辅助生殖技术中卵巢高反应者行冻融或新鲜单囊胚移植的结局

目的：探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）助孕控制性超排卵（CHO）周期中卵巢高反应患者实施新鲜单囊胚移植与冻融单囊胚移植的临床结局。方法：回顾性分析广西壮族自治区妇幼保健院生殖中心2013年1～12月行IVF助孕的卵巢高反应患者404例临床结局。其中,新鲜周期有卵巢过度刺激综合征（OHSS）风险,行首个冻融周期单囊胚移植145例（冻融周期组）;新鲜周期单囊胚移植259例（新鲜周期组）。比较两组获卵数、妊娠率、种植率、流产率、异位妊娠率、活产率等相关指标。结果：冻融周期组与新鲜周期组获卵数分别为24.3±5.7枚、19.3±3.8枚,生化妊娠率分别为78.6%、50.6%,临床妊娠率分别为74.5%、50.6%,种植率分别为74.5%、50.6%,晚期流产率分别为0,6.1%,活产率分别为64.8%、40.2%,差异均有统计学意义（P〈0.05）;而早期流产率分别为11.1%、11.5%,单卵双胎率分别为0.9%、0.8%,异位妊娠率分别为1.9%、3.1%,差异均无统计学意义（P〉0.05）。404例中OHSS发生率为3.0%,其中冻融周期组9例（6.2%）,均为中、重度早发型OHSS;新鲜周期组3例（1.2%）,均为中、重度迟发型OHSS。结论：IVF-ET中卵巢高反应行新鲜单囊胚移植及有OHSS高风险者选择冻融单囊胚移植均可有效降低OHSS发生率,而且冻融周期单囊胚移植比新鲜囊胚移植有更高的临床妊娠率及活产率。

胚胎质量评价方法在人类辅助生殖技术中的临床应用

胚胎质量评价在选择性单囊胚移植中是非常重要的,可能提高妊娠率且降低多胎妊娠率。目前应用最广泛的是形态学评价方法,包括卵母细胞、原核期、卵裂期和囊胚期评分。近几年,定向代谢分析被认为是评价胚胎质量的有效方法,包括丙酮酸、糖代谢、氨基酸、可溶性人白细胞抗原(HLA-G)等。进一步代谢产物分析,即通过分析胚胎培养过程中不同阶段的代谢产物变化来预测胚胎活力,也获得了较好的应用前景。仅从形态学和代谢分析不能确定染色体的异常,因此,进行染色体筛查已经成为选择活力胚胎的方法之一。总之,当前胚胎质量评估主要依赖形态学评估作为第一道评估标准,其他预测方法应用于临床还需要进一步研究。

辅助生殖中完全不运动精子存活鉴定及选择方法的研究进展

卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)技术仍是目前严重男性因素不育患者获得自身遗传学后代最有效的方法。众所周知,ICSI的先决条件是要有活精子注射到卵母细胞内激活卵子,进而完成受精和后续胚胎发育。精子的运动性是其具有生命力的显著标志。研究证实,不运动精子并不代表已经死亡,存活的精子仍具有正常的受精能力。使用不运动精子行ICSI带来了正确选择有活性精子的难度,因此对于完全不运动的精子,如何选择存活的精子进行受精是关键。目前,鉴别不动精子存活率的方法有多种:低渗肿胀试验、精子尾部柔软度试验、化学激活剂、延长精子体外培养时间、激光以及伊红染色等。本文将对近年来如何选择完全不运动精子进行辅助生殖助孕进行综述。

辅助生殖技术引发的伦理问题及其对策

辅助生殖技术是指应用现代医学的技术和方法对配子、合子及胚胎进行人工操作,代替人类自然生殖过程中的某些步骤,以达到受孕目的的一项技术,主要包括人工授精、体外受精-胚胎移植及其衍生技术。

辅助生殖技术中单胚胎移植的伦理考量

人类辅助生殖技术已跨入以高效、安全为主题的时代,而因辅助生殖治疗造成高概率的多胎妊娠的伦理问题也更加突出。公众乃至专科工作者都低估多胎妊娠的复杂性和其潜在的对母婴的严重危害,在具体的工作中也存在保证妊娠率与并发医源性多胎妊娠的矛盾,因此在临床工作中如何贯彻执行伦理原则依然存在诸多困惑。研究证实,降低多胎妊娠的根本性防控措施是施行单胚胎移植,基于此,从伦理学角度,对单胎移植能否解决医源性多胎妊娠进行探讨。

