抗p185erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器的制备与验证

目的:构建抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体并制备和验证抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器模型。方法:利用PCR法扩增出抗人p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的重链基因H和轻链基因L,然后分别将嵌合抗体重链基因H和嵌合抗体轻链基因L连接到乳腺特异性表达质粒pBC1,从而构建抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体pBC1-H和pBC1-L。分别将抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26乳腺特异表达载体pBC1-H和pBC1-L线性化,然后使用原核显微共注射法获得8只转基因FVB小鼠,通过鼠尾直接PCR鉴定其转基因阳性。通过RT-PCR、荧光定量PCR鉴定转基因小鼠乳腺组织中抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的mRNA表达。使用小鼠乳汁采集器收集其乳汁并通过Western blot和夹心ELISA等实验鉴定抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26是否获得表达。结果:经测序验证,抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的嵌合重链基因H和嵌合轻链基因L分别与乳腺特异表达质粒pBC1正确正向连接。鼠尾直接PCR结果显示所获8只转基因FVB小鼠均为转基因双阳性小鼠,且抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的重链基因H和轻链基因L在它们的后代中稳定遗传,它们的后代中转基因小鼠双阳性率约为30%;RT-PCR和荧光定量PCR的结果显示,转基因双阳性小鼠及其双阳性后代的乳腺组织中存在抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的mRNA表达;Western blot和ELISA等实验结果显示,转基因双阳性小鼠乳汁中存在抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26的蛋白质表达,而且抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26与羊抗人κ链抗体和羊抗人IgG Fc-HRP抗体均能特异性结合。结论:成功构建抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体pBC1-H和pBC1-L和制备了抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器模型,为今后抗p185^erbB2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因牛乳腺生物反应器的研究奠定了理论和技术基础。