表明鸡尾酒组、三羟基异黄酮组、表没食子儿茶素没食子酸酯组、牛磺酸组的肝组织中TGF-β1、COLⅠ及COLⅢ表达量与模型组比较均显著降低(TGF-β1:2.57±0.23,4.21±0.35,4.93±0.21,4.81±0.16vs12.11±0.62,P<0.05;COLⅠ:2.69±0.10,4.88±0.42,5.04±0.31,4.79±0.29vs13.06±0.24,P<0.05;COLⅢ:3.17±0.42,5.73±0.23,5.51±0.25,5.24±0.18vs15.15±0.43,P<0.05),并且鸡尾酒组与单一用药各组相比有统计学意义(P<0.05).结论:鸡尾酒疗法能对肝纤维化大鼠的肝脏起保护作用,与单一用药相比更能有效降低TGF-β1、COLⅠ及COLⅢ的表达,可能具有更高的抗肝纤维化能力.

二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化-肝癌动物模型的建立

目的建立大鼠肝纤维化-肝癌模型并动态观察大鼠肝纤维化-肝癌发生过程中的病理形态特点。方法用0.01%二乙基亚硝胺(DEN)溶液间断喂养SD大鼠诱发肝癌,对大鼠肝脏在不同诱癌阶段的病理变化进行动态观察。结果用药第4周后,肝细胞点状坏死及炎性细胞浸润;8周时,肝细胞严重脂肪变性、灶性坏死,门管区出现纤维组织增生;9—12周时,增生的胶原束包绕并分割肝小叶,正常的肝小叶结构被破坏,假小叶形成;15周后存活大鼠均形成肝癌,肝癌细胞排列成条索状或团块状,诱癌组为100%成癌(8/8)。结论成功建立从肝纤维化发展成肝癌的动物模型,设立间歇期提高了大鼠癌变末期的成活率,该模型是动态研究肝癌发生发展进程的理想动物模型。

视黄醇结合蛋白2基因沉默对卵巢癌SKOV3/PTX细胞迁移侵袭的影响

目的探讨沉默视黄醇结合蛋白2(RBP2)基因表达对卵巢癌细胞SKOV3/PTX迁移及侵袭的影响及机制。方法建立稳定干扰RBP2表达的细胞株SKOV3/PTX⁃RBP2i,将实验分为3组,即RBP2沉默组(SKOV3/PTX⁃RBP2i)、阴性对照组(SKOV3/PTX⁃NC)和空白对照组(SKOV3/PTX),Western blot法验证RBP2基因的沉默效果,划痕实验检测三组细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测三组细胞的侵袭能力,RT⁃PCR和Western blot法检测三组细胞β⁃catenin、VEGF及MMP⁃2的表达情况。结果成功构建稳定干扰RBP2表达的细胞株SKOV3/PTX⁃RBP2i,沉默组RBP2的表达强度明显低于空白组和阴性对照组;沉默组、阴性对照组及空白组细胞的划痕愈合率和侵袭能力差异有统计学意义(P<0.01),沉默组细胞的划痕愈合率和侵袭能力明显低于阴性对照组和空白组(P<0.01);RT⁃PCR和Western blot结果显示,沉默组β⁃catenin、VEGF及MMP⁃2的mRNA和蛋白表达水平均明显低于阴性对照组及空白组(P<0.05)。结论干扰SKOV3/PTX细胞中RBP2的表达可抑制细胞的迁移及侵袭能力,其机制可能与Wnt/β⁃catenin信号转导通路有关。

血清RBP4酶联免疫试剂盒技术性能的评估

目的:对检测血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)水平的酶联免疫试剂盒进行性能评估。方法:按照我国《酶联免疫分析试剂盒通则》对RBP4酶联免疫试剂盒的线性范围、灵敏度、精密度、正确度、稳定性进行评估,并对正常和肝纤维化患者各100例的血清RBP4浓度进行检测,Western blot进行验证。结果:构建的RBP4酶联免疫试剂盒拟合优度大于0.999;灵敏度的检测限为4.67 pg/mL,定量限为6.189 pg/mL;精密度检测的批内误差小于20%,批间误差小于25%;准确性介于84.05%~112.26%之间;试剂盒在8个月时间内,稳定性无差异(P>0.05);试剂盒检测肝纤维化患者血清RBP4水平显著低于正常组(P<0.05),且与Western bolt结果一致。结论:血清RBP4酶联免疫试剂盒各项指标均能达到我国《酶联免疫分析试剂盒通则》要求。

