硕士研究生参与组织胚胎学教学的效果评价

自2004年开始，本科室对硕士研究生作为助教参与教学进行规范化管理，明确其参与的时间及所需完成的具体教学内容，并对其参与教学的效果进行评价，此评价主要通过问卷调查来完成。调查对象：2004、2005、2006年级的五年制临床医学本科生。共发放调查问卷600份，回收552份，回收的问卷全部有效。方法：调查使用自行设计的问卷，集中发放，当场填写、回收。结果：（1）在工作态度方面，有98％的同学认为研究生助理教师的工作态度是认真的，2％的同学认为助理教师的工作态度不够认真。

3D模型制作在《组织学与胚胎学》实验教学中的实践

《组织学与胚胎学》的学习目标是让医学生观察切片,掌握器官、组织结构、细胞的正常情况。但仅通过显微镜观察器官或者组织切片,没有实践动手构建器官或结构,缺少从二维平面到三维空间思维这个循序渐进的过程,学生的视知觉思考能力和“在图像中发现意义的能力”非常薄弱。本研究为学生提供开展设计、构建、创造、实现等自主探究活动的“创客空间”,将“虚实结合”“做中学”的科学精神与《组织学与胚胎学》实践教学结合。

心肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景:干细胞具有"环境依赖性分化"特性,以心肌组织裂解液模拟心肌微环境诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞方向分化的研究甚少。目的:观察心肌组织裂解液对大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞方向分化的影响。方法:选用生长良好的第2代骨髓间充质干细胞,加入诱导液连续培养5周,连续观察细胞形态学特征的变化规律,采用α-Actin进行免疫细胞化学染色观察干细胞是否向肌细胞方向分化,收集诱导后的细胞行苏木精-伊红染色观察是否存在闰盘,并通过电镜观察其超微结构。结果与结论:加入诱导液后大部分细胞呈"竹节样",α-Actin免疫细胞化学染色阳性,表明间充质干细胞向肌细胞方向分化;苏木精-伊红染色可见闰盘,透射电镜下见排列整齐明暗相间的肌丝,扫描电镜下可见胞浆内有纤维状结构,说明"竹节样"细胞具有心肌细胞的典型形态结构特点。连续诱导12d多个区域出现成片的、具有自律性搏动的多核肌管结构。心肌组织裂解液可模拟心肌细胞的微环境,诱导骨髓间充质干细胞分化为具有典型形态结构特征和相应功能活动的心肌样细胞。

应用15个STRs揭示广西4个少数民族的遗传关系(英文)

为研究广西仫佬、毛南、苗和瑶族的15个短串联重复序列(STR)基因座的遗传多态性,探讨这4个民族群体的遗传差异和进化关系。通过PCR-STR及测序仪,检测了广西4个民族766例无关个体的15个STR位点基因频率的分布并比较各民族间的差异,计算遗传学参数、遗传距离和构建系统进化树。结果显示:仫佬、毛南、苗和瑶族的15个STR位点分别共检出135,134,148,145种等位基因和424,432,445,436种基因型;各民族的平均Ho>0.7,累积DP,EPP和PIC均在0.99999以上;毛南族和苗族,瑶族和其他民族间在多数位点的基因频率分布上存在显著差异,而仫佬族和毛南族或苗族间在多数位点上不存在差异;4个民族在进化树上被分为两组,仫佬族和毛南族聚成一组,苗族和瑶族聚成另一组。说明广西仫佬、毛南、苗和瑶族的15个STR基因座具有高度的遗传多态性,实用价值较高,是一组可用于人类群体遗传学、法医学个体识别和亲子鉴定等研究的有力工具;4个民族STR的遗传差异性和遗传关系与他们的语言文化和民族历史基本一致。

成纤维细胞生长因子对组织损伤保护作用研究的方法学

成纤维细胞生长因子(FGF)是一类在体内广泛分布的生长因子,对中胚层和神经外胚层来源的组织细胞普遍具有促有丝分裂和损伤保护作用,可促进细胞的分裂、增殖和分化,并对多种组织损伤具有修复作用。本文旨在总结FGF对组织损伤保护作用研究中已用过的或可借鉴的实验方法。

