激光拉曼光谱系统无损鉴别大鼠原代胰岛α、β细胞

目的:利用激光拉曼光谱系统无损区分贴壁生长的大鼠原代胰岛α、β细胞,并比较该方法与传统方法的优劣。方法:收集贴壁生长于定位格子培养皿中大鼠胰岛细胞的拉曼光谱、坐标及照片后应用免疫组化结合培养皿坐标定位确定胰岛细胞的分类,用主成分分析结合线性判别分析(PCA-LDA)对两种胰岛细胞拉曼光谱进行分析,用线性判别分析法对两种细胞大小进行分析,两组间光谱及面积差异则采用两独立样本t检验。结果:贴壁生长的胰岛β细胞体积较α细胞大,差异具有统计学意义(P=0.001);然而单纯利用面积胰岛α细胞及胰岛β细胞正确区分率分别为84.5%、50.0%;胰岛α细胞与胰岛β细胞的拉曼光谱有共同特征峰同时也存在显著差异的波峰,即二者有不同的"细胞分子指纹",且将该特点结合PCA-LDA的方法对胰岛α、β细胞进行区分正确率均为100%。结论:激光拉曼光谱系统可以成为快速无损区分胰岛α、β细胞的有效方法。

青紫型先天性心脏病红细胞膜流动性及血液流变学

为探讨青紫型先天性心脏病红细胞膜性能的改变及其临床意义，应用荧光偏振法测定了３１例患儿红细胞膜微粘度及血液流变学指标。结果：患儿红细胞膜微粘度及全血粘度、血细胞比容、红细胞聚集指数、刚性指数均显著高于正常组（３０例）（Ｐ＜０．０１）；膜微粘度与全血粘度、红细胞刚性指数呈明显正相关（Ｐ＜０．０１）。研究表明，青紫型先天性心脏病红细胞膜微粘度增高，流动性降低，可能是引起红细胞变形性差，血液粘度增加较为重要的原因之一。

波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法将INS-1细胞随机分为三组。正常对照组(NG):含5.5 mmol/L葡萄糖;持续高糖组(SHG):含33.3 mmol/L葡萄糖;波动性高糖组(IHG):含5.5 mmol/L或33.3 mmol/L葡萄糖,每24 h交替换液1次,均培养3 d。3 d后检测各组INS-1细胞活性及凋亡百分率,胰岛素分泌量,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及胰岛素(insulin)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)mRNA表达水平。结果与NG组相比,SHG组与IHG组凋亡率均明显升高,细胞活性明显降低,Bax、CytC及Caspase-3表达明显增强,胰岛素分泌量及insulin、PDX-1 mRNA表达水平均明显降低(P均<0.01);与SHG组相比,IHG组细胞活性及胰岛素分泌量明显降低,凋亡率及Caspase-3明显增加(P均<0.01),Bax、CytC表达水平与insulin及PDX-1 mRNA表达水平均未见统计学差异。结论波动性高糖能导致胰岛细胞凋亡增加和功能障碍,其机制可能与上调Bax、CytC、Caspase-3及降低insulin与PDX-1基因表达等相关。

5-ALA-PDT后鼻咽癌裸鼠荷瘤组织VEGF及HIF-1α表达改变的实验研究

目的：探讨5-ALA光动力治疗后，裸鼠体内鼻咽癌组织中VEGF及HIF基因表达的改变。方法：鼻咽癌CNE2细胞接种到BALB／c裸鼠右腋下，当肿瘤长到0．1～0．15cm。时，将动物随机分成3组，每组10只，局部给予5-ALA100mg／kg，3～3．5h后激光照射（100mW／cm^2，100J，630nm），对照组相等激光剂量照射但不给药。分别用实时荧光定量PCR、免疫组化、蛋白质印迹法检测对照组、5-ALA—PDT后24h及14d裸鼠鼻咽癌负荷瘤中VEGF及HIF-1α表达情况。结果：HIF-1dmRNA、蛋白水平在各组间表达差异无统计学意义，P〉0．05，而VEGF在5～ALA-PDT后24h表达略上调，强阳性率80％，而14d后表达下调，强阳性率40％。结论：5-ALA-PDT后14dVEGF表达下调可能是抑制鼻咽癌生长的原因之一，而HIF-1α表达无明显变化，是否提示5-ALA-PDT后VEGF改变可能不受HIF-1α调控的影响将在今后实验中进一步证实。