白花丹醌对瘦素刺激人肝星状细胞转化生长因子-β_1表达的影响

目的研究白花丹醌对瘦素刺激体外培养人HSC-LX2TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响。方法体外培养HSC-LX2,瘦素(leptin)刺激24h,各药物与细胞共孵育24h后,采用荧光PCR检测各组TGF-β1 mRNA的表达和免疫组织化学方法检测TGF-β1蛋白表达情况。结果与leptin组比较,白花丹醌各剂量组作用24h后,HSC-LX2细胞中TGF-β1 mRNA的水平明显降低,尤以中、高剂量组明显(P<0.01);免疫组化结果显示白花丹醌各剂量组对HSC-LX2细胞TGF-β1蛋白表达有一定的抑制作用,且作用呈剂量依赖性。结论白花丹醌抗肝纤维化作用机制之一是从mRNA和蛋白水平抑制TGF-β1表达,从而抑制HSCECM的合成,发挥抗肝纤维化作用。

白花丹醌对人肝星状细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:研究白花丹醌对瘦素(Leptin)刺激体外培养人肝星状细胞株HSC-LX2凋亡及相关蛋白表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用的机制.方法:体外培养HSC-LX2,将其分为以下几组:空白对照组、Leptin对照组、秋水仙碱组、2、8、16μmol/L白花丹醌组.瘦素刺激24h,药物与细胞共孵育24h后,应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测细胞凋亡,透射电镜观察HSC-LX2凋亡形态学变化,免疫组织化学法检测HSC-LX2凋亡基因p53、Bax、Bcl-2的蛋白表达.结果:细胞流式术结果显示,白花丹醌作用HSC-LX224h,HSC凋亡率明显增加,白花丹醌8、16μmol/L组和秋水仙碱组HSC凋亡率均显著高于空白对照组和Leptin对照组(5.21±0.41,8.10±0.63,10.1±1.08vs1.40±0.13,2.85±0.21,均P<0.01).透射电镜结果,空白对照组细胞形态清晰,细胞膜、核膜完整,胞质内细胞器清晰,染色质均匀,细胞表面微绒毛;药物组可见少量坏死细胞和许多不同程度的凋亡细胞,体积变小,核膜消失,胞质浓缩,胞质内出现大量空泡,细胞核染色质固缩,可见核碎裂,细胞表面微绒毛消失.免疫组织化学结果显示,受Leptin刺激后HSC-LX2胞质内表达少量的Bax、Bcl-2、P53,可见少量的棕黄色颗粒,经白花丹醌2、8、16μmol/L干预后,HSC-LX2促凋亡基因Bax、P53蛋白表达明显升高,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达显著降低,与Leptin刺激组相比,差异均有统计学意义(Bax:85.24±1.08,86.35±1.12,91.13±1.13vs56.63±0.94;P53:25.32±0.6,38.14±0.71,41.19±0.72vs19.25±0.46;Bcl-2:32.12±0.43,27.71±0.38,21.46±0.46vs44.51±0.56,P<0.05或0.01).结论:白花丹醌能够促进活化的HSC-LX2凋亡,其促HSC-LX2凋亡机制可能与上调P53、Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白有关.