10 Gy X射线照射鼻咽癌移植瘤组织差异表达蛋白质的初步筛选

目的比较不同放射敏感性的鼻咽癌裸鼠移植瘤组织蛋白质表达的差异,筛选出与鼻咽癌放射抗拒性相关的蛋白质。方法建立人鼻咽低分化鳞癌细胞(CNE-2)及其放射抗拒性细胞(CNE-2R)裸鼠移植瘤模型,予X射线10 Gy单次照射移植瘤,提取瘤体组织总蛋白质并酶解成肽段,用i TRAQ试剂分别标记后再用二维液相色谱分离,在LTQ-Orbitrap高分辨率质谱仪上鉴定并筛选差异表达的蛋白质,并对差异表达的蛋白质进行基因本体论(Gene Ontology,GO)基因功能分类。结果共鉴定出差异表达的蛋白质61个,其中上调17个,下调有44个,GO分析显示差异表达的蛋白质主要涉及细胞周期调控、分解代谢、信号通路调节、压力应激反应及氧化还原反应等生物学过程。结论 Annexin2、PDIA3、Ubiquitin、14-3-3δ/ζ、CKAP4、HSPA8、NLRC4等差异表达的蛋白质可能与鼻咽癌放射抗拒性相关。

KI67在卵巢癌组织中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系

目的:分析卵巢癌组织中KI67蛋白的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:收集172例卵巢癌患者(卵巢浆液性癌153例、黏液性癌3例、透明细胞癌2例、子宫内膜样腺癌13例、鳞状细胞癌1例)的卵巢癌组织石蜡标本,另同期收集8例卵巢良性肿瘤患者的卵巢肿瘤组织标本及10份正常卵巢组织标本作为对照。采用免疫组化方法检测KI67的表达情况,并分析其与卵巢癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:KI67蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率为97.09%(167/172),明显高于正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤组织(P<0.05)。KI67的表达与卵巢癌患者的年龄、是否浆液性卵巢癌、细胞分化程度、病理分期、是否淋巴结转移、无进展生存时间(PFS)及总生存时间(OS)均无明显相关关系(均P>0.05)。结论:卵巢癌患者KI67蛋白表达明显上调,KI67表达水平与卵巢癌患者的生存预后并无明显相关关系。

抑癌基因SPARCL1低表达对卵巢癌耐药和临床预后的影响

目的:探讨SPARCL1表达对卵巢癌顺铂耐药的影响,阐明SPARCL1表达与耐药及预后的相关性。方法:RT-qPCR和Western blot法检测卵巢癌细胞中SPARCL1表达,免疫组化法(IHC)检测卵巢癌组织中SPARCL1表达,Kaplan-Meier生存曲线分析基因表达与无疾病生存期(DFS)和总生存期(OS)的关系。慢病毒转染过表达或干扰基因在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中的表达,CCK-8法检测细胞增殖并计算IC 50。转录组测序研究SPARCL1表达对卵巢癌细胞分子水平的影响。结果:与卵巢癌敏感组织相比,SPARCL1蛋白在耐药组织中显著低表达(P=0.001),且该蛋白低表达能预测卵巢癌不良DFS(P=0.001)和OS(P=0.021)。SPARCL1在顺铂耐药细胞SKOV3/DDP中显著下调表达,其过表达能减缓耐药细胞增殖速度并提高对顺铂的敏感性,而干扰其表达则能加快细胞增殖并降低细胞对顺铂的敏感性。转录组测序结果发现,SPARCL1过表达可能影响p53及细胞黏附分子等经典卵巢癌耐药调控通路。结论:SPARCL1低表达促进耐药且与不良OS和DFS显著相关,有望作为卵巢癌治疗靶标和潜在预后标记物应用于临床。

CDK1、CCNB1和NDC80与乙型肝炎相关肝细胞癌的预后和进展相关:基于生物信息学方法

目的探讨HBV转化为HCC相关的关键基因,并探索相关的分子机制。方法分析基因表达综合(GEO)数据库中GSE55092、GSE84044和GSE121248的mRNA微阵列数据,其中包括119个HBV相关的HCC组织和252个HBV相关的非肿瘤组织。“sva”R包用于去除批间差。进行整合分析,获取HBV相关肝癌和HBV组织中的差异表达基因(DEGs),通过基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析对差异表达基因进行功能注释。使用相互作用基因搜索工具(STRING)构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,挖掘最重要的模块和关键基因。cBioportal用于分析hub基因的相关性。利用Kaplan-Meier和Oncomine数据库对TCGA数据库中肝癌基因表达数据进行验证,探讨hub基因与肝癌发生、发展和预后的关系。通过逆转录定量PCR(RT-qPCR)实验验证17对临床肝细胞癌样本与邻近非肿瘤组织中hub基因的表达。结果共获得121个DEGs(P<0.01),鉴定出3个遗传标记,细胞周期素依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白B1(CCNB1)和核分裂周期蛋白80(NDC80),与细胞周期、嘧啶代谢和DNA复制有关,这3个基因高度相关(P<0.05)。UALCAN数据库证实这些基因在肝癌组织中高表达并获得相关预后信息。Kaplan-Meier表明,它们与HCC患者的低存活率相关。CDK1、CCNB1和NDC80与肝癌分级相关(P<0.05),RT-qPCR实验证实CDK1、CCNB1和NDC80的mRNA在肝细胞癌中的表达明显高于癌旁组织。结论CDK1、CCNB1和NDC80基因可作为HBV相关肝细胞癌的预后标志物,在肝癌的基础研究和临床治疗方面有一定的应用价值。