胚胎心脏显微解剖及扫描电镜标本的制作方法

胚胎心脏微小,组织脆弱,要观察其内部纪构的变化较为困难,下面结合找们近几年来在研究胚胎心脏发生过程中所取得的一些经验,介绍胚胎心脏显微解剖及扫描电镜标本的制作方法。

孕激素拮抗剂对早期胚胎主要器官影响的形态学观察

目的：为了进一步了解孕激素拮抗剂米非司酮对早期胚胎主要器官发育有无影响。方法：对停经４０～４９ｄ的孕妇，进行米非司酮药流，收集排出的孕囊，用质量浓度为１０％的福尔马林液固定，常规切片、染色。光镜观察。结果：观察胚胎心脏、肝脏、肾脏及绒毛结构，与对照组同期标本相比较无差异。结论：米非司酮对早期胚胎主要器官结构无明显影响。

实验性2型糖尿病鼠眼和肾组织的慢性微血管病变研究

目的：研究实验性2型糖尿病（T2DM）鼠在持续高血糖、高血脂状态下眼、肾组织结构的病理变化和特点。方法：①采用小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素（STZ），同时给高热量高脂肪饲料喂养；②每天观察体重、尿量及眼变化，每2d测空腹血糖（FBG），成模后测空腹胰岛素（FINS）及血脂；③白内障出现后处死，取眼、肾在光镜和电镜下作组织结构观察；④肾小球细胞计数分析。结果：①T2DM组：成模后平均FBG（14．46±1．37）mmol／L，FINS（30．78±5．89）μU／ml，体重（494．26±72．73）g。对照组：FBG（5．17±1．36）mmol／L，FINS（19．59±4．89）μU／ml，体重（373．2±30．45）g；②T2DM组：在40～90d先后出现白内障。组织学检查，全眼球组织结构均有改变，虹膜、睫状体和视网膜毛细血管增生扩大，基膜增厚，睫状上皮退变。晶状体为退行性变。肾组织见肾小球多呈弥漫性硬化，肾小球细胞计数增多达80．9％，基质蓄积，基膜增厚，肾小球囊腔变窄或消失，系膜细胞细胞器增多，问质有胶原纤维素，足细胞次级突起变形或融合。结论：T2DM鼠在持续高血糖和高血脂状态下，眼球和肾组织出现糖尿病眼病（DO）及糖尿病肾病（DN）的改变，并且两者的病理改变基本是同步的。

广西苗族男性青少年学生手的皮纹学研究

对广西融水县父母均是苗族，表型正常的男性青少年学生进行了手的皮纹学研究。结果见指端纹型以斗型最多，占５３．１０％；尺箕次之，占４３．３０％；桡箕较少，占２．４５％；弓型最少，仅占１．１５％。总指纹嵴计数平均为１４６．４７条，ａ－ｂ纹嵴计数两手平均为３７．９５条。ａｔｄ角两手平均为４１．６４°。ｔ比值两手平均为１６．９７％。主线末端终止区，左手主线多起向低数字区，右手主线多走向高数字区。掌部真实花纹出现率依次为第Ⅳ指间区７６．７５％；小鱼际区１４．７５％；第Ⅲ指间区１４．００％；第Ⅱ指间区３．００％；大鱼际／第Ⅰ指间区１．５０％。掌褶类型出现率依次为常见型７２．５０％；过渡Ⅰ型１２．７５％；过渡Ⅱ型７．００％；通贯型６．５０％；悉尼型１．２５％。

