树鼩在医学实验研究中的新进展

树鼩的许多生物学特性近似于人类,人们利用树鼩成功建立了多种人类病毒感染的动物模型,并在肿瘤、内分泌、神经、视觉等方面有相当广泛和深入的应用和研究。本文概述了树鼩在医学实验研究中的新进展。

肝细胞癌组织上皮性钙黏蛋白表达及其临床意义的研究

目的:研究上皮性钙黏蛋白(E-Cad-herin)在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况,探讨其与肝癌侵袭转移的关系。方法:选择56例有完整随访资料的HCC及相应癌旁组织标本、20例正常肝组织标本,用RT-PCR方法检测E-Cadherin mRNA的表达。结果:E-Cadherin在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织和正常组织,P分别为0.016和0.003,而在癌旁组织和正常组织中的表达差异无统计学意义,P分别为0.076和0.082;E-Cadherin在肝癌组织中的表达与术后复发时间呈正相关,R2=0.887,P<0.05,与病理分级呈负相关,R2=0.823,P<0.05;癌组织中E-Cadherin表达与肝外转移呈负相关,R2=0.839,P<0.05。结论:E-Cadherin表达与肝癌的分化程度,侵袭转移能力,复发倾向相关,通过检测E-Cadherin表达将对肝癌临床转归的评估有一定指导意义。

实验诱发树鼩肝癌过程中细胞凋亡及其相关基因、p53突变位点的研究

目前对肝细胞癌（HCC）的研究一般为手术切除的肝癌组织，并用癌旁肝组织作为对照肝组织。这些研究只能观察癌形成时或形成后的基因表达状况，不能动态观察在肝细胞癌变过程中一些基因的表达状况。而以往利用动物模型研究不同诱癌阶段的基因改变，也通常是在不同诱癌阶段分批处死动物获取所需的组织，故也只能从群体上而不能从个体上动态观察基因表达情况。

链脲佐菌素诱导树鼩糖尿病动物模型研究

目的：探讨链脲佐菌素（STZ）树糖尿病（DM）动物模型的建立及其空腹血糖（FBG）标准和最佳药物剂量。方法：45只树随机分为正常对照组、STZ80、100、120、150mg/kg组5个组，测定其注药前、后FBG，并于注药后第4、10周处死，取胰腺做光镜、电镜检查。结果：FBG≥111mmol/L的树胰腺胰岛数量明显减少，胰岛直径也明显缩小，胰岛β细胞数量减少，肿胀，可见数量不等的β细胞脱颗粒，甚至无紫红色颗粒，淀粉染色阳性，符合DM成模动物胰腺病理改变。正常对照组、STZ 80mg/kg组无一成模；100mg/kg组患病率10%（1/10），仅维持1周即自然阴转；120、150mg/kg组患病率均为88.9%（8/9），前者维持时间短，注药后第4周自然阴转率50%（4/8），第10周为100%（8/8）；后者维持时间长，注药后第4周自然阴转率37.5%（3/8），第10周为62.5%（5/8）。150mg/kg组成模后第6周有1只树死亡，其余各组树 无一死亡。结论：STZ能诱导树FDBE-DM模型，树 DM模型标准为FBG≥11.1mmol/L，最佳STZ剂量为150mg/kg。

乳腺癌患者外周血SBEM mRNA的检测及其临床意义

背景与目的乳腺癌患者的死亡原因几乎均为肿瘤远处转移。目前乳腺癌诊断尚无公认的特异性标志物,本文旨在探讨特异性的乳腺癌标志物─乳腺小粘蛋白(smallbreastepithelialmucin,SBEM)在乳腺癌外周血的表达及其意义。方法用巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)技术检测67例乳腺癌、16例乳腺良性肿瘤及20例健康志愿者外周静脉血中的SBEMmRNA的表达情况。结果SBEMmRNA在健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者外周血中表达均为阴性;67例乳腺癌患者外周血中SBEMmRNA表达率为50.7%(34/67),在乳腺癌患者的临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期中SBEMmRNA表达率分别为25.0%(2/8)、45.8%(11/24)、43.8%(7/16)和73.7%(14/19),在Ⅳ期乳腺癌患者外周血中SBEMmRNA的检出率明显高于其他各期(P<0.05)。SBEMmRNA的表达与患者年龄、原发癌灶大小、病理类型、ER和PR的状态无关(P>0.05)。结论SBEMmRNA特异表达于乳腺癌患者的外周血,有可能作为判断乳腺癌血道微小转移的指标之一。

