基于十八年跨度的乙型肝炎病毒基因型I分子进化研究

目的 探索乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型I长期进化特征。方法 从广西隆安研究队列中选取已明确感染基因型I的HBsAg无症状携带者作为研究对象,检测其血清HBV标志物和病毒载量。使用酚氯仿法提取HBV DNA,采用巢式PCR扩增HBV全基因组,进行克隆测序,运用BioEdit、Mega等软件对测序结果进行生物信息学分析。结果 共纳入9名研究对象,获得279条全长基因序列。系统进化树分析结果显示,22.2%(2/9)的研究对象HBV基因型发生了转换,从基因型I1转换成基因型C1。2004年所有研究对象HBV毒株均发生X基因核心基因启动子(BCP)双突变(nt1762A→T/1764 G→A);88.9%(8/9)的研究对象HBV毒株发生PreC基因nt1896(G→A)终止密码突变。多数研究对象发生免疫逃避突变和耐药突变,共检出18种免疫逃逸突变和6种多重耐药突变。研究对象GD056、XW511、GA135、XX55、CZ647、TX119、WX058和YF201携带的毒株免疫逃逸突变率分别为:69.6%、7.5%、96.7%、94.4%、11.8%、4.7%、100.0%和100.0%;研究对象GA135、XW511、WX058、XX55、YF201、CZ647和TX119携带的毒株耐药突变率分别为:6.7%、2.5%、3.8%、50.0%、4.5%、2.9%和4.7%。66.7%、55.6%和44.4%的研究对象2004年和/或2022年携带的HBV毒株分别在PreS/S基因、X基因和PreC/C基因受到正向选择压力,所有研究对象携带的HBV毒株在P基因以负向选择压力占主导。结论 在自然感染进程中,HBV基因型I可以发生基因型转换,基因型I在一些常见的临床相关热点突变上突变率较高,部分毒株可出现免疫逃避突变和耐药突变,HBV基因组各个开放读码框所受的选择压力不相同。

2004—2015年广西甲型肝炎流行病学特征分析

目的了解广西甲型肝炎（简称甲肝） 的流行病学特征.方法采用描述性流行病学方法对广西2004-2015 年甲肝疫情监测资料进行分析.结果广西2004-2015 年甲肝发病率呈下降趋势,由2004 年的4.56/10 万,下降至2015 年的1.53/10 万,平均发病率2.90/10 万.发病率排前5 位的城市为贺州市、河池市、防城港市、桂林市、百色市.全年均有发病,5 月、6 月是发病高峰.15～50 岁人群病例较多,男女性别比2.23∶1,病例职业构成主要为农民、学生等.结论广西2004-2015 年甲肝发病率呈下降趋势,但仍需重视甲肝疫情,采取以切断传播途径为主的综合防控措施,有效遏制甲肝流行.

血清骨桥蛋白和肝癌的关系可能归因于乙型肝炎病毒慢性感染

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)感染是否增加血清骨桥蛋白(OPN)浓度及OPN与肝癌之间的关系。方法按病例对照研究原理,研究对象分为6个组:HBsAg无症状携带者组(ASC组)、HBsAg阳性慢性肝病组、HBsAg阳性肝癌组、HBsAg阴性其他肿瘤组、HBsAg阴性肝癌和慢性肝脏病组、健康对照组。用化学发光微粒子免疫检测法检测血清HBsAg浓度,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清OPN浓度,用Mann-Whitney U检验和线性回归分析法进行统计分析。结果6组研究对象共241名。HBsAg阳性肝癌组与HBsAg阴性其他肿瘤组、健康对照组血清OPN浓度差异均有统计学意义(P值均=0.0001)。在HBsAg阳性肝癌组与ASC组、HBsAg阳性慢性肝病组间,以及在HBsAg阴性肝癌和慢性肝脏病组与健康对照组间,血清OPN浓度差异均无统计学意义(P值分别为0.360、0.588和0.075)。多元线性回归分析结果显示,血清HBsAg浓度是与OPN浓度有关的唯一变量(P=0.0001)。结论血清OPN浓度可能与肝癌本身无关,而与HBV慢性感染有关,在HBV感染者中,可以用血清HBsAg浓度预测血清OPN浓度。