细胞外基质在胚胎发育中的调控作用

细胞外基质包括氨基己糖多糖、糖蛋白、胶原等生物大分子，它们在胚胎发育、形态发生等过程中起着极其重要的作用。本文对细胞外基质的分类、细胞外基质在胚胎发育中与细胞行为的关系。

siRNA沉默GC结合因子2表达对BEL-7404细胞增殖和凋亡的影响

目的 GC结合因子2(GC binding factor 2,GCF2)是一种转录抑制因子,能抑制富含GC序列启动子的基因转录。GCF2在BEL-7404等肝癌细胞株的高表达可能与肝癌的发生及发展有关。文中通过靶向GCF2的GCF2-siRNA序列沉默GCF2表达,观察GCF2对人肝癌细胞株BEL-7404增殖及凋亡的影响。方法将实验细胞分为GCF2 siRNA转染组(转染GCF2-siRNA)、阴性对照组(转染无关序列)、脂质体对照组(只加Lipofectamine 2000)、常规培养对照组(不加转染试剂和siRNA序列)共4组。使用Lipofectamine 2000将GCF2-siRNA转染BEL-7404细胞,Western blot检测转染后48 h GCF2蛋白表达水平,用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)-8和AnnexinV/PI-FITC双染流式细胞术检测细胞增殖和凋亡变化。结果 GCF2-siRNA可有效下调GCF2表达、抑制BEL-7404细胞的增殖,细胞凋亡率增加。与各对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GCF2可促进肝癌细胞株BEL-7404的增殖,抑制该细胞凋亡,提示GCF2通过对肝癌细胞增殖和凋亡的影响参与肝癌的发生、发展。

肝癌相关抗原kinectin基因片断的重组表达

目的:研究肝癌相关抗原kinectin基因片断的体外重组表达方法,为该抗原的生产奠定基础。方法:用PCR法扩增肝癌相关抗原kinectin的基因片断,将目的基因插入表达载体pMAL-C2上麦芽糖结合蛋白(MBP)基因下游的多克隆位点,转化DH5α菌。通过蓝白斑筛选、PCR鉴定、内切酶鉴定及DNA测序筛出正确的重组子,并用其转化TB1菌。用IPTG对重组的TB1工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定。结果:kinectin基因片断正确插入pMAL-C2载体的多克隆位点,用IPTG对工程菌进行诱导,可见目的蛋白条带出现。结论:pMAL-C2载体可用于对肝癌相关抗原kinectin的体外基因重组表达。

肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选

目的筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株,为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的可能作用奠定基础。方法选择4种人肝癌细胞株(BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703)及1种成人正常肝细胞株(HL-7702),培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后,采用免疫细胞染色技术和Western blot的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株。结果免疫细胞染色显示,GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达。GCF2蛋白在肝癌细胞BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703的表达要强于正常肝细胞HL-7702,其中以BEL-7404的表达量最高。通过Western blot检测,BEL-7404的GCF2相对表达量为0.875±0.134,较其他细胞株高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BEL-7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高,可以作为下一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料。

肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体制备、鉴定及初步应用

目的制备本课题组报告的肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法以本课题组前期构建的人MBP-Kinectin融合片段重组质粒为基础,原核表达和亲和层析大量纯化MBP-Kinectin融合蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体;用间接ELISA法测定抗体效价,用Western blot鉴定抗体的特异性。同时用Kinectin多克隆抗体检测Kinectin在正常成人肝细胞HL-7702和人肝癌细胞株SMMC-7721内的表达。结果通过免疫新西兰兔获得抗Kinectin抗体,ELISA测定纯化的Kinectin抗体效价最高为1∶12 800,Western blot结果显示Kinectin抗体具有较好的特异性。免疫细胞化学和western blot检测发现Kinectin蛋白在肝癌细胞株内的表达显著高于正常成人肝细胞株。结论制备的抗Kinectin抗体具有较高的效价和特异性,能满足Western blot和免疫细胞化学检测Kinectin蛋白的要求,为进一步深入研究Kinectin在肝癌发生发展中的作用奠定基础。

大鼠视网膜Müller细胞的培养与鉴定

目的：仿照前人建立的方法，优化SD大鼠视网膜Müller细胞体外培养的技术和方法，为后续相关研究建立实验室条件。方法：使用胰蛋白酶消化的方法分离新生SD大鼠视网膜Müller细胞，以DMEM为培养基体外培养，光镜观察。采用电镜观察及荧光免疫组织化学染色的方法进行鉴定。结果：培养的细胞贴壁生长，原代细胞胞体狭长，细胞质丰富，折光性好。电镜下可见特征性的中间丝（直径8～10nm），细胞器丰富；荧光免疫组织化学显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和谷氨酰胺合成酶（GS）阳性。结论：酶消化法培养SD大鼠视网膜Müller细胞是一种稳定、可靠的方法。

