铜绿假单胞菌对烟曲霉菌不同时期的抑制作用观察

目的研究铜绿假单胞菌对烟曲霉菌不同时期(孢子期、菌丝期、早期生物被膜)的作用机制,为临床相关混合微生物感染的治疗提供依据。方法体外建立野生型铜绿假单胞菌(PAO1)分别作用于临床分离的烟曲霉菌孢子期、菌丝期及早期生物被膜,观察三者间差异。用结晶紫染色法半定量检测生物被膜形成能力;二甲氧唑黄(XTT)比色法评价生物被膜体外生长动力学;电子显微镜观察生物被膜超微结构。结果野生型铜绿假单胞菌对烟曲霉孢子的抑制作用明显强于对烟曲霉菌丝的抑制作用,而对烟曲霉早期生物被膜无抑制作用,且三者间差异均有统计学意义(P<0.05)。镜下见野生型铜绿假单胞菌与烟曲霉孢子组几乎不能形成生物被膜,且烟曲霉孢子不能形成完整菌丝结构。其与烟曲霉菌丝期混合组可见混合生物被膜形成,且烟曲霉菌丝可见生长,但相对于野生型铜绿假单胞菌与烟曲霉早期生物被膜组比较,其菌丝密度明显低于后者。结论野生型铜绿假单胞菌对于烟曲霉孢子期的抑制作用最明显,对烟曲霉早期生物被膜无抑制作用,对烟曲霉菌丝期的抑制作用介于两者之间且能够形成混合生物被膜。

胰岛素对胞内不同水平环二鸟苷酸铜绿假单胞菌运动能力的影响

目的探讨胰岛素对胞内环二鸟苷酸(Cyclic diguanosine-5'-monophosphate,c-di-GMP)浓度表达不同的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)运动能力的影响,为进一步研究胰岛素对胞内c-di-GMP浓度表达不同的PA在糖尿病小鼠模型中的作用提供基础。方法按胞内c-di-GMP表达量不同分为对照野生PAO1组、胞内c-di-GMP低表达PAO1/Plac-yhjH组和胞内c-di-GMP过表达PAO1/ΔwspF组。将三种菌株接种于无胰岛素的琼脂中,测定运动环直径以评估不同菌株的泳动、群集和蹭动能力。然后再将三种菌株接种于分别含有200nU/ml、200μU/ml和200mU/ml浓度胰岛素的琼脂中,分析不同菌株在胰岛素干预后其运动能力的变化。结果在无胰岛素干预下,与PAO1组相比,PAO1/ΔwspF组运动能力明显被抑制,相反PAO1/Plac-yhjH组的运动能力则稍提高。在PAO1、PAO1/Plac-yhjH菌株中,与热变性胰岛素对照组相比,含有200mU/ml、200μU/ml、200nU/ml三种胰岛素浓度组的泳动、群集运动直径都明显变小,差异具有统计学意义(P<0.05),且在三个浓度之间菌株的泳动、群集能力无统计学差异,其影响与胰岛素无剂量依赖性。结论胰岛素能抑制PA野生菌株及细胞内c-di-GMP低表达菌株的泳动、群集能力,且与胰岛素无剂量依赖性。