羧基化聚酰胺—胺/无定形磷酸钙改善牙本质粘接的实验研究

目的:探讨粘接剂负载羧基化聚酰胺-胺/无定形磷酸钙(PAMAM—COOH/ACP)纳米复合体对树脂-牙本质粘接性能的影响。方法:收集新鲜拔除的无龋无白斑人前磨牙或第三磨牙80个并制成统一牙本质粘接试样,将80个试样随机分为4组(A组、B组、C组、D组)。A组采用自酸蚀粘接剂进行树脂粘接,B组、C组、D组分别采用含0.3wt%ACP、0.3wt%PAMAM—COOH和0.3wt%PAMAM—COOH/ACP的自酸蚀粘接剂进行树脂粘接。对各组粘接试样行剪切强度测试,并对测试结果行单因素方差分析。采用扫描电子显微镜(SEM)观察各组牙本质粘接界面断端,并在超景深三维显微系统(50倍)下统计断裂类型。结果:A组、B组、C组、D组剪切强度分别为(8.67±4.78)MPa、(10.11±3.53)MPa、(11.94±4.78)MPa、(12.01±2.91)MPa。C组和D组的剪切强度均高于A组(P<0.05),B组、C组、D组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。SEM下观察断端,A组只可见树脂残留,B组可见少量疏松矿化产物生成,C组可见矿化产物深入牙本质内,D组形成致密的矿化产物且牙本质小管管径缩小。各组的断裂模式均以黏附破坏为主,除A组外,其余各组均发生少量内聚破坏或混合破坏。结论:PAMAM—COOH/ACP纳米复合体加入自酸蚀粘接剂中可提高其树脂-牙本质粘接强度。

免疫磁珠分选的口腔鳞状细胞癌干细胞诱导分化及成瘤活性研究

目的探讨口腔鳞状细胞癌干细胞的诱导分化及成瘤活性。方法采用免疫磁珠分选法从6例原代培养的口腔鳞状细胞癌细胞中分选出CD133^+、CD44^+细胞,以流式细胞术检测其纯度及细胞周期,并绘制CD133^+细胞生长曲线。将分选出的细胞经诱导向成骨肪细胞及成脂肪细胞分化,将原代鳞癌细胞、分选所得的CD44^+细胞及CD133^+细胞进行体内成瘤实验。结果经免疫磁珠分选法成功获得CD44^+细胞、CD133^+细胞,其纯度经检测均在94%以上,且主要处于G0/G1期。CD133+细胞在接种后第2天进入对数期,细胞倍增时间为3.22 d。经诱导后CD44^+、CD133^+细胞成功分化为成骨细胞及成脂肪细胞。皮下注射后第3天可触及新生肿物,在3种细胞成瘤实验中CD133^+细胞组瘤体体积最大,HE染色显示符合低分化口腔鳞状细胞癌病理表现。结论免疫磁珠分选法可高效获得高纯度的口腔鳞状细胞癌干细胞。CD44^+、CD133^+细胞均具有较强的多向分化能力,CD133^+细胞成瘤性较强。

皮肤瘢痕的光电治疗应用及研究进展

瘢痕在伤口愈合的过程中扮演着重要的角色,是皮肤创伤后修复的一种表现。在伤口愈合期间,胶原蛋白的合成与降解会受到多种因素调控,当二者呈现出不平衡状态时,则会导致病理性瘢痕的形成,多发生于烧伤、外伤、炎症及手术后。瘢痕会对患者皮肤外观、功能以及患者心理造成不同程度的影响,危害患者的身心健康。瘢痕治疗的方法包括药物、物理治疗、手术以及新兴的光电技术治疗。根据瘢痕的分类不同,其所适用的治疗方法及治疗效果也不尽相同,应根据临床瘢痕情况进行个性化、综合治疗。该文介绍了目前较为常见的光电治疗技术(包括激光治疗、射频技术以及光动力疗法等),针对不同类型的瘢痕其适用的光电治疗手段以及目前光电治疗的研究进展作一综述。