广西那坡县发现乙肝病毒新基因亚型D11

目的 2011年,在广西那坡县发现一例HBsAg阳性携带者,其所携带的HBV利用S基因序列分型法无法分型,本研究意在用全基因组分型法对其进行分型。方法为便于前后对比,除2011年血清标本外,还收集该携带者2018年的血清标本。检测前后2份标本HBV血清标志物和病毒载量,使用酚氯仿法提取HBV DNA,巢式PCR扩增HBV全基因组,将扩增产物进行克隆并测序。利用软件Mega 6.0、 Bioedit 7.0对测序结果进行分析。结果 2011年和2018年的2份标本HBsAg均为阳性, 2份标本的PCR产物分别获得15个克隆株。对获得的克隆株进行生物信息学分析发现, 2011年该携带者体内乙肝病毒基因型为B型、 D型以及未知基因型; 2018年该携带者体内乙肝病毒基因型仅为D型。30个克隆株中有23个单独聚集成簇, bootstrap值为100%,与D1-D10亚型间核苷酸的差异>4%。结论该携带者体内的HBV基因型为新基因亚型D11。

Toll样受体(TLR)基因多态性与华支睾吸虫易感性的关联研究

目的探索人类Toll样受体(TLR)基因多态性与华支睾吸虫易感性的关系。方法按照成组病例对照研究原理,采用单纯随机抽样方法,分别从宾阳县华支睾吸虫常规监测中发现的华支睾吸虫感染者和正常人群选取研究对象纳入华支睾吸虫感染组和正常对照组。采集研究对象静脉血5 mL,提取外周血基因组DNA,采用PCR扩增TLR2 rs3804099和rs3804100、TLR4 rs4986790和rs49867914个位点所在基因序列并测序。结果共纳入57名研究对象,其中华支睾吸虫感染组31名、正常对照组26名。TLR2基因rs3804099位点CC、CT、TT 3个基因型频率在华支睾吸虫感染组和正常对照组的差异均无统计学意义。TLR2基因rs3804100位点,华支睾吸虫感染组CT基因型频率(25.8%)低于对照组(72.7%)(χ^(2)=7.406,P=0.006),华支睾吸虫感染组TT基因型频率(71.0%)高于对照组(27.3%)(χ^(2)=6.068,P=0.014)。TLR2基因rs3804100位点TT基因型感染者大多数属于轻度感染(81.8%,18/22)。TLR4基因rs4986790位点、rs4986791位点在华支睾吸虫感染组和正常对照组基因型均完全相同,前者为AA基因型,后者为CC基因型。结论未发现TLR4基因rs4986790位点、rs4986791位点多态性与华支睾吸虫易感性有关。TLR2基因rs3804100位点多态性可能与华支睾吸虫易感性有关;该位点TT基因型者可能对华支睾吸虫更易感,CT基因型则可能对机体华支睾吸虫感染具有保护作用。

广西隆安县2006-2014年原发性肝癌回顾性调查研究

目的探讨广西隆安县原发性肝癌流行病学特征及危险因素。方法回顾性调查隆安县2006-2014年发病的原发性肝癌患者共2 170例,通过查阅纸质报告表、病案、肿瘤直报系统等方法收集其基本人口学资料、诊断与报告情况、乙肝病毒和丙肝病毒感染以及免疫接种情况,并对上述资料进行统计分析。结果病例以35岁以上中老年男性为主,平均年龄(57.22±14.61)岁,男女性别比为3.50∶1,壮族占绝大多数。2 170名研究对象中,457例(21.06%)患者乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)阳性,10例(0.46%)抗-丙肝病毒抗体(anti-hepatitis C virus Ig G,anti-HCV Ig G)阳性,3例HBs Ag和抗-HCV Ig G均为阳性。HBs Ag感染率为65.76%(457/695),丙肝病毒(hepatitis C virus,HCV)感染率为1.79%(10/558)。除24例研究对象乙肝疫苗接种史不详以外,其余均无乙肝疫苗接种史。2006-2014年粗发病率为60.50/10万,中国人口标化发病率为32.11/10万,世界人口标化发病率为43.60/10万。2012-2014年发病率出现逐年上升趋势。结论隆安县是肝癌高发区,且近年发病上升。乙肝病毒感染是隆安县肝癌发病主要危险因素之一。