EGF mRNA和EGFR mRNA在肝细胞癌组织中的表达及其意义

背景和目的有众多证据表明表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)家族在一系列恶性肿瘤的发生发展中起重要作用,但EGFR与肝癌的关系目前尚未明确。本文旨在探讨表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)及其受体的mRNA在人肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)组织中的表达及其意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测60例HCC患者癌组织及癌旁肝组织中EGFmRNA和EGFRmRNA的表达情况。结果EGFmRNA阳性率在肝癌组织中(60%,36/60)显著低于癌旁组织(80%,48/60)(P<0.05);EGFRmRNA阳性率在肝癌组织中(60%,36/60)显著高于癌旁组织(41.67%,25/60)(P<0.05)。EGFRmRNA在肝癌组织中的检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发、肿瘤数目等明显有关,而与肿瘤直径、血清AFP水平、分化程度以及癌旁肝硬化无明显关系。EGFmRNA检出率与肿瘤直径明显有关,而与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发、肿瘤数目、血清AFP水平、分化程度以及癌旁肝硬化等无明显关系。结论本研究结果提示EGF可能与肝癌的发生、发展无关;而EGFR与肝癌的发生、发展及术后复发有关;可作为预测肝癌复发、转移的参考指标。

肝细胞癌组织中β-Catenin的表达与第三外显子突变的关系

背景与目的:广西南部是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)高发地区,也是粮食受黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)污染较重的地区。β-Catenin的异常表达与多种肿瘤有关,而AFB1是诱发HCC的重要因素。本研究旨在探讨AFB1高暴露地区HCC患者癌组织中β-Catenin基因突变及表达情况。方法:用基因直接测序、RT-PCR、免疫组化和Western blot等方法,检测52例来自广西南部AFB1高暴露地区HCC患者癌、癌旁组织和18例非肝癌肝组织中β-Catenin基因的表达。结果:癌组织中未见β-Catenin基因第三外显子的突变。β-Catenin mRNA在癌、癌旁和正常肝组织中的表达分别为0.42±0.24、0.20±0.16和0.23±0.12,癌组织中的表达显著高于癌旁组织或正常肝组织(P<0.01);免疫组化染色癌组织中阳性率为55.8%(29/52),显著高于癌旁组织[36.5%(19/52)](P<0.05)。β-Catenin蛋白表达与肝外转移、术后复发、门静脉癌栓和临床分期有关(P<0.05),而mRNA的表达与上述临床参数均无明显关系(P>0.05)。结论:β-Catenin在HCC组织中高表达,但其异常表达不是由基因第三外显子上GSK-3β磷酸化位点的突变引起。

表皮生长因子受体Ⅲ型突变体在肝细胞癌中的表达及意义

背景与目的有许多证据表明表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor variant typeⅢ,EGFRvⅢ)在一系列恶性肿瘤的发生发展中起重要作用,但EGFRvⅢ与肝癌的关系目前尚未明确。本研究旨在探讨EGFRvⅢ在人肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)癌组织中的表达,并分析其意义。方法用免疫组化SP方法检测55例HCC癌组织及癌旁肝组织中EGFRvⅢ的表达。结果HCC癌组织中EGFRvⅢ的阳性率(61.8%,34/55)高于癌旁肝组织中的阳性率(38.2%,21/55),两者间有显著性差异(P<0.05)。人肝癌组织中EGFRvⅢ蛋白的检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发、肿瘤直径大小呈显著性相关,而与肿瘤数目、分化程度、血清AFP水平或HBsAg状况、癌旁肝硬化无显著性相关。结论EGFRvⅢ在肝癌组织中有较高表达,且与肝癌的发展及术后复发等有关。