青蒿琥酯对伴牙周病Ⅰ型糖尿病大鼠主动脉自噬功能调控机制研究

目的:评估伴牙周病Ⅰ型糖尿病大鼠主动脉组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白轻链3(LC3)自噬信号通路基因表达情况,探究青蒿琥酯(ART)对自噬通路的调控作用。方法:选取56只SD大鼠,随机分为7组:正常对照组、单纯Ⅰ型糖尿病组(DM组)、单纯牙周病组(PD组)、伴牙周病Ⅰ型糖尿病组(DM+PD组)和伴牙周病I型糖尿病ART低剂量治疗组(DM+PD ART 10 mg/kg组)、中剂量治疗组(DM+PD ART 30 mg/kg组)、高剂量治疗组(DM+PD ART60 mg/kg组),每组8只。用药干预4周后,检测大鼠空腹血糖值,分离上颌牙槽骨、主动脉组织,Micro-CT检测牙槽骨吸收,实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)检测血管mTOR和LC3mRNA表达情况。结果:DM组、DM+PD组大鼠血糖值上升(P<0.01),通过ART治疗明显改善,其中DM+PD ART 60 mg/kg组作用明显。Micro-CT示PD组、DM+PD组牙槽骨出现明显吸收(P<0.01),ART用药组可有效改善,随浓度增加效果明显。qPCR结果显示,mTOR、LC3基因在各模型呈高表达,ART用药后表达明显减低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:ART通过抑制mTOR/LC3基因表达,调控伴牙周病I型糖尿病大鼠主动脉自噬功能。

中性粒细胞产生活性氧在肿瘤发生发展中作用的研究进展

中性粒细胞是人体固有免疫系统的重要组成部分,在抵抗病原体入侵、肿瘤免疫监视等方面起着重要作用。中性粒细胞内产生的活性氧对肿瘤的发生发展具有双向作用。一方面,它可以促进肿瘤细胞的生长和转移;另一方面,它又可通过不同的作用机制诱导肿瘤细胞的死亡。文中将归纳总结近年来中性粒细胞内产生的活性氧在肿瘤发展中的作用和肿瘤治疗中的前景,以期为肿瘤防治领域的研究提供新的思路。

牵张成骨术对小型猪腭裂模型治疗效果研究

目的:研究牵张成骨(DO)术对腭裂软硬组织缺损的治疗效果、术后瘢痕的影响。方法:建立21只小型猪的腭裂模型,并将其随机分成3个实验组:对照组(A组,n=6)、传统手术组(B组,n=6)以及DO治疗组(C组,n=9)。其中,A组中的小型猪在建立好腭裂模型后不接受任何外科手术整复治疗,B组小型猪行传统腭裂整复术,C组小型猪行DO术修复腭部缺损。术后6个月内每月通过锥形束CT(CBCT)检测3组小型猪术后上颌骨成骨情况并行评估。同时,在C组中,随机选取3只小型猪,分别在术后第2周、第4周以及第8周处死并采用苏木精-伊红(HE)染色及Masson染色观察其腭部缺损区域骨组织及纤维组织形成情况。结果:A组6个月后缺损间隙略微缩小,缺损间隙有絮状胶原纤维呈网状排列;B、C组腭部缺损完全闭合;B组愈合部分胶原纤维直径明显增大;在C组发现有骨组织再生,且没有明显的瘢痕形成,术后8周骨组织与正常骨组织相近且可见丰富且细长的胶原纤维。术后1~6个月上颌骨的宽度和高度3组之间无明显的差异(P>0.05),而术后2个月上颌骨的长度C组明显长于A组和B组(P<0.05)。A、C组组内各时间点间上颌骨长度、宽度以及高度比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);而B组上颌骨长度在术后5~6个月无明显差异,上颌骨宽度和高度在术后3~6个月均无明显差异(P>0.05)。结论:DO术对于闭合腭部缺损是有效且成功的,并且有助于促进上颌骨的成骨以及减轻术后瘢痕的形成。

重症婴幼儿龋对儿童口腔健康相关生活质量的影响

目的:探讨重症婴幼儿龋(S-ECC)对儿童口腔健康相关生活质量(OHRQL)的影响。方法:随机选取来我院就诊的S-ECC及无龋儿童各95名,进行口腔健康状况检查,并采用学龄前儿童口腔健康影响量表(Early Childhood Oral Health Impact Scale,ECOHIS)调查儿童的OHRQL。比较S-ECC及无龋儿童的ECOHIS得分情况,分析ECOHIS得分与患龋状况的相关性。结果:S-ECC儿童的ECOHIS总分以及在各领域的得分均明显高于无龋儿童(P<0.05)。ECOHIS总分及各领域得分均与儿童的龋齿数和患龋牙面数呈正相关。S-ECC对儿童OHRQL的影响主要体现在儿童的口腔症状、口腔功能及家长内疚感3个领域。结论:S-ECC儿童的OHRQL低下,应引起广泛关注,并对其采取积极的治疗措施。

