染尘肺泡巨噬细胞上清液致人胚肺成纤维细胞蛋白谱改变

目的探讨蛋白质组学技术研究二氧化硅粉尘处理的肺泡巨噬细胞(AM)上清液对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)蛋白质表达变化的影响。方法实验组采用二氧化硅处理大鼠AM的培养上清液刺激MRC-5,对照组MRC-5采用等量无粉尘处理的AM培养上清液作用;提取MRC-5总蛋白,进行双向凝胶电泳识别差异表达蛋白,经质谱分析、数据库搜索进行蛋白鉴定。结果对照组MRC-5细胞检测到(410±21)个,染尘组为(398±19)个蛋白点。组间的匹配性较好,染尘上清刺激后35个蛋白斑点发生变化,初步鉴定出数个与氧化应激相关的蛋白:热休克蛋白(HSP27)、Per-oxiredoxinⅡ亚型b、钙网蛋白-3和钙网蛋白-5类似物等。结论应用蛋白质组学方法有助于筛选到经不同处理细胞间的蛋白表达差异,为进一步研究矽肺机制提供分子基础。

口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白谱差异

目的探讨人口腔鳞癌体外培养亲本细胞株KB与耐药细胞株KBV200的蛋白质表达差异。方法在体外培养KB及KBV200细胞株,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI)及蛋白质芯片技术检测KB及KBV200蛋白质谱。结果体外培养的口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株的蛋白质存在差异表达,CM-10芯片共捕获102个蛋白,发现差异峰19个,其中15个差异蛋白在KBV200细胞中高表达,4个差异蛋白在KBV200细胞中低表达。结论SELDI蛋白芯片技术检测口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白质的差异表达方法简便、敏感、重复性好。

HSP70各亚型在染尘体外细胞模型中表达

目的观察染尘巨噬细胞上清液对人胚肺成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)各亚型(HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom)表达的影响。方法采用大鼠巨噬细胞(AMs)和人胚肺成纤维细胞(HELF)构成体外模型,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测二氧化硅粉尘处理AMs24h的培养上清液刺激HELF细胞的HSP70各亚型表达情况。同时用二氧化钛作为阴性对照,以不用粉尘处理的AM培养上清液作为正常对照。结果HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom基因表达与粉尘浓度的相关系数(R)依次为0.931(P<0.01)、0.923(P<0.01)、0.818(P<0.05),呈现明显的剂量-反应关系。结论受染尘肺泡巨噬细胞上清液刺激的人胚肺成纤维细胞HSP70各亚型在转录水平呈表达增加,且可能参与了矽尘致细胞氧化应激过程。

SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术实验条件优化

表面加强激光解析电离-飞行时间质谱（surface en-hanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrom-etry,SELDI-TOF-MS）技术是近年在基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS ）基础上改良发展起来的一种蛋白质分离技术.

EGCG逆转肝癌耐多药差异基因表达

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)逆转人肝癌细胞耐多药的机制,为进一步在基因转录水平上高通量筛选逆转肝癌耐多药天然药物提供一定的参考依据。方法采用人肝癌细胞Bel-7402及其耐5-氟尿嘧啶Bel-FU细胞,甲基四唑蓝法检测耐药Bel-FU细胞的耐多药性及对EGCG进行体外细胞毒性试验;选择与肝癌发生发展相关途径的42个功能基因作为检测基因,采用实时定量PCR微阵列技术检测Bel-7402组、Bel-FU组、Bel-FU+EGCG作用组基因表达;实时定量PCR检测相同条件下处理的基因Hras、MDR1表达变化以验证微阵列技术结果。结果耐药细胞Bel-FU对5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、长春新碱、阿霉素、柔红霉素的耐药指数分别为:89.6、3.9、37.2、16.5、3.7;EGCG对细胞Bel-FU的IC50、IC10值分别为587.4、73.1μg/mL;实时定量PCR微阵列检测结果显示:与Be-7402组比较,Bel-FU组中有5个基因上调;与Bel-FU组比较,Bel-FU+EGCG作用组有5个基因下调,其中有3个基因为Bel-7402组与Bel-FU组之间的差异基因;实时定量PCR验证结果:Bel-FU组中基因Hras、MDR1表达为Bel-7402组中的2.84、2.74倍,与Bel-FU组比较,Bel-FU+EGCG组作用中基因Hras、MDR1表达分别下调3.21、3.74倍。结论 EGCG对人肝癌耐多药细胞Bel-FU具有一定逆转作用。

人肝癌细胞2-DE实验技术条件优化

双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）是目前比较蛋白质组学研究中最常用蛋白质的技术,通过利用蛋白质的等电点与分子量特性将蛋白质分离,与质谱技术（mass spectrometry,MS）联用,已被广泛应用于分析细胞或组织样品中整体蛋白质表达的差异情况〔1-2〕。然而实验操作过程中,