原位杂交技术鉴定马尔尼菲青霉

目的 探讨原位杂交技术 (ISH)特异性检测马尔尼菲青霉 (Pm)感染组织标本的可行性。方法 以Pm的rDNA区间种特异性序列作为特异性探针 ,通过聚合酶链反应 (PCR)扩增合成并以地高辛标记 ,与 12例临床确诊的Pm感染组织标本中的靶DNA杂交。结果 12例Pm感染标本中全部阳性 ,其它种属真菌感染组织均为阴性。结论 ISH技术可以灵敏、特异地检测出组织中的Pm ,适用于今后临床组织标本中Pm感染的检测。

血清总胆汁酸、IV型胶原及层粘连蛋白联合检测在肝纤维化诊断中的价值

目的 :探讨血清总胆汁酸 (TBA)、 型胶原及层粘连蛋白 (L N)联合检测在肝纤维化诊断中的价值。方法 :采用 EL ISA双抗体夹心法测定血清 型胶原及 L N、全自动酶法测定血清 TBA。结果 :肝硬化组血清 TBA、 型胶原及 L N水平较正常组明显升高 (P <0 .0 1) ,肝癌组及肝炎组升高不及肝硬化组。结论 :肝硬化组血清 TBA与 型胶原及 L

转TNF-α基因肿瘤浸润淋巴细胞的构建及其生物学特性的研究

目的 :用肿瘤坏死因子 (Tum or necrosis factor- α,TNF- α)基因转染人肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 (Tumor infiltratinglym phocyte,TIL) ,构建转基因 TIL,对其生物学特性进行研究 ,为肝癌基因治疗奠定基础。方法 :用逆转录病毒载体将 TNF- α基因导入人肝癌肿瘤浸润淋巴细胞 ,构建一种新型的抗肿瘤效应细胞 -转基因 TIL。对转基因 TIL 的增殖能力和细胞表型进行检测 ,用 RT- PCR检测目的基因的表达 ,TNF- α试剂盒检测 TNF- α分泌量 ,用 MTT法检测转基因 TIL 体外抗肿瘤活性。结果 :转基因 TIL 的增殖活性及细胞表型与 IL- 2活化的 TIL 相似 ,转基因 TIL 可持续表达 TNF- α,其分泌量每 2 4 h达 370 pg/5× 10 5cells。转基因 TIL 对肝癌细胞株 BEL74 0 4具有较高的杀伤活性。结论 :转基因 TIL 维持较高的稳定性 ,可持续表达TNF- α,具有良好的体外抗肿瘤作用 。

转基因细胞毒性T淋巴细胞的生物学特性及其对荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用(英文)

背景肿瘤患者体内的抗肿瘤免疫受到抑制。增强细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)的活性是提高过继免疫治疗效果,促进肿瘤康复的有效途径之一。目的对转导肿瘤坏死因子(TNF-α)基因的CTL的生物学特性及抗肿瘤活性进行研究,探讨细胞因子基因疗法和过继免疫治疗肿瘤的新途径。设计随机区组实验研究。地点和对象实验在广西医科大学医学实验中心完成。从人肝细胞癌组织中分离淋巴细胞,用BEL7404和IFN-г诱导得到CTL。BALB/c裸小鼠28只,雄性,4～6周龄,体质量18～20g,购自北京医科大学实验动物科学部(SPF级,合格证书医动字第01-3048号)干预用重组反转录病毒载体介导对CTL进行TNF-α基因转导。于每只裸鼠右前肢腋窝皮下注射注射BEL7404,建立荷瘤裸鼠模型,28只裸鼠按体质量分为4组,每组7只。观察转基因CTL对肿瘤原位(右前肢腋窝)及异位(左前肢腋窝皮下)注射治疗效果,分别用生理盐水注射治疗作对照。主要观察指标①检测TNF-α基因转导前后CTL的生长形态,增殖能力,TNF-α分泌量、细胞表型。②体外不同作用时间和效靶比浓度对BEL7404的杀伤效应。③各实验组的肿瘤生成时间,生长速度及肿瘤生成率。结果转基因CTL的生长形态、增殖活性及细胞表型与CTL相似,但具有持续、高效表达TNF-α的能力。

转基因CTL的构建及其生物学特性的研究

目的 :构建TNF α基因转染的CTL ,并对其生物学特性进行研究。方法 :用重组逆转录病毒载体介导将TNF α基因导入CTL ,构建转基因CTL。检测其增殖能力 ,TNF α分泌量、细胞表型 ,观察其对BEL74 0 4的体内、外抗肿瘤活性。结果 :转基因CTL的形态、增殖活性及细胞表型与CTL相似。但具有高效表达TNF α的能力 ,72h表达量为 4 10pg mL。转基因CTL对BEL74 0 4具有较高的体外杀伤作用 ,其杀伤活性与作用时间及效靶细胞比正向相关。转基因CTL对荷瘤裸鼠过继免疫后 ,移植瘤的生成延迟、生长减慢 ,成瘤率降低。结论 :转基因CTL的构建为肿瘤过继免疫治疗提供新型的效应细胞 。

广西新生儿胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因Gly71Arg突变的研究

目的 探讨广西新生儿迁延性黄疸与胆红素 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 (UGT1A1,B UGT)基因Gly71Arg突变的关系。方法 采用常规方法提取广西 2 5例病因不明的迁延性黄疸新生儿及 6 0例正常健康儿DNA ,用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增UGT1A1第 1外显子 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定产物 ,用等位特异性寡核苷酸探针杂交法 (ASO)检测基因Gly71Arg突变。选部分经ASO检测正常和突变的PCR产物进行DNA测序。结果 2 5例迁延性黄疸新生儿中 15例UGT1A1基因存在Gly71Arg错义突变 ,即第 2 11位核苷酸有G→A点突变 (G2 11A) ,使第 71位密码子GGA变成AGA ,相应编码的甘氨酸变成精氨酸。 13例为杂合子 ,2例为纯合子 ,等位基因频率 0 34。 6 0例正常健康儿Gly71Arg等位基因频率 0 0 8。迁延性黄疸新生儿等位基因频率较正常健康儿显著增高 (P <0 0 0 0 1)。送检样品测序结果与ASO结果一致。结论 广西存在UGT1A1基因Gly71Arg突变。广西迁延性黄疸患儿与UGT1A1基因Gly71Arg突变密切相关 。