华支睾吸虫排泄-分泌产物对小鼠巨噬细胞一氧化氮产生和核转录因子κB活化的影响

目的研究华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)排泄-分泌产物(ESPs)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7一氧化氮(NO)产生与核转录因子κB(NF-κB)活化的影响。方法用20μg/ml华支睾吸虫ESPs水溶性浓缩物及其有机溶剂提取物(ESPs-ex)和0.1μg/ml明尼苏达沙门氏杆菌脂多糖(LPS-SM)分别刺激RAW264.7细胞,未刺激对照组加入等量Hank’s平衡盐缓冲液(HBSS)。实验同时用0.3 mmol/L诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)抑制剂SMT作为干预。细胞培养18 h后,用Griess法检测各组细胞培养上清液NO2-浓度。将p Ni Fty2-SEAP质粒转染至4组刺激后RAW264.7细胞,培养18 h后,检测培养上清液中可溶性胚胎碱性磷酸酶(SEAP)的吸光度(A620值),倒置显微镜观察细胞内SEAP催化显色情况。结果经ESPs-ex和LPS-SM刺激后,细胞培养上清液中NO2-浓度分别为(14.30±1.62)和(14.10±2.17)μmol/L,均较未刺激对照组[(7.70±0.95)μmol/L]显著增加(P<0.05);加入SMT后,两组NO2-浓度显著下降,分别为(8.97±0.81)和(4.96±1.36)μmol/L(均P<0.05)。经ESPs刺激后,上清液中NO2-浓度为(4.06±0.62)μmol/L,较未刺激对照组显著降低(P<0.05);加入SMT后,NO2-浓度为(3.99±0.87)μmol/L,无明显变化(P>0.05)。ESPs刺激后,上清液SEAP的A620值为0.836±0.005,显著高于未刺激对照组(0.097±0.009)(P<0.05);镜下可见细胞内出现广泛、强烈的蓝色显色反应。ESPs-ex和LPS刺激后,上清液SEAP的A620值分别为0.112±0.004和0.116±0.009,略高于未刺激对照组(P>0.05);镜下见部分细胞内出现蓝色显色反应。结论华支睾吸虫ESPs能够促进RAW264.7细胞活化NF-κB,其水溶性浓缩物可抑制NO产生,ESPs-ex和LPS-SM可促进NO产生。

儿童IL6、IL12A/B、IL13基因DNA甲基化与乙型肝炎疫苗低应答水平的关联性

目的本研究旨在探讨广西壮族自治区汉族儿童白细胞介素6(interleukin 6, IL6)、白细胞介素12A/B(interleukin 12A/B, IL 12A/B)、白细胞介素13(interleukin 13, IL13)基因胞嘧啶-磷酸-鸟苷酸(cytosine-phosphoric-guanylic, CpG)位点DNA甲基化与乙型肝炎疫苗(hepatitis B vaccine, HepB)免疫应答水平的相关性。方法运用非匹配病例对照方法,把来自广西壮族自治区3家医院263名8~9月龄并已接种HepB的汉族儿童作为研究对象,按抗-HBs水平将<100 mIU/ml儿童作为病例组,≥100 mIU/ml儿童作为对照组。采用多重PCR技术、重亚硫酸盐测序和高通量测序等技术,分析研究IL6、IL12A/B和IL13基因85个位点DNA甲基化情况与HepB免疫应答水平的关系。结果病例组IL6基因117位点、IL12B基因103位点和IL13;基因167位点甲基化水平均高于对照组,IL12A基因85位点病例组甲基化水平低于对照组(均有P<0.05);非条件Logistic回归分析模型分析显示IL6基因117位点和IL13;基因167位点增加了HepB低应答的风险(OR=1.07, 95%CI:1.02~1.13;OR=1.04, 95%CI:1.00~1.07)。结论提示IL6基因117位点和IL13;基因167位点DNA甲基化修饰可能是广西壮族自治区汉族儿童HepB免疫反应低应答的危险因素。