人肝细胞癌中OY-TES-1和PKM2的表达及调控关系初探

目的:探讨癌-睾丸抗原OY-TES-1和丙酮酸激酶M2型(PKM2)在人肝细胞癌(HCC)中的表达,并分析OY-TES-1对PKM2表达的影响。方法:利用LinkedOmics数据库筛选OY-TES-1表达正相关基因集;使用DAVID数据库对OY-TES-1进行功能富集分析,了解HCC中OY-TES-1潜在的生物学功能,寻找功能相关基因;通过GEPIA数据库分析和实时荧光定量PCR(qPCR)实验检测,探讨OY-TES-1和功能相关基因在HCC中的表达及临床意义;干扰HCC细胞株中OY-TES-1的表达,qPCR和Western blotting检测OY-TES-1功能相关基因的表达变化。结果:LinkedOmics数据库筛选获得1001个与OY-TES-1表达正相关的基因集;功能富集结果显示,OY-TES-1可能通过PKM2参与HCC细胞多糖合成、脂代谢、碳水化合物代谢等信号通路。GEPIA数据库分析显示,HCC组织中OY-TES-1和PKM2的表达显著高于正常肝组织,两者表达呈正相关关系(r=0.3;P<0.001);qRT-PCR证实OY-TES-1(癌组织:0.58±0.95 vs.癌旁组织:0.36±0.61,P<0.05)和PKM2(癌组织:0.14±0.17 vs.癌旁组织:0.08±0.14,P<0.05)在HCC组织中均为高表达,两者的表达呈正相关关系(r=0.482,P<0.001);尚未发现OY-TES-1和PKM2的表达与HCC患者临床参数相关。在HepG2和BEL-7404细胞株中干扰OY-TES-1表达,PKM2的mRNA和蛋白表达随之明显下调。结论:OY-TES-1和PKM2均高表达于HCC,且两者具有较强的表达相关性;HCC中OY-TES-1能够影响PKM2的表达。

肝癌细胞miR-326介导的ACRBP转录抑制的研究

目的:探究miR-326在人肝癌细胞株HepG2中对ACRBP表达的潜在调控作用。方法:运用TargetScan、miRanda和miRDB三个在线基因预测工具预测miR-326与ACRBP 3’UTR之间的保守结合位点;双荧光素酶报告系统分析ACRBP3’UTR保守结合位点突变后对miR-326与ACRBP结合能力的影响;通过慢病毒转染的方法获得稳定高表达miR-326的HepG2肝癌细胞株;利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blotting检测miR-326上调对ACRBP mRNA和蛋白表达的影响。结果:在人肝癌细胞株HepG2中,miR-326可结合于ACRBP mRNA 3’UTR的保守位点,并抑制该基因mRNA翻译,从而抑制ACRBP的表达。结论:miR-326在HepG2中负向调控ACRBP的表达。