辅助生殖技术实施后随访系统建立

1978年人类第1例试管婴儿诞生至今,仅37年。作为一个新兴学科,辅助生殖技术还有许多问题值得研究。辅助生殖技术的很多数据,如妊娠率、种植率和活产率,不仅医疗机构和医务工作者关心,不孕不育夫妇也非常关心。临床实践表明,辅助生殖技术实施后建立随访系统意义重大。如何建立标准化的随访系统是值得关注的话题。随着技术不断发展,追求的目的也在改变,例如从妊娠率到生育一个健康孩子,从短期随访到长期随访,从表面的数字到发现数字后面的真实问题等。同时目前各国在辅助生殖技术实施后随访系统的建立还是存在差别的。介绍我国和国外辅助生殖技术实施后随访系统及其临床应用情况。

辅助生殖技术中基因印迹分析

人类辅助生殖临床数据已经显示,辅助生殖技术(ART)与自发流产、早产和围生期死亡、低体质量儿以及一些印迹疾病有关。在配子及胚胎早期发育过程中,基因印迹需经历印迹擦除、重建和维持过程,其中任何一个环节出错都可能导致胚胎发育缺陷,甚至死亡。ART恰施于这一表观遗传重编程的关键时期。因此,这些异常结局可能与ART导致的印迹基因的异常表达有关。而ART中主要的治疗手段有促排卵、体外受精、胞浆内单精子注射(ICSI)和体外培养。这些操作通过干扰基因印迹的重建和维持,影响基因表达和表型,进而影响配子和早期胚胎的发育,从而影响子代的生长发育潜能。

辅助生殖技术中患者知情同意内容的现状分析

患者知情同意原则是辅助生殖技术的首要原则,也是保护患者和医务工作者双方利益的重要举措之一。本文主要对体外受精-胚胎移植、配子/胚胎冷冻保存、胚胎植入前遗传学诊断、配子/胚胎用于科研等方面的知情同意内容进行了国内外研究现状分析,提出了目前国内知情同意书存在的一些问题,并对卫生部公布的辅助生殖技术知情同意书参考样式提出了一些意见和建议,旨在促进辅助生殖技术知情同意书的完善,切实维护医患双方的实际利益。

选择性单囊胚移植与双卵裂胚移植的临床结局比较

多胎妊娠被视为人类辅助生殖技术（assisted reproduc tivetechnology，ART）中的一种并发症、而不是成功的助孕结局。研究证实，降低多胎妊娠的最佳手段是单胚胎移植，而单囊胚移植的临床妊娠率明显高于单卵裂期胚胎移植。这提示囊胚可能是实现单胚胎移植的理想时期。

应用激光从完全不动精子中筛选存活精子行ICSI后获临床妊娠:附2例报告

目的:探讨应用激光筛选存活精子的可行性及临床应用价值。方法:对2例完全不动的精子(1例睾丸穿刺取精和1例射出精液),用激光射击精子尾部,选择激光射击后卷尾的精子用于卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)。结果:2例患者用激光选择的精子行ICSI后,平均受精率达88.89%,新鲜周期移植后,两者均获得了临床妊娠。结论:激光是筛选存活精子的有效方法,临床应用可获得理想的妊娠结局。

