肝癌细胞HepG2与树突状细胞融合瘤苗体外免疫效应的实验观察

目的制备HepG2细胞与树突状细胞（DC）融合瘤苗，检测其体外诱导的特异性抗肝癌细胞HepG2的免疫效应。方法以密度梯度离心法分离健康志愿者外周血中的单个核细胞（PBMC），以重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL-4）体外诱导培养DC，同时利用重组人白细胞介素2（rhIL-2）培养获得同源T淋巴细胞；采用聚乙二醇（PEG）诱导DC和HepG2融合，免疫荧光染色观察融合细胞状态，并通过流式细胞术检测融合率；使用ELISA法检测融合细胞分泌白细胞介素12（IL-12）的能力，荧光衰减法检测融合细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力；采用ELISPOT法检测融合细胞诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTL）释放干扰素（IFN-γ）的能力；采用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测融合细胞刺激产生的CTL体外特异性杀伤HepG2肝癌细胞的效果。以单纯DC、HepG2和DC混合细胞（mix DC, mDC）作为对照。结果HepG2/DC融合瘤苗体外融合率为54.5%，融合瘤苗表面高表达DC成熟分子，分别为HLA-ABC 96.7%，HLA-DR 94.5%, CD80 93.2%, CD83 90.4%，CD86 95.1%，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）；融合瘤苗刺激T淋巴细胞增殖能力显著强于对照组（P〈0.01），其分泌IL-12的水平也高于对照组（P〈0.05）；融合瘤苗诱导的CTL分泌IFN-γ的能力显著增强，特异性CTL在效靶比为30∶1和100∶1时对HepG2的杀伤率为（31.4±2.4）%和（57.6±7.3）%，比对照组杀伤能力强（P〈0.01）。结论HepG2细胞与DC能够成功融合，融合细胞能够有效提呈HepG2抗原，诱导T淋巴细胞在体外产生针对HepG2细胞的特异性免疫反应。