试剂盒法与差速超速离心法所提取的人牙髓细胞外泌体的鉴定与比较

目的:采用试剂盒法以及差速超速离心法提取的人牙髓细胞外泌体(hDPC-DEs),并进行鉴定与比较。方法:培养原代人牙髓细胞(hDPCs)并鉴定,收集hDPCs培养上清,分别采用试剂盒法和差速超速离心法提取hDPC-DEs,在透射电镜下进行形态学观察,利用免疫印记(Western blotting)法对外泌体表面标记蛋白CD9的表达进行检测,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定外泌体表面标记蛋白CD63的浓度。结果:透射电镜下试剂盒法与差速超速离心法所提hDPC-DEs均表现为典型的茶托状双层膜结构,直径在50～120nm,试剂盒组背景杂质较多,差速离心组背景较为清晰。两种方法提取的hDPCDEs特异性标志蛋白CD9均呈阳性表达。试剂盒组外泌体标志蛋白CD63的浓度高于差速超速离心组(P<0.05)。结论:试剂盒法与差速超速离心法均可获得hDPC-DEs,前者操作简便,所提取的hDPC-DEs的浓度较高,但杂质可能比较多。

体外评估hDPCs-PRF复合体内hDPCs的迁移行为

目的:在前期成功构建人牙髓细胞(hDPCs)—富血小板纤维蛋白(PRF)复合体基础上,观察hDPCs在复合体中的迁移能力。方法:采用组织块法分离培养hDPCs,制备hDPCs-PRF复合体,培养7 d、14 d、21 d后行苏木精—伊红(HE)染色,观察hDPCs的形态及迁移行为。结果:初期hDPCs-PRF复合体中,白细胞、牙髓细胞主要存在于白膜层中;随着培养时间的延长,白膜层逐渐溶解消失,白细胞及牙髓细胞沿着复合体边缘游走,hDPCs由原来的椭圆形变成长梭形。培养21 d后,显微镜下可见hDPCs-PRF复合体培养基中大量hDPCs的存在,大部分细胞生长状况良好。结论:hDPC-PRF复合体可缓慢降解并同步释放复合体内的牙髓细胞;hDPCs-PRF复合体中释放的牙髓细胞仍具有继续增殖分化的潜力。

羧基改性的聚酰胺——胺/纳米羟基磷灰石的制备和表征

目的:制备和表征羧基改性的聚酰胺—胺/纳米羟基磷灰石(PAMAM-COOH/n-HAP)复合材料,并探索其合成时的最佳质量比。方法:通过水热合成法制备不同质量比[m(PAMAM-COOH):m(n-HAP)]的PAMAM-COOH/n-HAP复合材料,利用傅里叶变换红外光谱、透射电镜以及热重分析对其化学信息、形貌和PAMAM-COOH结合到纳米羟基磷灰石上的量进行表征。结果:不同质量比[m(PAMAM-COOH):m(n-HAP)]均可成功制备PAMAM-COOH/n-HAP复合材料,且PAMAMCOOH/n-HAP上PAMAM-COOH涂层厚度不一,其中质量比为1∶4时的厚度为(26.648±1.035)nm,明显高于其它各质量比的厚度(P<0.05),质量比为1∶2时厚度最小,仅为(6.620±0.501)nm。结论:成功制备不同质量比的PAMAM-COOH/n-HAP复合材料,且PAMAM-COOH/n-HAP的最佳质量比为1∶4。