精子形态对体外受精-胚胎移植治疗结局及新生儿的影响

目的:探讨正常形态精子百分率对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局及新生儿的影响。方法:采用WHO严格标准法将精液标本分为3组:中度畸形组:正常形态精子百分率5%～10%,轻度畸形组:10%<正常形态精子百分率<15%,正常组:正常形态精子百分率≥15%,比较各组间正常受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率及新生儿情况。结果:各组间患者年龄(男、女方)差异不显著(P>0.05);中度畸形组正常受精率显著低于轻度畸形组(63.70%vs73.74%,P<0.05),但与正常组差异无统计学意义(63.70%vs68.05%,P>0.05);正常组的优质胚胎率最高,显著高于中度畸形组(44.83%vs35.75%,P<0.05),其他各指标3组间差异无统计学意义(P>0.05);280个移植周期共分娩125个婴儿,其中单胎分娩73例,双胎分娩26例,出生婴儿未见先天异常,3组间流产率、异位妊娠率、孕周、早产率、出生体重差异无统计学意义(P>0.05)。结论:正常形态精子百分率为5%～10%对常规体外受精的受精率无影响,但显著降低优质胚胎率,而10%<正常形态精子百分率<15%对常规体外受精治疗结局的各项指标均无明显影响;正常形态精子百分率在预测IVF-ET的助孕结局及新生儿情况方面存在一定局限性。

选择性单囊胚移植在降低多胎率中的应用

目的:探讨选择性囊胚培养与单囊胚移植(eBC-SBT)对妊娠结局、多胎妊娠率和单卵双胎率的影响。方法:按实施选择性囊胚培养与单囊胚移植技术的前、后,分为干预组(对预后良好、高危多胎妊娠风险的患者建议行选择性囊胚培养,自愿者行囊胚培养,其余患者于第3天移植)和非干预组(全部患者移植第3天卵裂期胚胎)。第5天或第6天对接受eBC-SBT患者的囊胚进行评级,评为BB及其以上级别的囊胚,予单囊胚移植;评为BC及以下级别的囊胚,予双囊胚移植。分析eBC-SBT对种植率、临床妊娠率、多胎率及单卵双胎率等的影响。结果:①干预组和非干预组患者的年龄、获卵数及受精率差异无统计学意义(P>0.05),干预后移植胚胎数降低([1.60±0.56)vs(.2.17±0.51),P<0.01],种植率(33.75%vs.25.69%)和临床妊娠率(47.31%vs.40.84%)均提高(P<0.05),多胎率降低(15.38%vs.29.37%,P<0.01)。②干预后,选择性单囊胚移植组移植胚胎数低于卵裂期胚胎移植组([1.09±0.28)vs(.1.96±0.40),P<0.01],前者种植率提高(43.99%vs.30.18%,P<0.01),2组临床妊娠率差异无统计学意义(47.35%vs.47.29%,P>0.05),但多胎率降低(0.86%vs.24.59%,P<0.01)。③干预组和非干预组的单卵双胎发生率差异无统计学意义(1.32%vs.1.67%,P>0.05)。在干预组中,选择性单囊胚移植患者的单卵双胎率与卵裂期胚胎移植组的差异亦无统计学意义(2.59%vs.1.09%,P>0.05)。结论:eBC-SBT能显著降低多胎率,有效维持总体临床妊娠率,且未见单卵双胎率异常增高。

不同受精方式对选择性囊胚培养结局的影响

目的:探讨不同受精方式对选择性囊胚培养结局的影响。方法:回顾性分析2009年1月至2012年12月在我中心接受囊胚培养的IVF组1 153个周期和ICSI组205个周期的囊胚培养结局。结果:IVF组和ICSI组分别有14 748和2 655枚胚胎进行序贯囊胚培养,两组均无因无囊胚可移植而取消周期。IVF组共形成7 871枚囊胚,ICSI组形成1 210枚囊胚;IVF组的优胚率、囊胚形成率和胚胎利用率均显著高于ICSI组(64.77%vs 58.72%,53.37%vs 45.57%,60.06%vs 52.17%,P均<0.05);但IVF组与ICSI组种植率(48.94%vs51.43%)、临床妊娠率(49.03%vs 52.02%)和流产率(11.69%vs 15.56)均无显著差异(P均>0.05)。结论:在同样的选择性囊胚培养纳入标准下,IVF相比于ICSI行囊胚培养的囊胚形成率和胚胎利用率更高,因无囊胚移植取消周期的风险相对更小。针对不同的受精方式可能需要制定相应的选择性囊胚培养纳入标准。

