IL-18基因转导乳腺癌细胞肿瘤原性的改变及抗瘤作用的研究

目的:建立转人白细胞介素-18(IL-18)基因的乳腺癌细胞株Bcap37细胞,并探讨IL-18基因转导后Bcap37细胞肿瘤原性的改变和抗瘤作用。方法:将携带人IL-18的质粒pcDNA3.1-IL-18转导入人乳腺癌细胞系Bcap37细胞中,通过药物G418进行筛选,采用RT-PCR和ELISA法对IL-18基因的表达进行检测;裸鼠致瘤实验观察肿瘤原性的改变;观察灭活后Bcap37-IL-18细胞的抗瘤作用。结果:IL-18基因成功转导入Bcap37细胞中并能顺利表达;RT-PCR电泳结果显示IL-18基因在mRNA水平有表达;ELISA结果显示,106个转导细胞在24 h内分泌IL-18的含量是(126.3±4.5)pg;空载体转染的细胞未检测到IL-18;裸鼠致瘤实验表明,接种Bcap37-IL-18细胞的裸鼠肿瘤的生长速度明显低于Bcap37组和Bcap37-pCDNA3.1组;抗瘤实验结果显示,放射灭活的Bcap37-pcDNA3.1细胞和Bcap37-IL-18细胞免疫接种裸鼠后,再接种Bcap37细胞于裸鼠左侧背部皮下。肿瘤长出的时间Bcap37-IL-18细胞免疫接种组比Bcap37-pCDNA3.1细胞免疫接种组明显延长,且肿瘤的体积Bcap37-IL-18细胞免疫接种组比Bcap37-pCDNA3.1细胞免疫接种组小。结论:IL-18基因能成功的整合到Bcap37细胞基因组中,且在转导的肿瘤细胞中持续表达;IL-18基因转染降低了Bcap37细胞的肿瘤原性;IL-18基因修饰的Bcap37细胞具有明显的抗肿瘤作用。

白细胞介素-18基因修饰大肠癌细胞肿瘤疫苗的制备及抗肿瘤作用研究

目的:制备人白细胞介素-18(hIL-18)基因的修饰的大肠癌基因工程肿瘤疫苗,观察其抗肿瘤作用。方法:应用MTT法观察X线照射后对SW480细胞生长的影响,治疗15d后,采用ELISA法检测实验鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-4、IL-10;将SW480细胞和SW480-IL-18细胞应用放射线灭活后接种于裸鼠左侧背部皮下,再接种SW480细胞于裸鼠右侧背部皮下,观察灭活后SW480-IL-18细胞的抗瘤效应。结果:经过高能X线照射后,SW480-IL-18细胞生长停滞,96h细胞全部死亡。未照射的106个SW48-IL-18细胞在24h内分泌IL-18的含量是182.7PG;照射组可是60.39pg。空载体转染的SW480细胞和未转染的SW480细胞上清液中未检测到IL-18。SW480-IL-18组较SW480组和pcDNA3.1/SW480组,能明显刺激T细胞增殖(P=0.01);而SW480组和pcDNA3.1/SW480组,对T细胞的刺激作用微(P=0.27)。灭活SW480-IL-18细胞能有效地激活裸小鼠体内NK细胞活性。SW480-IL-18细胞治疗后,治疗组较其他对照组肿瘤生长明显受到抑制(P<0.05)。治疗组小鼠存活期显著延长,有33.4%小鼠长期存活,高于对照组。结论:IL-18基因修饰的SW480细胞具有明显的抗肿瘤作用,为大肠癌基因工程肿瘤疫苗的研制提供了实验基础。

染尘肺泡巨噬细胞上清液致人胚肺成纤维细胞蛋白谱改变

目的探讨蛋白质组学技术研究二氧化硅粉尘处理的肺泡巨噬细胞(AM)上清液对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)蛋白质表达变化的影响。方法实验组采用二氧化硅处理大鼠AM的培养上清液刺激MRC-5,对照组MRC-5采用等量无粉尘处理的AM培养上清液作用;提取MRC-5总蛋白,进行双向凝胶电泳识别差异表达蛋白,经质谱分析、数据库搜索进行蛋白鉴定。结果对照组MRC-5细胞检测到(410±21)个,染尘组为(398±19)个蛋白点。组间的匹配性较好,染尘上清刺激后35个蛋白斑点发生变化,初步鉴定出数个与氧化应激相关的蛋白:热休克蛋白(HSP27)、Per-oxiredoxinⅡ亚型b、钙网蛋白-3和钙网蛋白-5类似物等。结论应用蛋白质组学方法有助于筛选到经不同处理细胞间的蛋白表达差异,为进一步研究矽肺机制提供分子基础。

