GDF15对氧化应激诱导血管内皮损伤和血管生成的调节作用

目的:探讨生长转化因子15(GDF15)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的内皮细胞损伤和血管生成的影响。方法:用H_(2)O_(2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤模型,分为对照组、H_(2)O_(2)组、小分子干扰RNA(siRNA)靶向沉默GDF15(si-GDF15)组和si-GDF15+H_(2)O_(2)组。采用CCK-8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)的浓度和凋亡率,划痕实验检测细胞迁移能力,小管形成实验检测内皮细胞成管能力。结果:与对照组比较,H_(2)O_(2)组细胞ROS浓度和凋亡率显著增高,细胞增殖、迁移和小管生成能力显著降低(均P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,si-GDF15+H_(2)O_(2)组细胞ROS和凋亡率显著增高,细胞增殖、迁移和小管生成能力显著降低(均P<0.05)。结论:沉默GDF15能增强H_(2)O_(2)诱导的内皮损伤,并抑制HUVECs的血管形成能力。

基于铁死亡调节探讨秦皮素对动脉粥样硬化的作用及机制研究

目的:基于秦皮素对铁死亡的调节作用,进一步探讨秦皮素对动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:通过高脂饮食构建Apo E敲除(Apo E^(-/-))小鼠动脉粥样硬化模型,随机分为正常饮食组(NC组)、高脂饮食组(HFD组)、铁死亡抑制剂组(Fer-1组)、秦皮素组(Fra组)和萝卜硫素组(Sul组);用过氧化氢(H_(2)O_(2))干预人原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)构建体外AS模型,随机分为NC组、H_(2)O_(2)组、Fer-1组、Fra组和Sul组。油红O染色用于评估AS病变大小,血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和总胆固醇(TC)测定试剂盒用于评估脂质代谢。细胞计数实验(CCK-8)用于检测秦皮素毒性作用和细胞增殖能力,铁、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)试剂盒用于测定小鼠主动脉组织和HUVECs中铁死亡水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)和蛋白免疫印迹(western blotting)实验主要通过检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和血红素加氧酶1(HMOX1)表达水平以评估秦皮素的抗铁死亡作用。结果:秦皮素能够减轻AS小鼠血清脂质沉积和主动脉粥样硬化,并且保护HUVECs免受H_(2)O_(2)诱导的细胞死亡。与Fer-1组结果一致,秦皮素在体内和体外均能抑制促铁死亡生物标志物铁和MDA表达水平,上调抗铁死亡生物标志物GSH和GPX4表达水平。此外,秦皮素减轻了H_(2)O_(2)诱导的HUVECs发生铁死亡,而这种保护作用能被HMOX1特异性激活剂萝卜硫素所逆转。结论:秦皮素可能通过下调HMOX1抑制铁死亡,从而减轻AS。

风湿性心脏病大鼠血清对内皮细胞间充质转化的影响

目的:探讨风湿性心脏病(RHD)大鼠的血清对内皮细胞发生内皮间充质转化(EndMT)的影响。方法:先使用重组人转化生长因子-β1(TGF-β1)干预人原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)以观察其发生EndMT的情况,分为空白组和TGF-β1组;再使用大鼠血清和TGF-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)抑制剂SB431542干预HUVECs,分为control组、RHD组和RHD+SB431542组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(western blotting)实验检测内皮细胞标志分子血管内皮细胞钙粘连蛋白(VE-cadherin)和间质细胞标志分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平以观察细胞发生EndMT的情况。结果:与control组比较,RHD组的细胞增殖、迁移能力显著升高(P<0.05),且VE-cadherin蛋白的表达量降低,而α-SMA蛋白的表达量升高(P<0.05),表明发生了EndMT;而与RHD组比较,RHD+SB431542组的细胞增殖、迁移能力显著降低(P<0.05),且VE-cadherin蛋白的表达量升高,而α-SMA蛋白的表达量降低(P<0.05),表明EndMT被显著抑制。结论:RHD大鼠的血清高表达TGF-β1,可以诱导HUVECs发生EndMT,且能被SB431542抑制,表明在RHD大鼠血清促进内皮细胞间充质转化过程中,TGF-β1发挥着重要作用。