炎性因子对人口腔黏膜上皮细胞β-防御素表达的影响

目的探讨炎性因子对人口腔黏膜上皮细胞(OMEC)人β防御素(hBD)-2和hBD-3表达的影响。方法收集人健康口腔黏膜组织,进行消化培养后选用第2代人OMEC。培养48 h后将OMEC分为空白对照组、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、干扰素-γ(IFN-γ)组、白细胞介素-17(IL-17)组、TNF-α+IFN-γ组、TNF-α+IL-17组和IFN-γ+IL-17组,除空白对照组外加入相应的细胞因子。干预24 h后采用实时荧光定量PCR检测OMEC的hBD-2、hBD-3 mRNA相对表达量,酶联免疫吸附试法检测细胞上清hBD-2和hBD-3的蛋白水平。结果 TNF-α组hBD-2 mRNA的相对表达量、IL-17组的hBD-2及hBD-3 mRNA的相对表达量均高于空白对照组(均P<0.05),TNF-α+IFN-γ组、TNF-α+IL-17组、IFN-γ+IL-17组hBD-2、hBD-3 mRNA的相对表达量及hBD-2蛋白水平均高于相应细胞因子单独干预组(均P<0.05)。结论炎性因子能诱导人口腔黏膜上皮细胞表达hBD-2和hBD-3。

玉林市特殊教育学校残障儿童及青少年口腔健康状况调查

目的:调查玉林市特殊教育学校残障儿童及青少年的口腔健康状况。方法:选择玉林市特殊教育学校1~18岁残障儿童及青少年279名,采用问卷调查和口腔检查的方法,了解其患龋及牙周状况,并根据年龄、性别和残疾类型分组,评定其口腔健康水平。结果:279名受试对象总体患龋率为69.89%,乳、恒牙龋均分别为4.14±4.68、1.39±2.94;龋损充填率仅为1.43%;牙龈出血、牙石检出率分别为18.28%、11.11%。随着年龄的增长,各年龄组患龋率无明显差异(P>0.05),乳牙龋均和恒牙龋均、牙龈出血和牙石检出率逐渐增加(P<0.05)。男女间以及各残疾类型间的患龋水平及牙周健康状况无统计学差异(P>0.05)。结论:玉林市残障儿童及青少年患龋情况严重,牙周情况较差,口腔健康应得到重视。

SDF-1/CXCR4信号轴在牙髓血运重建中的作用

目的:研究基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4(SDF-1/CXCR4)信号轴在牙髓血运重建中对组织再生的作用。方法:18只8周龄SD大鼠随机分为常规组(N组)、常规+SDF-1水凝胶组(N+SDF-1组)和常规+抗SDF-1抗体中和作用组(N+antiSDF-1组),每组6只,实验牙为双侧下颌第一磨牙,建立无髓根管模型后,按照分组进行处理。14 d后,收集双侧下颌骨,分别进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学检测,观察根管新生组织类型以及CXCR4+细胞情况。结果:N组、N+SDF-1组根管新生组织冠方为不规则矿化基质,根尖方向可见成纤维样细胞组成的致密结缔组织,N+SDF-1组部分根管内可见新生小血管;N+anti SDF-1组典型组织学表现为根管内无明显的新生结缔组织,根尖孔区有大量的幼稚成纤维样细胞和小血管集聚,细胞无进入根管内的趋势。N组和N+SDF-1组根管内CXCR4+细胞,N+anti SDF-1组根管内见少量CXCR4+细胞。结论:SDF-1/CXCR4信号轴在牙髓血运重建中通过趋化细胞归巢进入根管内的方式,参与了组织再生,并具有促进血管新生的作用。