乳腺癌患者外周血SBEM-mRNA和CD44V6-mRNA的检测及其临床意义

目的:寻找乳腺癌血道微小转移的肿瘤标志物,以利于早期发现乳腺癌的转移。方法:用巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)技术,检测67例乳腺癌、16例乳腺良性肿瘤及20例健康志愿者外周静脉血中的乳腺小粘蛋白(sm allbreastepithelialm ucin--SBEM)m RNA和CD44V6-m RNA。结果:SBEM-m RNA在健康志愿者、乳腺良性肿瘤患者外周血中均为阴性;67例乳腺癌患者外周血中SBEM-m RNA表达率为50.7%(34/67),在乳腺癌患者的临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期中SBEM-m RNA表达率分别为25%(2/8)、45.8%(11/24)、43.75%(7/16)、73.7%(14/19),在Ⅳ期乳腺癌患者外周血中SBEM-m RNA的检出率73.7%(14/19)明显高于其他各组(P<0.05﹚。SBEM-m RNA的表达与患者年龄、原发癌灶大小、病理类型、ER和PR的状态无关(P>0.05);在乳腺癌、乳腺良性肿瘤及健康志愿者外周静脉血中的CD44V6-m RNA的检出率为55/67(82.1%)、12/16(75%)、14/20(70%)。结论:SBEM-m RNA特异表达于乳腺癌患者的外周血,有可能作为检测乳腺癌血道微小转移的指标,SBEM-m RNA阳性提示血循环中有乳腺癌细胞,预示着有血源性转移的可能,SBEM-m RNA可能成为诊断乳腺癌和判断预后的一个指标;而CD44V6-m RNA能否作为乳腺癌微小转移的标志物尚需进一步探讨。

CyclinD1 c-myc和p53的表达与肝细胞癌生物学行为关系

目的:探讨肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)及癌旁肝组织CyclinD1、c-myc及p53蛋白表达的意义及其与肝癌生物学行为关系。方法:采用EnVisionTMplus免疫组织化学方法检测CyclinD1、c-myc及p53蛋白在52例HCC及癌旁肝组织中的表达。结果:CyclinD1及c-myc在HCC组织中的阳性率明显高于在癌旁肝组织中的阳性率(P<0.05),在HCC中p53的阳性表达与CyclinD1、c-myc的阳性表达呈正相关(r=0.4637,P=0.0022、r=0.3445,P=0.0273,);CyclinD1、c-myc及p53在人肝癌组织中的检出率与肝外转移、术后复发及肿瘤分化程度明显有关(P<0.05),CyclinD1的检出率与门静脉癌栓明显有关(P<0.05),p53的检出率与血清AFP和TSGF水平有显著性差异(P<0.05);CyclinD1、c-myc及p53的检出率与临床分期、肿瘤大小、肿瘤个数、HBsAg状况无明显关系。结论:CyclinD1、c-myc及p53蛋白的过表达可促使肝癌细胞增殖,使肝癌细胞具有更强的侵袭力,与肝癌的发生、发展密切相关。

β-Catenin,cyclinD1及c-myc在肝细胞癌中的表达

目的探讨β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白的表达与肝癌临床病理参数的关系。方法采用EnVisionTMplus免疫组织化学方法研究β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白在52例HCC及癌旁肝组织中的表达情况。结果52例HCC中β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白染色阳性率分别为55.8%、48.1%及53.8%,癌旁肝组织的阳性率为36.5%、25.0%及32.7%,β-Catenin、cyclinD1及c-myc在HCC及癌旁肝组织两者间有显着性差异(P<0.05)。在HCC中β-Catenin的阳性表达与cyclinD1、c-myc的阳性表达密切相关(P=0.0108,r=0.3920;P=0.0295,r=0.3406)且呈正相关;β-Catenin、cyclinD1及c-myc在人肝癌组织中的检出率与肝外转移、术后复发及肿瘤分化程度明显有关(P<0.05),cyclinD1的检出率与门静脉癌栓也明显有关(P<0.05),β-Catenin的检出率与临床分期和门静脉癌栓也有显著性差异(P<0.05)。结论β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白的过表达可促使肝癌细胞增殖,使肝癌细胞具有更强的侵袭力,与肝癌的发生发展关系密切。

树实验肝癌形成过程中p53、bcl-2蛋白表达及其与细胞凋亡之间的关系

目的:动态研究在树肝癌形成过程中p53与bcl-2的蛋白表达以及它们之间的关系。方法:利用免疫组织化学SP法,对实验组35例树肝癌形成过程中第30周、60周、肝癌组织及13例同期的空白对照组树肝活检组织,进行p53、bcl-2蛋白的检测。结果:p53、bcl-2基因参与HCC的发生,在树HCC形成过程中,它们的表达均呈递增趋势。结论:p53、bcl-2基因之间的表达无明显依存关系。p53对凋亡的影响并不显著,bcl-2的抗凋亡作用受Bax的影响,bcl-2/Bax比率更能准确地反映细胞凋亡的程度。

