CD47及其配体在孕期弓形虫感染小鼠中的表达

目的观察孕早期弓形虫感染小鼠中分化簇CD47及其配体信号调节蛋白α(SIRPα)和血小板反应蛋白1(TSP-1)在孕中、晚期的动态表达。方法以C57BL/6J小鼠(6~8周龄)构建孕早期弓形虫感染小鼠模型,将孕鼠随机分成正常对照组和感染组,每组10只。感染组孕鼠于孕6.5 d(Gd6.5)时腹腔注射150个弓形虫速殖子,正常对照组孕鼠同一时间腹腔注射等体积生理盐水。于Gd12.5、Gd18.5时,收集各组孕鼠子宫和胎盘组织,并记录妊娠状态结局。通过苏木精-伊红(HE)染色观察两组孕鼠子宫、胎盘组织Gd12.5和Gd18.5时病理损伤,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα、TSP-1、主要表面抗原1(SAG1)及γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、IL-4和IL-13mRNA表达水平,采用免疫组织化学技术检测CD47、SIRPα和TSP-1在孕鼠子宫、胎盘组织中的表达水平。结果与正常对照组相比,感染组孕鼠孕期出现弓背、耸毛、颤栗和精神萎靡状态,个别出现阴道流血和流产等现象。HE染色结果显示,感染组孕鼠子宫、胎盘组织均出现不同程度炎症细胞浸润、淤血和坏死等病理损伤。Gd12.5和Gd18.5时,感染组孕鼠流产率均较对照组升高(χ^(2)=20.405、28.644,P均<0.001)。qPCR检测结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα、TSP-1、SA G1、INF-γ、IL-2、IL-4和IL-13表达水平差异均有统计学意义[F’(F)=37.511、29.337、97.343、53.755、67.188、21.145、8.658、13.930,P均<0.001];与对照组相比,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP-1表达水平升高(P均<0.01),而Gd18.5时表达降低(P均<0.001);Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中均有SA G1表达(P均<0.01);此外,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中INF-γ和IL-2表达水平均升高(P均<0.001),IL-4和IL-13表达下降(P均<0.001)。Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠子宫组织中CD47、TSP-1、SAG1、INF-γ、IL-2、IL-4和IL-13表达水平差异均有统计学意义[H(F’、F)=14.951、25.977、18.711、48.595、39.318、14.248、15.468,P均<0.01];与正常对照组相比,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中CD47和TSP-1表达水平均升高(P均<0.01),但SIRPα表达无变化(P>0.05);Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中均有SAG1表达(P均<0.01);Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中INF-γ和IL-2表达水平均升高(P均<0.001),IL-4和IL-13表达水平下降(P均<0.001)。相关性分析显示,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47表达水平与IFN-γ(r_(s)=0.735)、IL-2(r_(s)=0.655)表达水平呈正相关(P均<0.05),与IL-4(r_(s)=-0.689)、IL-13表达水平(r_(s)=-0.795)呈负相关(P均<0.05);Gd18.5时胎盘组织中CD47表达水平与IFN-γ表达水平(r_(s)=-0.745)、IL-2(r_(s)=-0.816)呈负相关(P均<0.05),与IL-4(r_(s)=0.704)、IL-13表达水平(r_(s)=0.802)呈正相关(P均<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP-1均呈弱表达;Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP-1呈强表达,子宫组织中CD47和TSP-1呈强表达。结论孕早期弓形虫感染可致小鼠孕中、晚期母胎界面出现CD47及其配体SIRPα和TSP-1异常表达,可能与虫体在母胎界面免疫逃逸有关。