衰老标记蛋白-30的表达与肝疾病的关系

目的通过检测人正常肝组织、病毒性肝炎组织、肝硬化组织和肝癌(HCC)组织及相应癌旁组织中衰老标记蛋白-30(SMP-30)的表达,探讨SMP-30与肝疾病的关系。方法将本课题组构建的含SMP-30羧基端165个氨基酸的cDNA序列表达质粒,经表达和纯化获得MBP-SMP-30,免疫家兔制备出抗MBP-SMP-30多克隆抗体。采用免疫组织化学SABC法,检测30例人正常肝组织、10例病毒性肝炎组织、49例肝硬化组织和48例人HCC及相应癌旁组织中SMP-30的表达。结果SMP-30定位于肝细胞的细胞质和细胞核,其在HCC癌旁组织中的表达高于另外4种组织,具有显著性差异(P<0.05),且HCC中SMP-30的表达与肿瘤大小和病理分级无关。结论用MBP-SMP-30融合蛋白制备的多克隆抗体可成功检测出人肝细胞中的SMP-30。SMP-30与肝疾病的发生发展有关,其高表达可能是HCC的早期性、保护性事件。

肝细胞癌中NY-SAR-35 NY-TLU-57和NY-ESO-1基因的表达及意义

目的:检测三种癌-睾丸抗原NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因mRNA在广西地区肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达,探讨其作为HCC特异性免疫治疗靶抗原的可能性。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因在63例HCC组织、56例HCC癌旁组织和4例正常肝组织中的表达,随机选择4例RT-PCR阳性产物直接进行DNA序列测定,并将其表达结果与临床病理指标进行统计学分析。结果:所检测的三种基因在4例正常肝组织中无表达;在63例HCC组织中,NY-SAR-35表达率为38.1%(24/63),NY-TLU-57为4.8%(3/63),NY-ESO-1为23.8%(15/63);在56例HCC癌旁组织中,NY-TLU-57和NY-ESO-1无表达,NY-SAR-35的表达率为26.8%(15/56)。基因表达与临床病理指标关系的分析显示,这三种癌-睾丸抗原的表达均与所分析的临床病理指标无关(P>0.05)。结论:癌-睾丸抗原NY-SAR-35、NY-TLU-57和NY-ESO-1基因可特异性的表达于HCC中,其中NY-SAR-35、NY-ESO-1具有一定的表达频率,提示它们有可能作为HCC特异性免疫治疗的靶抗原。

大鼠杏仁体基底外侧核中DA能与GABA能神经元之间突触关系的免疫电镜研究

目的 了解杏仁体中多巴胺 (DA)能神经末梢和γ 氨基丁酸 (GABA)能神经元之间的相互关系、探索两者在精神分裂症中作用的神经解剖学机制。 方法 用免疫电镜双标技术 ,分别以抗DA和抗谷氨酸脱羧酶(GAD、GABA的合成酶 )标记大鼠杏仁体基底外侧核中DA能神经末梢和GABA能神经元 ,在电镜下观察DA能神经末梢和GABA能神经元之间的突触联系。 结果 由DA免疫阳性神经末梢形成的突触中 ,有 4 3%直接或间接形成于DA免疫阳性神经末梢与GAD免疫反应阳性树突结构之间 ,其中单一性突触为 38%、汇聚性突触为 30 %、连续性突触为 2 0 %、末梢间突触样联系为 12 %。另外的 5 7%由DA免疫阳性神经末梢与未标记的神经结构形成 ,其中在未标记的神经元胞体形成 10 %、树突上 82 %、轴突末梢上 8%。由DA免疫反应阳性末梢形成的所有突触均为对称性即抑制性突触。 结论 在大鼠杏仁体基底外侧核中 ,DA能神经末梢系统以对称性突触支配着GABA能中间神经元 ,同时 ,又与核内的谷氨酸能投射神经元形成突触联系 ,并影响其活动。