PTEN基因在人和树鼠句肝细胞癌组织中低表达

目的:研究人和树鼠句肝癌和癌旁组织中PTEN基因的表达情况以及与肝癌侵袭转移的关系。方法:用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测人肝癌、癌旁组织和正常组织以及树鼠句肝癌和癌旁组织中PTEN mRNA和PTEN蛋白的表达情况。结果:PTEN mRNA在人的正常组织、癌旁组织、肝癌组织中的表达依次降低,差异有统计学意义,t值分别为-0.955和-10.065,P值均<0.001;树鼠句肝癌组织中PTEN mRNA的表达显著低于癌旁组织中的表达,t=-3.25,P=0.004。PTEN蛋白的表达在人的癌旁组织显著高于肝癌组织,t=-2.163,P=0.038;在树鼠句则无差别,t=0.757,P=0.459。结论:PTEN基因的表达缺失可能与肝癌的发生有关;用树鼠句进行肝癌发病学的研究基本上是可行的。

DNA-PKcs表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

目的探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1(鼻咽高分化鳞癌细胞株)和CNE-2(鼻咽低分化鳞癌细胞株)中DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)的催化亚基DNA-PKcs基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数,并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β、SF2、MID值,以及四氮唑蓝比色分析法(MTT法)检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率,以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术(RT-FQ-PCR)检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKcs基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高,MID值分别为2.78、1.61,SF2值分别为0.627、0.341;4Gy照射后12h的存活率分别为88.2%、72.3%;RT-FQ-PCR显示两株细胞中均有DNA-PKcs基因的表达,其相对表达量之比为7.54±2.71(t=4.17,P=0.014),表达差异有统计学意义,DNA-PKcs基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNE-2比CNE-1对射线更敏感,DNA-PKcs基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。

乳腺癌外周血微转移的检测及临床意义

目的:研究人乳腺珠蛋白hMAMmRNA表达与乳腺癌临床生物学预测指标的关系,探讨其作为乳腺癌微转移标志物的可能性。方法:应用巢式逆转录聚合酶链反应(nested-RT-PCR)技术对乳腺癌、乳腺良性肿瘤患者及健康志愿者外周血hMAM-mRNA的表达进行检测。结果:乳腺癌患者外周血中hMAM-mRNA阳性表达率为50·75%(34/67),而hMAM-mRNA在健康人外周血中无表达;16例乳腺良性疾病患者中仅1例阳性表达,乳腺癌hMAM-mRNA的阳性表达率与乳腺良性肿瘤患者及健康人比较差异有统计学意义,χ2=24·1735,P=0·000。乳腺癌患者临床分期为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期者,其外周血hMAM-mRNA阳性表达率分别为25·00%(2/8)、45·80%(11/24)、43·75%(7/16)和73·70%(14/19),Ⅳ期乳腺癌hMAM-mRNA阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期,χ2=5·5268,P=0·0187。结论:hMAM-mRNA是一个有价值的检测乳腺癌微转移的标志物,对指导临床治疗和评估预后可能具有重要意义。

树鼩肝癌形成过程中凋亡抑制基因的表达及与细胞凋亡的关系(英文)

背景:目前对肝细胞癌(HCC)的研究大多数只局限于对人的肝癌及癌旁组织进行研究,这种研究方法的最大缺陷是不能动态观察肝癌形成过程中的不同时期的各种变化。目的:利用实验诱发树鼠句肝癌的动物模型,动态研究在树鼠句肝癌形成过程中凋亡抑制基因(survivin)的表达及其抑制凋亡的机制。设计:完全随机对照实验。干预:实验组给予AFB1(黄曲霉毒素B1)105周,然后继续喂正常饲料至150周。对照组动物不喂AFB1,仅按正常饲养方法同样喂至150周。实验期间每隔15周对实验组和对照组动物打开腹腔进行肝组织活检。活检组织用40g/L中性甲醛固定,石蜡包埋。然后将对照组30,60,90周和实验组30,60周及HCC组织的切片,采用免疫组织化学S-P法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术,进行sur-vivin基因蛋白和凋亡细胞的检测。主要观察指标:树鼠句肝细胞癌形成过程中每一阶段的survivin基因蛋白的表达情况和细胞凋亡的情况。结果:survivin基因与HCC的发生有关,在树鼠句HCC形成过程中,其表达呈递增趋势。survivin在对照组30,60,90周,实验组30,60周平均得分分别为0.62,0.77,0.92,1.02,1.6,在树鼠句HCC组织切片中平均得分为5.34,与各组肝组织中的表达差异有显著性意义(t=3.0580,3.2564,3.0316,4.7715,3.8036,P<0.