利格列汀应用于牙髓血运重建治疗的安全性探索

目的:研究DPP-4抑制剂利格列汀对大鼠牙髓血运重建治疗中血糖与体重的影响。方法:将18只SD大鼠随机分为3组,每组6只。实验组:下颌第一磨牙行牙髓血运重建术并灌胃利格列汀;对照组:下颌第一磨牙行牙髓血运重建术并灌胃羧甲基纤维素钠;空白组:下颌第一磨牙不作处理并灌胃羧甲基纤维素钠。在实验前及灌胃后7d、14d、21d、28d检测大鼠空腹血糖及体重。结果:在实验前和灌胃7d、14d、21d、28d后3组大鼠空腹血糖值及体重差值比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:DPP-4抑制剂利格列汀对于牙髓血运重建中大鼠的血糖与体重无明显影响。

利格列汀对牙髓血运重建术后SDF-1表达及牙髓组织再生的影响

目的:研究二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂利格列汀对SD大鼠牙髓血运重建术后基质细胞衍生因子1(SDF-1)的表达及根管内新生组织的影响。方法:将90只大鼠随机分为实验组、对照组及空白组,每组30只。实验组灌胃利格列汀并对下颌第一磨牙进行血运重建术;对照组灌胃羧甲基纤维素钠(CMC-Na)并行血运重建术;空白组仅灌胃CMC-Na。术后1 d、4 d、7 d、14 d、21 d分别检测三组大鼠血清DPP-4活性及SDF-1浓度,行组织学观察新生组织形态及免疫组化染色观察根管内新生组织SDF-1的表达。结果:实验组术后5个时间点血清DPP-4活性均低于对照组及空白组(均P<0.05),而血清SDF-1浓度仅在术后1 d、4 d、7 d时高于对照组及空白组(均P<0.05)。组织学观察发现实验组、对照组术后1 d、4d、7 d时根管内大量炎症细胞浸润及红色基质样组织分布,14 d、21 d时炎症细胞减少,基质样组织红染变浅,形成空泡样结构。免疫组化结果显示三组术后1 d、4 d时根管内SDF-1表达量基本相同(P>0.05),实验组和对照组术后7 d、14 d,21 d时SDF-1表达均低于空白组(P<0.05)。结论:应用利格列汀能够抑制血清DPP-4活性,提高血清SDF-1浓度,但无法提高根管内SDF-1浓度,且利格列汀对血运重建术后根管内的新生组织形态无明显改善。

羧基改性的聚酰胺——胺/纳米羟基磷灰石的制备和表征

目的:制备和表征羧基改性的聚酰胺—胺/纳米羟基磷灰石(PAMAM-COOH/n-HAP)复合材料,并探索其合成时的最佳质量比。方法:通过水热合成法制备不同质量比[m(PAMAM-COOH):m(n-HAP)]的PAMAM-COOH/n-HAP复合材料,利用傅里叶变换红外光谱、透射电镜以及热重分析对其化学信息、形貌和PAMAM-COOH结合到纳米羟基磷灰石上的量进行表征。结果:不同质量比[m(PAMAM-COOH):m(n-HAP)]均可成功制备PAMAM-COOH/n-HAP复合材料,且PAMAMCOOH/n-HAP上PAMAM-COOH涂层厚度不一,其中质量比为1∶4时的厚度为(26.648±1.035)nm,明显高于其它各质量比的厚度(P<0.05),质量比为1∶2时厚度最小,仅为(6.620±0.501)nm。结论:成功制备不同质量比的PAMAM-COOH/n-HAP复合材料,且PAMAM-COOH/n-HAP的最佳质量比为1∶4。

试剂盒法与差速超速离心法所提取的人牙髓细胞外泌体的鉴定与比较

目的:采用试剂盒法以及差速超速离心法提取的人牙髓细胞外泌体(hDPC-DEs),并进行鉴定与比较。方法:培养原代人牙髓细胞(hDPCs)并鉴定,收集hDPCs培养上清,分别采用试剂盒法和差速超速离心法提取hDPC-DEs,在透射电镜下进行形态学观察,利用免疫印记(Western blotting)法对外泌体表面标记蛋白CD9的表达进行检测,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定外泌体表面标记蛋白CD63的浓度。结果:透射电镜下试剂盒法与差速超速离心法所提hDPC-DEs均表现为典型的茶托状双层膜结构,直径在50～120nm,试剂盒组背景杂质较多,差速离心组背景较为清晰。两种方法提取的hDPCDEs特异性标志蛋白CD9均呈阳性表达。试剂盒组外泌体标志蛋白CD63的浓度高于差速超速离心组(P<0.05)。结论:试剂盒法与差速超速离心法均可获得hDPC-DEs,前者操作简便,所提取的hDPC-DEs的浓度较高,但杂质可能比较多。