精卵孵育时间对胚胎质量的影响

目的比较体外受精中精卵孵育不同时间(短时与过夜)对胚胎质量的影响。方法共55个体外受精(IVF)周期常规促排卵,获卵649枚。将116枚卵子作为短时受精组,精卵孵育2h后将卵子转移至新鲜培养基中;533枚卵子作为常规受精组,精卵孵育18h;比较两组的受精率、卵裂率及优质胚胎率。结果缩时受精组的受精率为75.0%、卵裂率为97.7%、优质胚胎率为55.3%,常规受精组分别为73.7%、95.9%、44.6%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05),但短时受精组的优质胚胎率高于常规受精组。结论缩短精卵孵育时间不影响受精及卵裂,相反能提高胚胎质量,从而提高胚胎的种植潜能。

细胞松弛素B和解冻方法对玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响

【目的】探讨细胞松弛素B和解冻程序对玻璃微细管法(GMP)玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的影响。【方法】以小鼠MII期卵母细胞为模型,研究冷冻前细胞松弛素B预处理、不同解冻程序对小鼠卵母细胞冷冻效果的影响;随后对经GMP玻璃化冷冻的卵母细胞直接进行培养以检测冷冻是否诱发孤雌发育。【结果】与对照组相比,细胞松弛素B预处理的卵母细胞存活率、受精率、卵裂率及囊胚率没有显著差异(89.3%vs91.3%,44.0%vs40.4%,30.0%vs27.7%,4.0%vs6.4%;P>0.05);采用连续浓度梯度递减解冻法的受精率明显高于间断浓度梯度递减解冻法(57.4%vs40.4%;P<0.05),且前者的卵裂率和囊胚发育率也相对较高(40.2%vs27.7%,14.5%vs6.4%;P>0.05)。冷冻复苏后卵母细胞的孤雌发育率稍高于未经冷冻的卵母细胞(17.1%vs3.2%;P>0.05)。【结论】细胞松弛素B预处理对MII期小鼠卵母细胞的GMP玻璃化冷冻保存效果没有影响;采用连续浓度梯度递减解冻法能明显提高复苏后卵母细胞的体外发育能力。

不同促排卵启动时机对IVF-ET的影响

目的:探讨黄体中期应用长效促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)控制性超促排卵的启动时机对体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)结局的影响。方法:分析2008年1～12月黄体中期应用长效GnRH-a1.25mg单次肌内注射实施控制性超促排卵的IVF-ET129例,根据降调节14d前后的不同启动时间段分两组,比较不同启动时机的促排卵效果及其对体外受精结局的影响。结果:两组卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、种植率对比,差异均无统计学意义(P>0.05),而降调节≥14d启动组启动日的促黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)值较低,用药时间较短,用药剂量较少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在控制性超促排卵过程中,个体化用药有助于提高IVF-ET的结局。GnRH-a降调节后延迟启动时机有利于降低用药剂量及用药时间,继而可以减轻患者的经济负担和精神压力。

降低体外受精-胚胎移植多胎妊娠的策略及效果分析

目的:研究选择性囊胚培养与单囊胚移植(eBC-SBT)降低多胎率的作用。方法:对2009年1月—2010年12月收治行体外受精/胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)助孕,评估预后较好且高危双胎妊娠风险患者进行一对一知情告知,根据患者的意愿分为单囊胚移植组和卵裂胚移植组,分析2组间的种植率、临床妊娠率、多胎率及单卵双胎率等指标,同时对干预前、干预后总体的种植率、临床妊娠率、多胎率进行研究。结果:①囊胚移植组与卵裂胚移植组间患者年龄、胚胎冷冻率差异无统计学意义(P>0.05),但单囊胚移植较双卵裂期胚胎移植(ET)的种植率更高(52.4%vs.43.4%,P<0.05),尽管临床妊娠率有所降低(52.4%vs.60.1%,P>0.05),但前者的多胎率明显降低(3.3%vs.44.2%,P<0.05),早产率、低体质量儿出生率降低(P<0.01),足月单胎活产率提高(P<0.01)。②干预前、干预后2组间患者的平均年龄、获卵数和冷冻率差异均无统计学意义(P>0.05),干预后移植胚胎数显著下降。胚胎种植率(26.2%vs.34.6%,P<0.01)、总体临床妊娠率(42.4%vs.47.1%,P<0.05)及活胎分娩率(30.6%vs.38.0%,P<0.01)提高,而多胎妊娠率(30.9%vs.17.3%,P<0.01)和低体质量儿出生率(30.7%vs.24.0%,P<0.05)显著降低。结论:选择性囊胚培养与单囊胚移植能在有效维持总体临床妊娠率的前提下显著降低IVF-ET的多胎率,改善妊娠结局。

