鱼腥草对肝癌细胞生物学行为的影响及网络药理学分析

目的探讨鱼腥草(Herba Houttuyniae)对肝癌细胞生物学行为的影响及其潜在的分子机制。方法使用不同浓度的鱼腥草提取物处理肝癌细胞SMMC-7721和SK-Hep-1,利用CCK-8检测细胞的活力,使用Transwell实验检测肝癌细胞的迁移和侵袭能力,细胞免疫荧光实验检测转移相关蛋白MMP-9的表达情况,活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞ROS水平,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白表达水平。采用网络药理学筛选鱼腥草的活性成分并构建蛋白间相互作用(PPI)网络识别鱼腥草治疗肝癌的作用靶点,通过GO和KEGG通路富集分析探索与鱼腥草抗肝癌作用靶点相关的信号通路,利用qRT-PCR检测关键靶点的mRNA表达水平。结果CCK-8、Transwell、细胞免疫荧光实验结果显示鱼腥草提取物可抑制SMMC-7721和SK-Hep-1细胞的活力、迁移和侵袭能力以及转移相关蛋白MMP-9的表达(均P<0.05)。TUNEL染色、ROS检测、Western blot结果显示鱼腥草提取物可促进SMMC-7721和SK-Hep-1细胞凋亡及升高细胞中ROS水平和促凋亡蛋白BAX的表达水平(均P<0.05)。网络药理学预测鱼腥草治疗肝癌主要通过作用于TNF、AKT1、TP53等靶点,涉及癌症、TNF、PI3K-AKT等信号通路。qRT-PCR证实鱼腥草提取物可降低SMMC-7721和SK-Hep-1细胞中TNF-α、AKT1基因的mRNA表达水平,增加TP53基因的mRNA表达水平(均P<0.05)。结论鱼腥草可能通过调节TNF、AKT1、TP53等基因抑制肝癌细胞的细胞活力及迁移和侵袭能力,且促进肝癌细胞凋亡。

槐定碱对骨癌痛小鼠的影响及其作用机制

目的探讨槐定碱在骨癌痛小鼠中的影响及其作用机制。方法将24只C57BL/6小鼠随机分成假手术组(Sham组)、骨癌痛组(BCP组)、骨癌痛+生理盐水组(BCP+NS组)、骨癌痛+槐定碱组(BCP+Sophoridine组,25 mg/kg)。分别于癌细胞接种前1 d以及接种后3 d、5 d、7 d、10 d和14 d时检测机械缩足阈值和热痛阈值;Western blot法检测脊髓L4-L5段背根神经节和大脑皮层组织中DAP12/Trem2/TLR4轴相关蛋白的表达水平。结果与Sham组相比,在术后5 d、7 d、10 d、14 d,BCP组机械缩足阈值及热痛阈值均明显降低(均P<0.05)。与BCP组相比,在术后5 d、7 d、10 d、14 d,BCP+Sophoridine组的热痛阈值均明显升高(均P<0.05);术后10 d、14 d,BCP+Sophoridine组机械缩足阈值均明显升高(均P<0.05)。Western blot实验结果显示,与BCP组相比,BCP+Sophoridine组小鼠背根神经节和大脑皮层组织中的TLR4蛋白表达水平均显著减少(均P<0.05),DAP12、Trem2蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)。结论槐定碱可减轻骨癌痛小鼠癌痛行为,其机制可能与调控DAP12/Trem2/TLR4轴有关。

维生素D类似物通过激活VDR/GPX4通路改善小鼠呼吸机相关性肺损伤

目的研究维生素D类似物paricalcitol激活维生素D受体/谷胱甘肽过氧化物酶4(VDR/GPX4)通路在呼吸机相关性肺损伤(VILI)中的作用。方法将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、大潮气量(HVT)致VILI模型组(HVT组)、paricalcitol对照组(P组)和paricalcitol预处理组(P+HVT组),每组6只。给予小鼠气管插管,按40 mL/kg的潮气量通气制备VILI模型;对照组仅气管插管,不予通气。P+HVT组小鼠于制模前1周腹腔注射paricalcitol 0.2μg/kg,每日1次;P组仅在实验前1周腹腔注射paricalcitol 0.2μg/kg,每日1次。通气4 h后处死小鼠取肺组织,通过肺湿/干质量(W/D)比值、苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色评价肺损伤情况;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和免疫组化法检测VDR、GPX4的表达;采用微量法检测丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果HVT通气4 h后小鼠出现明显肺损伤,表现为:与对照组相比,肺损伤评分和肺W/D比值明显升高〔肺损伤评分(分):0.430±0.035比0.097±0.025,肺W/D比值:4.860±0.337比3.653±0.332,均P<0.05〕,胶原纤维沉积明显增加,且肺组织MDA含量明显升高(nmol/g:212.420±8.757比97.073±5.308,P<0.05),GSH含量及VDR、GPX4的蛋白表达和免疫组化评分(IRS)明显降低〔GSH(μg/g):44.229±1.690比70.840±0.781;VDR蛋白(VDR/GAPDH):0.518±0.029比0.762±0.081,GPX4蛋白(GPX4/GAPDH):0.452±0.032比0.649±0.034;IRS评分(分):VDR为4.168±0.408比10.167±0.408,GPX4为4.333±1.033比10.333±0.516;均P<0.05〕。给予paricalcitol激活VDR后,与HVT组相比,P+HVT组小鼠肺损伤明显改善,表现为肺损伤评分和肺W/D比值明显降低〔肺损伤评分(分):0.220±0.036比0.430±0.035,肺W/D比值:4.015±0.074比4.860±0.337,均P<0.05〕,胶原纤维沉积减少,且肺组织MDA含量明显下降(nmol/g:123.840±8.082比212.420±8.757,P<0.05),GSH含量及VDR、GPX4的蛋白表达和IRS评分明显上调〔GSH(μg/g):63.094±0.992比44.229±1.690;VDR蛋白(VDR/GAPDH):0.713±0.056比0.518±0.029,GPX4蛋白(GPX4/GAPDH):0.605±0.008比0.452±0.032;IRS评分(分):VDR为9.000±0.632比4.168±0.408,GPX4为8.833±0.408比4.333±1.033;均P<0.05〕。结论维生素D类似物paricalcitol可通过激活VDR/GPX4通路改善肺组织氧化还原失衡,从而减轻VILI。