纳米/非纳米种植体表面早期附着细胞的基因表达谱分析

目的:通过生物信息学方法,利用基因表达综合数据库(GEO)分析两种种植体表面(纳米/非纳米级)早期附着细胞的基因表达谱。方法:从GEO数据库下载芯片数据(GSE42288),运用R软件对42枚纳米级(纳米组)和42枚非纳米级表面处理(非纳米组)的迷你种植体周附着细胞的基因谱进行差异表达基因筛选,使用DAVID软件分别对差异基因进行GO及KEGG通路富集分析,同时使用STRING和Cytoscape软件进行蛋白质网络互作分析。结果:筛选出110个差异表达基因(上调7个,下调103个)。GO富集分析结果提示,差异基因在免疫反应、炎症反应、趋化因子调节、细胞凋亡通路等生物学过程及白细胞介素(IL)-8受体活化等分子功能中发挥重要作用;KEGG通路分析结果显示,差异表达基因主要在自然杀伤细胞介导的细胞毒作用、破骨细胞分化、抗原加工提呈、趋化因子、细胞因子及其受体相互作用信号通路上发挥作用;GO、KEGG及蛋白互作网络分析筛选出纳米级种植体组主要的下调差异基因为VEGFA、CCL20、IL-8、CXCR1和CXCR2。结论:纳米级种植体更利于早期骨愈合,这可能与VEGFA、CCL20、IL-8、CXCR1和CXCR2基因的下调有关。

体外评估hDPCs-PRF复合体内hDPCs的迁移行为

目的:在前期成功构建人牙髓细胞(hDPCs)—富血小板纤维蛋白(PRF)复合体基础上,观察hDPCs在复合体中的迁移能力。方法:采用组织块法分离培养hDPCs,制备hDPCs-PRF复合体,培养7 d、14 d、21 d后行苏木精—伊红(HE)染色,观察hDPCs的形态及迁移行为。结果:初期hDPCs-PRF复合体中,白细胞、牙髓细胞主要存在于白膜层中;随着培养时间的延长,白膜层逐渐溶解消失,白细胞及牙髓细胞沿着复合体边缘游走,hDPCs由原来的椭圆形变成长梭形。培养21 d后,显微镜下可见hDPCs-PRF复合体培养基中大量hDPCs的存在,大部分细胞生长状况良好。结论:hDPC-PRF复合体可缓慢降解并同步释放复合体内的牙髓细胞;hDPCs-PRF复合体中释放的牙髓细胞仍具有继续增殖分化的潜力。

单链DNA结合蛋白1沉默对颌下腺细胞放射后增殖修复的影响

目的 研究沉默大鼠颌下腺（submandibular gland，SMG）细胞单链DNA结合蛋白1（single-strand DNA-binding protein 1，SSB1）表达后，放射损伤下细胞的增殖及修复情况。方法 机械胰酶联合法进行大鼠SMG细胞原代培养及免疫组织化学法鉴定。实验分3组：正常细胞组、阴性对照组（Ad-HK组）和实验组（Ad-SSB1-shRNA组）。重组腺病毒介导shRNA转染SMG细胞，荧光定量PCR检测SSB1表达沉默情况。CCK-8法及免疫荧光法分别检测细胞活性及γ-H2AX焦点数动态变化。结果 细胞免疫组织化学检测角蛋白和α-淀粉酶表达均呈阳性。转染72 h后转染效率接近90%，实验组SSB1 mRNA表达较正常细胞组明显降低（t=16.24，P〈0.05）。照射前，实验组细胞活性下降不明显，120 h时细胞活性才明显低于正常细胞组（t=3.29，P〈0.05）。5 Gy照射后，实验组各时间点细胞活性均明显低于阴性对照组和正常细胞组（F=10.19~30.13，P〈0.05）。γ-H2AX免疫荧光显示，沉默SSB1能抑制细胞DNA放射损伤修复。结论 沉默SSB1表达的大鼠SMG细胞对放射损伤更敏感。SSB1在大鼠SMG细胞DNA放射损伤修复中有着重要作用。