肝细胞癌组织中PTEN蛋白的表达以及与肝癌侵袭转移的关系

目的研究人原发性肝癌(HCC)中的磷酸酶基因(PTEN基因)蛋白的表达及其临床意义。方法用免疫组织化学方法分别检测人HCC组织、癌旁组织中PTEN蛋白的表达情况。结果PTEN蛋白的表达在人HCC组织显著低于癌旁组织(P=0.038),其阳性率也显著低于癌旁肝组织(P=0.007)。PTEN蛋白的表达与HCC患者的年龄、血清AFP水平、肿瘤个数、肿瘤直径、临床分期、术后复发、有无肝外转移、病理分级等多数临床病理学指标无关,而与有无门脉癌栓有密切的关系。无门脉癌栓的患者的肝癌组织中的PTEN蛋白较有门脉癌栓的表达高(P=0.010)。结论HCC的发生中可能存在PTEN基因的突变或缺失。PTEN基因的表达缺失可能与HCC的恶性程度,疾病的进程及HCC的侵袭转移有密切关系。PTEN基因低表达,HCC患者病程较晚、肝癌的恶性程度较高,较容易发生侵袭转移,预后较差。

erbB家族在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨erbB家族在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组化SP法检测55例HCC患者癌组织及癌旁组织中erbB家族中表皮生长因子受体(EGFR)、C-erbB-2、C-erbB-3、C-erbB-4的表达情况。结果:55例HCC患者癌组织及癌旁组织中,EGFR阳性表达率分别为58.18%(32/55)和36.36%(20/55),两者差异有显著性(P<0.05);C-erbB-4阳性表达率分别为47.27%(26/55)和72.73%(40/55),两者差异有显著性(P<0.05);而C-erbB-2、C-erbB-3在癌组织及癌旁组织中阳性表达率差异无显著性(P>0.05)。EGFR在HCC组织中的阳性表达率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发等有关,C-erbB-2、C-erbB-3、C-erbB-4阳性表达率与各临床病理参数无关。结论:EGFR与肝癌的发生、发展有关,可作为HCC预后不良的参考指标;C-erbB-2及C-erbB-3可能与肝癌的发生、发展无关,而C-erbB-4低表达可能与HCC的发生有关。

乳腺癌患者外周血Hmam-mRNA的检测及其临床意义

目的:寻找乳腺癌血道微小转移的肿瘤标志物,以利于早期发现乳腺癌的转移。方法:用巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)技术检测83例乳腺癌、20例乳腺良性肿瘤患者及20例健康志愿者外周静脉血、检测40例乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织中的乳腺珠蛋白(Hmam-mRNA)的表达,并分析Hmam-mRNA表达与相关临床指标的关系。结果:Hmam-mRNA在健康志愿者、乳腺良性肿瘤患者外周血中均为阴性;83例乳腺癌患者外周血中Hmam-mRNA表达率为28.9%(24/83),在乳腺癌患者的临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ中Hmam-mRNA表达率分别为:14.3%(2/14)、21.43%(6/28)、21.05%(4/19)、54.5%(12/22),Ⅳ期乳腺癌患者外周血中Hmam-mRNA的表达率明显高于其他各组(P<0.05),Hmam-mRNA阳性表达与临床期别有一定关系。Hmam-mRNA的表达与患者年龄、原发癌灶大小、病理类型、ER和PR的状态无关(P>0.05)。结论:Hmam-mRNA特异表达于乳腺癌患者的外周血,Hmam-mRNA阳性提示血循环中有乳腺癌细胞,预示着有血源性转移的可能,Hmam-mRNA可能会成为诊断乳腺癌和判断预后的一个独立指标。