口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白谱差异

目的探讨人口腔鳞癌体外培养亲本细胞株KB与耐药细胞株KBV200的蛋白质表达差异。方法在体外培养KB及KBV200细胞株,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI)及蛋白质芯片技术检测KB及KBV200蛋白质谱。结果体外培养的口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株的蛋白质存在差异表达,CM-10芯片共捕获102个蛋白,发现差异峰19个,其中15个差异蛋白在KBV200细胞中高表达,4个差异蛋白在KBV200细胞中低表达。结论SELDI蛋白芯片技术检测口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白质的差异表达方法简便、敏感、重复性好。

HSP70各亚型在染尘体外细胞模型中表达

目的观察染尘巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)各亚型(HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom)表达的影响。方法采用大鼠巨噬细胞(AMs)和人胚肺成纤维细胞(HELF)构成体外模型,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测二氧化硅粉尘处理AMs24h的培养上清液刺激HELF细胞的HSP70各亚型表达情况。同时用二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照。结果HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom基因表达与粉尘浓度的相关系数(R)依次为0.931(P<0.01)、0.923(P<0.01)、0.818(P<0.05),呈现明显的剂量-反应关系。结论受染尘肺泡巨噬细胞上清液刺激的人胚肺成纤维细胞HSP70各亚型在转录水平呈表达增加,且可能参与了矽尘致细胞氧化应激过程。

SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术实验条件优化

表面加强激光解析电离-飞行时间质谱（surface en-hanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrom-etry,SELDI-TOF-MS）技术是近年在基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS ）基础上改良发展起来的一种蛋白质分离技术.

胚胎干细胞抗Lewis非小细胞肺癌作用的体内研究

目的研究胚胎干细胞动物体内抗Lewis非小细胞肺癌的作用及初步机制。方法以小鼠Lewis肺癌模型为基础，检测实验组和对照组小鼠的肿瘤生长情况和免疫指标，探讨胚胎于细胞在体内的抗肿瘤作用及其初步分子免疫机制。结果肿瘤生长曲线显示，与对照组小鼠相比，实验组小鼠肿瘤的生长速度明显减慢，从实验的第5天开始两组小鼠的肿瘤体积相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。小鼠外周血T、B淋巴细胞亚群检测结果，与对照组小鼠相比，实验组小鼠外周血CD4＋、CD8＋淋巴细胞比例增加，差异有统计学意义，分别为P〈0．05、P〈0．01，CD19＋淋巴细胞比例下降（P〈0．05）。血清细胞因子（IL-2、IL-4和IFN-γ）检测结果，与对照组相比，实验组小鼠外周血中IL-2和IFN-γ细胞因子水平增高，差异有统计学意义（P〈0．05），IL-4略有增高但无统计学意义。结论胚胎干细胞不仅在体外具有明显的抗肿瘤作用，在动物体内胚胎干细胞也能通过激活免疫系统从而产生有效的抗肿瘤作用，抑制或延缓肿瘤的形成和发展。

EGCG逆转肝癌耐多药差异基因表达

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)逆转人肝癌细胞耐多药的机制,为进一步在基因转录水平上高通量筛选逆转肝癌耐多药天然药物提供一定的参考依据。方法采用人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶Bel-FU细胞,甲基四唑蓝法检测耐药Bel-FU细胞的耐多药性及对EGCG进行体外细胞毒性试验;选择与肝癌发生发展相关途径的42个功能基因作为检测基因,采用实时定量PCR微阵列技术检测Bel-7402组、Bel-FU组、Bel-FU+EGCG作用组基因表达;实时定量PCR检测相同条件下处理的基因Hras、MDR1表达变化以验证微阵列技术结果。结果耐药细胞Bel-FU对5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6、3.9、37.2、16.5、3.7;EGCG对细胞Bel-FU的IC50、IC10值分别为587.4、73.1μg/mL;实时定量PCR微阵列检测结果显示:与Be-7402组比较,Bel-FU组中有5个基因上调;与Bel-FU组比较,Bel-FU+EGCG作用组有5个基因下调,其中有3个基因为Bel-7402组与Bel-FU组之间的差异基因;实时定量PCR验证结果:Bel-FU组中基因Hras、MDR1表达为Bel-7402组中的2.84、2.74倍,与Bel-FU组比较,Bel-FU+EGCG组作用中基因Hras、MDR1表达分别下调3.21、3.74倍。结论 EGCG对人肝癌耐多药细胞Bel-FU具有一定逆转作用。

人肝癌细胞2-DE实验技术条件优化

双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）是目前比较蛋白质组学研究中最常用蛋白质的技术,通过利用蛋白质的等电点与分子量特性将蛋白质分离,与质谱技术（mass spectrometry,MS）联用,已被广泛应用于分析细胞或组织样品中整体蛋白质表达的差异情况〔1-2〕。然而实验操作过程中,