重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白转染对兔脂肪干细胞生长增殖及成脂分化的影响

目的：探讨携带绿色荧光蛋白的腺病毒载体（Ad—GFP）转染兔脂肪干细胞（rADSCs）后对其生长增殖及成脂分化的影响。方法：取新西兰大白兔（1．5～2．0kg、8～12周龄）腹股沟皮下脂肪垫3mL，采用贴壁法体外分离培养rADSCs。取第3代rADSCs细胞分为Ad—GFP转染组（A组）和未转染的对照组（B组），流式细胞术检测Ad-GFP转染rADSCs的效率。比色法检测两组细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性，四氮唑复合物（XTT）比色法检测rADSCs的增殖情况。细胞成脂分化14d后行油红O染色，检测脂肪细胞分化率及细胞内脂滴含量。结果：两组rADSCs表面标志物CD29、CD44、CD90、CD105阳性表达率均在95％以上。不同MOI值rADSCs转染效率不同，当MOI值为10、30、50、100时转染效率分别为11．2％、42．7％、95．3％、97．1％。Ad—GFP转染后的rASCs贴壁后呈梭形，细胞质丰富，保持了良好的正常形态。两组rASCs培养上清液中LDH含量及rADSCs增殖情况比较，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。两组细胞分化率和细胞内脂滴含量比较，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论：Ad—GFP转染rADSCs后，GFP可在细胞内稳定表达，对细胞无明显毒性作用，不影响rADSCs的生长、增殖及成脂化能力，是一种理想的脂肪干细胞示踪标记方法。

CD54^+和CD54^-脂肪干细胞的成脂分化能力

背景:研究表明,脂肪干细胞具有多向分化潜能,但是其向成熟脂肪细胞分化的效率仍较低,只有30%-40%。因此,如何提高脂肪干细胞的成脂分化能力是软组织再生研究过程中需要解决的关键科学问题。目的:观察兔脂肪干细胞表面标志物CD54的表达与其成脂分化能力的关系,并探讨同一诱导剂对CD54^+和CD54^-兔脂肪干细胞成脂分化的影响。方法:取新西兰大白兔(8-12周龄)腹股沟皮下脂肪垫3 mL,采用贴壁法体外分离培养兔脂肪干细胞并行多向分化诱导及细胞表型标志物鉴定。取第3代细胞经免疫磁珠分选得到CD54^+兔脂肪干细胞和CD54^-兔脂肪干细胞,经成脂诱导14d后行油红O染色,检测成熟脂肪细胞的密度及细胞内脂滴含量。RT-PCR检测脂肪干细胞成脂分化相关基因表达水平。结果与结论:(1)兔脂肪干细胞具有间充质干细胞特性,可向成熟脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞表型分化,细胞表面标志物CD29、CD44、CD49d、CD54、CD73、CD90和CD105表达均为阳性,而CD31、CD34和CD45表达阴性;(2)成脂诱导第14天,CD54^+兔脂肪干细胞分化为成熟脂肪细胞的密度和细胞内脂滴含量均高于CD54^-兔脂肪干细胞,差异均有显著性意义(P<0.05);(3)成脂诱导14 d后,CD54^+兔脂肪干细胞成脂相关基因ADD1、C/EBPα、PPARγ的mRNA表达水平明显高于CD54^-兔脂肪干细胞,差异均有显著性意义(P<0.05);(4)结果表明,CD54^+脂肪干细胞具有高成脂分化能力。