小剂量长效GnRH-a黄体中期卵巢刺激方案的临床效果分析

目的:探讨小剂量长效促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)黄体中期控制性卵巢刺激方案临床效果及对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的影响。方法:回顾性分析行IVF-ET治疗的患者资料,按照黄体中期使用的GnRH-a剂量不同分为两组,1组GnRH-a用量为1.25mg(1/3支),共154周期;2组GnRH-a用量为0.94mg(1/4支),共100周期,比较临床效果和IVF-ET结局。结果:两组对象卵巢刺激的时间及用药量比较差异无统计学意义(P>0.05),启动日及人绒毛膜促性腺激素(hCG)日卵泡?素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌激素(E2)、孕激素(P)等水平两组差异无统计学意义(P>0.05)。两组启动日未达降调节标准比率差异有统计学意义(3.25%与10.00%,P<0.05),hCG日LH>5.0U/L的比率差异有统计学意义(1.95%与9.00%,P<0.05)。两组卵巢过度刺激综合征发生率差异无统计学意义(3.90%与7.00%,P>0.05);获卵数、优质胚胎率两组差异无统计学意义(P>0.05),1组的正常受精率较2组高,差异有统计学意义(P<0.05),移植周期妊娠率差异无统计学意义(57.33%与46.88%,P>0.05);胚胎种植率、早期流产率两组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1.25mg与0.94mg剂量GnRH-a在黄体中期控制性卵巢刺激方案中,可以得到几乎相同妊娠结局,对于卵巢正常反应的人群,1.25mg剂量的效果更好些。

GMP玻璃化冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外发育能力的影响

将体外成熟(IVM)24h的水牛卵母细胞随机分成对照组、冷冻剂毒性试验组、GMP玻璃化冷冻组,研究玻璃微细管法(GMP)冷冻对水牛MⅡ期卵母细胞冷冻损伤和体外受精后发育能力的影响。结果表明:冷冻剂毒性试验组的存活率显著高于GMP玻璃化冷冻组;在透明带消化时间上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著高于对照组。在单精入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组显著低于对照组;在无精子入卵率上,冷冻剂毒性试验组和GMP玻璃化冷冻组与对照组差异显著;而多精入卵率3组间差异不显著。卵母细胞冷冻后进行体外受精,3组之间的2-细胞率,8-细胞率和桑椹胚率差异均极显著。表明冷冻剂和GMP玻璃化冷冻均会引起水牛MⅡ期卵母细胞透明带硬化,降低精子穿透率和其体外受精的发育能力。

3种玻璃化冷冻液对水牛MII期卵母细胞冷冻-解冻后体外发育的影响

本试验主要探索了3种玻璃化冷冻液对水牛MII期卵母细胞冷冻-解冻后体外发育的影响。水牛MII期卵母细胞经3组玻璃化冷冻液(Ⅰ:20%乙二醇(EG)+20%二甲基亚砜(DMSO);Ⅱ:20%EG+20%丙二醇(PROH);Ⅲ:20%EG+20%PROH+10%DMSO)毒性试验后,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组体外受精的分裂率、8-细胞率和囊胚率之间差异不显著(P>0.05),分裂率均显著低于对照组(P<0.05),但Ⅱ组8-细胞以后的发育潜力跟对照组无显著差异(P>0.05)。进一步比较了3组玻璃化冷冻液对卵母细胞的玻璃化冷冻效果。卵子解冻后进行体外受精后,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的发育潜力均显著低于对照组(P<0.05),各组的8-细胞率和囊胚率之间无显著差异(P>0.05),但Ⅱ组卵裂率明显高于Ⅰ组(24.8±4.6%vs12.7±1.5%,P<0.05)。结果表明,3种冷冻玻璃化保护液均可用于冷冻水牛MII期卵母细胞,其中Ⅱ组处理的卵母细胞体外受精效果相对较好。