昆明小鼠心室肌细胞分离方法及动作电位、L型钙通道电流记录

目的 探讨耐钙昆明小鼠心室肌细胞的急性分离方法及动作电位、L型钙通道电流的记录。方法 采用三步灌流法，首先灌流无钙台氏液，再换成含Ⅱ型胶原酶0.1 mg·mL^-1、胰蛋白酶0.01 mg·mL^-1、牛血清白蛋白0.2 mg·mL^-1的无钙台氏液灌流，消化液灌流期间，每隔5 min加入20 mL 的20 mmol·L^-1 CaCl2，以观察流出液是否有单个心肌细胞来判断消化终点，最后灌流含1 mg·mL^-1牛血清白蛋白的KB液，采用全细胞膜片钳记录方式记录动作电位及L型钙通道电流。结果 获得80%-90%杆状心肌细胞，复钙后，仍有60%细胞保持静止，细胞表面干净整洁，折光性强，边缘和横纹清晰，立体感强，获得60%左右的耐钙心室肌细胞，并记录到典型的动作电位、L型钙通道电流。结论 该分离方法分离的细胞具有耐钙性和正常电生理特性。