沉默CDKN1A基因对鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞放射敏感性的影响

目的探讨CDKN1A基因的表达与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法构建慢病毒表达载体LV-CDKN1A-RNAi并转染鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞,设转染LV-CDKN1A-RNAi慢病毒的CNE-2R细胞为实验组,转染阴性对照慢病毒的CNE-2R细胞为阴性对照组,未转染的CNE-2R细胞为空白对照组。用CCK-8法、细胞克隆形成实验及流式细胞术分别检测各组细胞增殖、放射敏感性及细胞周期的变化。结果成功构建了CDKN1A基因沉默的CNE-2R细胞,CCK-8法检测显示实验组CNE-2R细胞在照射6 Gy后生长受到抑制,且随时间延长其抑制作用更为明显。细胞克隆形成实验显示实验组CNE-2R细胞放射敏感性增强(放射增敏比为SER=1.24)。流式细胞术检测显示实验组与对照组细胞相比,G0/G1期和G2/M期细胞分布在X射线照射6 Gy前后明显改变(P<0.05)。结论 CDKN1A基因沉默能增强鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞的放射敏感性,CDKN1A基因的表达可能与鼻咽癌放射敏感性相关,有望成为鼻咽癌治疗的新靶点。

基于生物信息学分析STAT3、Grim19在卵巢癌中的表达及临床意义

目的研究STAT3、Grim19在卵巢癌中的表达情况、潜在功能、预后评估及临床意义。方法利用NCBI、UCSC、UniProt数据库检索STAT3、Grim19基本信息。使用PubMed数据库检索与STAT3、Grim19相关文献。利用GEPIA在线工具分析STAT3、Grim19蛋白之间的相关性。下载肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中包含STAT3、Grim19表达水平的卵巢浆液性囊腺癌临床病例资料并作生存分析。利用在线工具LinkedOmics筛选STAT3、Grim19相关基因。利用Omicshare在线软件对相关基因进行GO功能注释富集分析与KEGG通路富集分析。收集广西医科大学附属肿瘤医院2013年1月~2017年12月经手术治疗的115例上皮性卵巢癌标本,采用免疫组化法(IHC)检测STAT3、Grim19表达水平,并分析二者与预后评估的关系。结果STAT3、Grim19表达水平具有组织学特异性,STAT3在多种恶性肿瘤中表达上调,Grim19在多种恶性肿瘤中表达下调,且二者呈负相关。TCGA临床数据显示,STAT3高表达组中位生存时间与低表达组无明显差异(P>0.05),Grim19高表达组中位生存时间长于低表达组(P<0.05)。在检测的6426个基因中,2785个基因与STAT3具有相关性(P<0.05),其中相关系数最大的基因为DNAAF2;4960个基因与Grim19具有相关性(P<0.05),其中相关系数最大的基因为NDUFB7。GO功能注释富集分析结果显示,STAT3主要涉及生物学过程为细胞过程、单一生物过程、代谢过程、刺激反应等;主要涉及分子功能为结合、催化活性、信号转导活性等;主要涉及细胞组成为细胞质、细胞膜、细胞器等。Grim19主要涉及生物学过程为细胞过程、代谢过程、细胞组分组织或合成等;主要涉及分子功能为结合、催化活性、结构分子活性等;主要涉及细胞组分为细胞质和细胞器。KEGG通路富集分析结果显示,STAT3主要参与的细胞过程为分解和代谢,作用机体系统为免疫系统和内分泌系统,涉及细胞信号转导功能,在多种传染性疾病与恶性肿瘤中作用显著;Grim19信号通路在神经退行性疾病、内分泌和恶性肿瘤疾病中作用明显,参与如能量代谢、核苷酸代谢等多种生物学代谢过程(P<0.05)。广西医科大学附属肿瘤医院收集的115例临床病例标本IHC结果示,在上皮性卵巢癌中,STAT3、Grim19的表达水平与患者中位生存时间无明显相关,差异无统计学意义(P>0.05),Cox模型示年龄可能是影响上皮性卵巢癌的独立危险因(P<0.05)。结论Grim19有望成为评价卵巢癌预后的指标之一,可能经由STAT3调控卵巢癌疾病进展;STAT3经多种信号通路介导卵巢癌发生发展和耐药机制,有望成为卵巢癌靶向治疗的靶标。